实验二 Folin-Wu法定量测定血糖的含量
一、实验目的
1、掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。
2、学会制备无蛋白血滤液。
3、掌握7200型可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理
葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。
无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物 。
血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。
三、实验仪器
1、25mL血糖管×3支；
2、100mL锥形瓶×2个；
3、漏斗架×1个；
4、普通漏斗×2个；
5、水浴锅×1个；
8、电炉×1个；
9、移液管 1mL×2支; 2mL×3支;5 mL×2支;10 mL×1支;
10、滤纸×1盒；
12、7200型分光光度计×1台;
四、实验试剂
1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）
2、10%钨酸钠溶液
3、0.33mol/LH2SO4溶液
4、碱性硫酸铜溶液
5、酸性钼酸盐溶液：
五、实验步骤
1、无蛋白血滤液的制备：
用奥氏吸管吸取全血（已加抗凝剂）1ml,缓缓放入100ml锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。
再加0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀，放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可再加0.33mol/L H2SO41-2滴）。
用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部倒入，如滤液不清需重新过滤。每毫升无蛋白血滤液相当于1/10ml全血。
2、血糖的定量测定：
取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸馏水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液，同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后,勿摇动，各加4ml酸性钼酸盐溶液。
一分钟后，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用7200分光光度计在420nm波长处比色，以空白管调节零点。
六、结果计算：
按下式计算100ml全血中所含血糖的含量
m=A1/A0×C0÷0.1×100
式中: m=100ml全血中含血糖毫克数 ; C0=标准液葡萄糖含量（0.1mg/ml）；A1=样品液光吸收值 ; A0=标准液光吸收值； 0.1：1ml无蛋白血溶液相对于0.1ml全血
则100ml全血中所含血糖的含量：m=0.352÷0.112×0.1mg/ml÷0.1×100=314.2857mg
七、实验分析
1、实验过程中那些操作可能影响实验结果的准确性？
答：移取血液时；加硫酸、钨酸钠时；滤纸过滤时；蒸馏水稀释时
2、实验中，血糖管有什么作用？
答：血糖管下部分管径较细，以避免还原生成的氧化亚铜被空气中的氧再氧化，降低实际结果
3、实验过程中，为什么要用流水冷却加入碱性硫酸铜液反应后的血糖管？
答：因为用流水冷却加入碱性硫酸铜液反应后的血糖管可以让血糖管里的溶液尽快地稳定下来，防止里面的溶液出现凝固
注意事项
1.加硫酸、钨酸钠时，要边加边摇匀
2.沉淀由鲜红变为暗棕色，是因钨酸钠与硫酸生成钨酸，在适当酸度时，使血红蛋白变性沉淀，如果沉淀不变暗棕色或重新过滤后仍混浊，
是因为血液中所加抗凝剂过多，可以加入10％硫酸1-2滴，待暗棕色后再过滤。
3.用定量滤纸过滤后应该得到完全澄清无色之无蛋白血滤液。 如果得到仍带有红色的血滤液则说明蛋白质未被完全去除。
第二篇：Folin-Wu法定量测定血糖的含量
血糖含量的定量测定(Folin-Wu法)
一、目的
1、掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。
2、学会制备无蛋白血滤液。
3、掌握7200型可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理
葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基， ，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。
无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物—钼蓝 。
血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。
三、实验仪器
1、25mL血糖管×3支；
2、血糖管橡胶塞×3个；
3、1mL胖肚吸管×1支；
4、100mL锥形瓶×2个；
5、漏斗架×1个；
6、普通漏斗×2个；
7、水浴锅×1个；
8、电炉×1个；
9、移液管 1mL×2支; 2mL×3支;5 mL×2支;
10 mL×1支; 10、滤纸×1盒；
11、吸耳球×2个；
12、7200型分光光度计×1台;
13、表面皿×1个
四、实验试剂
1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）
(1)1%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。
(2)葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。
2、碱性硫酸铜溶液
A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g及碳酸氢钠11g溶于蒸馏水，稀释定容至1000ml.
B液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
临用时，A液：B液=9：1混合（体积比），混合液于冰箱中保存（4℃）。 3、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。 4、0.33mol/LH2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。
5、酸性钼酸盐溶液：
称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml 的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀，静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。
置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。
五、实验步骤
1、无蛋白血滤液的制备：
氏吸管吸取全血（已加抗凝剂）1ml,缓缓放入100ml锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。
再加0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀，放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可再加0.33mol/L H2SO41-2滴）。
用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部倒入，如滤液不清需重新过滤。每毫升无蛋白血滤液相当于1/10ml全血。
2、血糖的定量测定：
1、取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸馏水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
2、然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液，同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后,勿摇动，各加4ml酸性钼酸盐溶液。
3、一分钟后，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用7200分光光度计在420nm波长处比色，以空白管调节零点。
六、实验结果
m代表100ml全血中含血糖毫克数
C0代表标准液葡萄糖含量（0.1mg/ml）
A1代表样品液光吸收值
A0代表标准液光吸收值
所以可得出m=0.184/0.131*0.1*10*100=140.4580153···约等于140.458mg。
七、实验分析
1、实验过程中哪些操作可能影响实验结果的准确性？
在沉淀不完全时过滤，吸管中放出血液太快使大量血液黏在吸管内壁，或有亚铜离子氧化成铜离子，比色测量时也可能会出现误差。
2、实验中，血糖管有什么作用？
可减少亚铜离子与空气的接触，防止氧化成铜离子。
3、实验过程中，为什么要用流水冷却加入碱性硫酸铜液反应后的血糖管？
流水冷却比较稳定，可以迅速降温。如不冷却会继续反应造成误差。