标准操作程序（SOP）

冠县辛集中心卫生院艾滋病实验室

一、目的

本SOP规定了HIV₁₊₂抗体初筛报告程序

二、范围

HIV₁₊₂抗体检测报告。

三、责任

实验室操作人员严格按要求执行。

四、定义

无

五、背景

    需要按照《全国艾滋病检测技术规范》的报告程序进行。

六、程序 

1.           筛查检测流程图

 

2.   根据检测结果，经认真核对后由检测者填写报告单。

3.   如果检测结果为阴性，可以出具阴性报告。

4.        检测者在检测报告单上签字。

5.        签发人审核后在检测报告单上签字。

6.        将报告单交给咨询组，做好结果的记录。

7.        做好检测后的咨询工作，告知时要注意是否存在窗口期的可能性。

8.        如果初筛检测结果为阳性，立即填写初筛阳性血清送检单，送到确认实验室确认。

9.        报告只能出具“待复查”的报告。

10.    由实验室负责人审核后交给咨询人员，要做好相关咨询工作。

（二）检测结果的保密

1.      检测结果不得透露给与工作无关的人员。

2.      实验记录及检测报告的存底必须妥善放置到文件柜中，并上锁。

七、复查和修订

每年复查、修订一次。

八、参考文件

      无

九、相关文件

   全国艾滋病检测技术规范

十、附件

       无

第二篇：关于HIV(1+2)抗体检测常规标准操作程序

某某单位

关于HIV(1+2)抗体检测常规标准操作程序

编号：HIV/SOP/201101

编写日期：20xx年01月01日

编写人（签名）：

1 设备和材料

1.1新创HIV试剂 （双抗原夹心法）

工作原理：在微孔条上预包被的高纯度基因重组HIV（1+2）型抗原，可与样品中的抗HIV抗体反应，同时加入HRP标记HIV（1+2）型抗原，然后用TMB底物作用显色。通过酶标仪检测吸光度（OD值）从而判定HIV抗体是否存在。

工作流程 ： 取出试剂盒放室温平衡15-30分钟

设计加样蓝图

加入20ul稀释液

接着加入阴阳性对照100ul，阳性对照2孔，阴性对照3孔，外部

质控2孔，空白2孔

再加入100uL待测标本

混匀，盖上贴膜、37℃孵育、60分钟

配制洗板缓冲液

揭去盖膜、洗板6次，拍干

加入酶联试剂 100ul

混匀，盖上贴膜、37℃孵育、30分钟

揭去盖膜、洗板6次，拍干

每孔加入底物缓冲液50ul，TMB50ul,轻轻摇匀

在37℃避光温育15分钟

加入2M硫酸1滴50ul终止反应

读数、计算结果。

1.2 37℃恒温水欲箱

1.3 科华ST-360酶标仪

科华ST-36W洗板机

1.4 移液器及吸头

1.5 量器：1000ML量筒、吸管等

1.6 蒸馏水

1.7 吸水纸

1.8 消毒剂：75%酒精、次卤酸钠

2 准备

2.1 将试剂盒和标本从冰箱中取出，置室温平衡30分钟。

2.2 仔细阅读说明书，根据待测标本数和试剂盒要求的对照数设计加样的位置和顺序，

做好加样蓝图，并注意预留外部对照位置。

2.3 仔细检查水浴箱的温度是否为37±1℃，以及移液器的准确性。

3 操作

3.1 按照试剂盒说明书规定的操作步骤进行检测。注意洗液和酶标结合物工作液的配制、

临界值计算公式、内部对照成立条件等的不同要求。试剂说明书要统一集中保管。

3.2 加标本和质控时，注意把冻溶或长期存放的标本加样前应混匀，有絮状沉淀时应

离心取上清液。

3.3 每次实验应包括3个阴性对照、2个阳性对照、2个空白对照和2个外部质控。

3.4 所有使用过的吸头要放入盛有消毒剂的容器内。

3.5 未用完的试剂条板应置于密封袋内，注明开封时间， 2~8℃条件下可保存8周。

3.6 洗板缓冲液配制

将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水按1 ：19稀释。稀释后的缓冲液在室温下可保存2周。

3.7 洗板（程序见ST-360/SOP/001）

所有废液均要置于含消毒剂的废液瓶中。

一共洗涤5遍，每次浸泡10秒。

最后一次吸出后，在吸水纸上拍打，去除残留液体。

3.8 显色

每孔加入底物缓冲液，TMB各1滴（50ul），轻轻震荡摇匀，37℃避光显色15分钟。加

2M硫酸终止液1滴，轻轻摇匀。

3.9 读数（程序见ST-36W/SOP/002）

终止显色后应尽快读数，酶标仪读数选用双波长450nm和630nm检测。

3.10 计算结果 每块板需分别计算

3.10.1 临界值（CUTOFF）计算：

抗HIV阳性对照OD值＞0．8，抗HIV阴性对照OD值＜0．8。

Cutoff Value=阳性对照×10%（若阳性对照 OD值＞2．5按2．5计算）

3.10.2 计算标本的S/CO值

S：标本的吸光度值（OD） CO：临界值

3.10.3 判定阴、阳性结果

标本OD值≤Cutoff Value值为阴性。

标本OD值＞Cutoff Value值为阳性。

3.11 填写“HIV抗体ELISA检测记录”。

同时注明试剂的名称、批号及有效期。

4 报告

检测的阴性结果报告为阴性。可疑和阳性结果要用两种试剂双孔复检，同时阳性可报告为阳性。

5 完成试验

5.1 未用完的试剂盒放回冰箱。

5.2 关闭酶标仪和洗板机。

5.3 处理各种废物，清理和消毒工作区（见HIV/SOP/002）

5.4 保存标本（见HIV/SOP/003）

6 附录

6.1 厂商使用说明书。

6.2 HIV抗体ELISA检测记录表。

本次HIV新创试剂 批号：

有效期至：

本次SOP修订日期：20xx年04月18日

修订人(签名)：

复核人(签名)：

某某单位

关于HIV(1+2)抗体检测常规标准操作程序

编号：HIV/SOP/201102

编写日期：20xx年01月01日

编写人（签名）：

1 设备和材料

1.1万泰HIV试剂 （双抗原夹心法）

工作原理：在微孔条上预包被的高纯度基因重组HIV（1+2）型抗原，可与样品中的抗HIV抗体反应，同时加入HRP标记HIV（1+2）型抗原，然后用TMB底物作用显色。通过酶标仪检测吸光度（OD值）从而判定HIV抗体是否存在。

工作流程 ： 取出试剂盒放室温平衡15-30分钟

设计加样蓝图

每板应设阴性对照3孔、阳性对照2孔、空白2孔、外部质控2孔。

加入100uL待测标本

混匀，盖上贴膜、37℃孵育、60分钟

配制洗板缓冲液

揭去盖膜、洗板6次，拍干

每孔加入酶标试剂100ul,空白孔除外，

混匀，盖上贴膜、37℃孵育、30分钟

揭去盖膜、洗板6次，拍干

加入显色剂A、B，轻轻摇匀

在37℃避光温育30分钟

加入2M硫酸1滴50ul终止反应

读数、计算结果。

1.9 37℃恒温水欲箱

1.10 科华ST-360酶标仪

科华ST-36W洗板机

1.11 移液器及吸头

1.12 量器：1000ML量筒、吸管等

1.13 蒸馏水

1.14 吸水纸

1.15 消毒剂：75%酒精、次卤酸钠

2 准备

2.1 将试剂盒和标本从冰箱中取出，置室温平衡30分钟。

2.2 仔细阅读说明书，根据待测标本数和试剂盒要求的对照数设计加样的位置和顺序，

做好加样蓝图，并注意预留外部对照位置。

2.3 仔细检查水浴箱的温度是否为37±1℃，以及移液器的准确性。

3 操作

3.1 按照试剂盒说明书规定的操作步骤进行检测。注意洗液和酶标结合物工作液的配制、

临界值计算公式、内部对照成立条件等的不同要求。试剂说明书要统一集中保管。

6.3 加标本和质控时，注意把冻溶或长期存放的标本加样前应混匀，有絮状沉淀时应

离心取上清液。

6.4 每次实验应包括3个阴性对照、2个阳性对照、1个空白对照和1个外部质控。

6.5 所有使用过的吸头要放入盛有消毒剂的容器内。

6.6 未用完的试剂条板应置于密封袋内，注明开封时间， 2~8℃条件下可保存8周。

6.7 洗板缓冲液配制

将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水按1 ：24稀释。稀释后的缓冲液在室温下可保存2周。

3.7 洗板（程序见ST-36W/SOP/001）

所有废液均要置于含消毒剂的废液瓶中。

一共洗涤6遍，每次浸泡10秒。

最后一次吸出后，在吸水纸上拍打，去除残留液体。

3.8 显色

每孔加入显色剂A、B液各1滴（50ul），轻轻震荡摇匀，37℃避光显色30分钟。加2M

硫酸终止液1滴，轻轻摇匀。

3.9 读数（程序见ST-360/SOP/002）

终止显色后应尽快读数，酶标仪读数选用双波长450nm和630nm检测。

3.10 计算结果 每块板需分别计算

3.10.1 临界值（CUTOFF）计算：

正常情况下，阴性对照孔OD值≤0．1。

正常情况下，阳性对照孔OD值≥0．8

临界值=阴性对照孔OD均值+0．12

3.10.2 计算标本的S/CO值

S：标本的吸光度值（OD） CO：临界值

3.10.3 判定阴、阳性结果

样品OD值≥CO值为阳性。

样品OD值＜CO值为阴性。

3.11 填写“HIV抗体ELISA检测记录”。

同时注明试剂的名称、批号及有效期。

7 报告

检测的阴性结果报告为阴性。可疑和阳性结果要用两种试剂双孔复检，同时阳性可报告为阳性。

8 完成试验

5.1 未用完的试剂盒放回冰箱。

5.2 关闭酶标仪和洗板机。

5.3 处理各种废物，清理和消毒工作区（见HIV/SOP/002）

5.4 保存标本（见HIV/SOP/003）

9 附录

6.1 厂商使用说明书。

9.2 HIV抗体ELISA检测记录表。

本次HIV万泰试剂 批号：

有效期至：

本次SOP修订日期：20xx年04月18日

修订人(签名)：

复核人(签名)：

某某单位

洗板机（科华ST-36W）标准操作程序

编号：ST-36W/SOP/001

一、 开机前准备

1、 按试剂说明书配制好清洗液装入洗液瓶中，并确保倒空废液瓶中的废液。

2、 检查液体管道的连接是否正确以避免渗漏。

3、 检查电源的连接是否正确以避免发生意外。

二、 开机、洗板

1、插上电源，打开电源开关。

2、按“编程”键和“确定”键选择洗板机参数。

3、选择好洗板头、条数、各孔洗液量、浸泡时间、间隔时间、洗板次数等参数。

4、按“返回”键，仪器到准备就绪状态。

5、把要洗的样品板条放好在洗板机的槽中。

6、按“运行”键开始洗板。

7、吸干板条后，吸板机自行停止。

8、如要清洗下一块酶标板，则重复上面的洗板过程。

三、 关机、维护保养

1、当试验的最后一次洗板结束后，将泵后部的电源开关置于OFF位，关闭机器。

2、将酶标板托盘上的预洗槽用蒸馏水装满并将清洗头尖端浸入预洗槽中，以防止清洗液中的缓冲盐类结晶堵塞清洗头。

3、确保定期倒干废液，并至少有一个洗液瓶装在仪器上，以防止液体进入泵的临时储液瓶。

4、如果洗板机长时间不会使用，则关机前应该用蒸馏水冲洗一遍整个系统，倒干废液并清洗废液瓶，保持临时储液瓶是干燥的。

5、保持酶标板架滑道的清洁干燥以防止堵塞，用中性洗涤剂浸湿后的软布擦拭。

6、仪器表面有生物危险性物质污染，用中性消毒液清洁。

仪器购买时间：

本SOP编写日期：

编写人签名：

复核人签名：

目前使用状况：良好 使用人签名：

某某单位

酶标仪（科华SY-360）标准操作程序

编号：ST-360/SOP/002

一、开机

1、检查酶标仪以及打印机的各电源线之间连接是否正确，打印纸是否已装好。

2、将酶标仪的电源开关打开。出现正在自检字样。

3、过二十秒左右仪器提示准备就绪。

4、选择测量方式。

5、选择计算机控制。

二、电脑端酶标仪程序的打开与设置。

1、打开输血四项酶标仪程序。

2、选择测定项目及参数，在程序里设定样品号数和位置、阴阳性对照位置，空白对照位置。

3、选择试剂厂家，确保试剂批号、有效期等内容与当日所用试剂一致。

三、读板

1、在加入显色剂的酶标板的每孔滴一滴终止液，摇匀后放在酶标架上。一定使其位置正确，A1孔在左上角。

2、按下电脑端的酶标仪程序的读板键，酶标板在导轨上自动进入检测系统内进行检测。

3、检测完毕后，打印检测报告。

四、关机

1、退出计算机程序并关闭计算机

2、把酶标板移开，关闭酶标仪的开关。

仪器购买时间：

本SOP编写日期：

编写人签名：

复核人签名：

目前使用状况：良好 使用人签名：

某某单位

HIV实验室操作技术要求

编号：HIV/SOP/003

一、样品的采集

血清、血浆和全血是常见的血液样品，有时用唾液或尿液作样品。样品采集应按试剂说明书要求采集。采血时一定要注意安全，采血时用一次性注射器，防止刺伤皮肤和造成外界污染。标本如即时用，可存于普通冰箱，如长期保存，则置于-20℃以下保存。

二、样品的运送

样品的运送必须是血清或血浆，除特殊需要外，一般不能用全血。须置于有盖帽的试管内，防止样本流出，试管上应有明显的标志，标明种类、姓名、地区、时间、或原有的编号。将试管放入专门带盖的容器内，容器的材料要容易消毒处理，在所放试管周围上下均垫有软性物质，以免碰碎，容器外标有HIV检测专用字样。如果路程远或气候炎热时，盛有样品的容器应置于4以下运送。送样时需附送验单。如用特快专递形式投寄，但盛样品的试管必须包扎好，保证不会破碎、溢漏。

三、样品的处理

1、对从其他实验室送来的样本，注意检查并注明其送检单与标记记录的符合、样本管破损、溢漏情况。如有溢漏应立即将尚留存的血样移出，并对管壁和容器消毒。要检查并记录样本的质量有无严重溶血、细菌污染、血脂过多以及黄疸等情况。

2、对实验室自己采集的标本，最好先让血液自然存放1-2小时后，再用3000rpm离心15分钟，吸出上清液备用，如在几天内检测可放2-8℃冰箱内，如要储存，则置于-20℃的低温冰箱。

四、标本的加量和稀释

严格按照试剂说明书规定加样量和稀释度操作，不能擅自改动，要做到准确的取样、加样和稀释。加样器刻度必须标准化，包括移液器、刻度吸管和机械吸液管，尤其移液器一定

要高质量的，要随时测定其容量精确度。加样要小心避免吸头碰着了酶标板孔上的包被抗原或抗体层。一般应先加入样品稀释液后再加入样品。为保证加样的准确，加入稀释液、酶抗体、底物等均应以多孔道加样器为主，使用时注意防止吸头间交叉污染。

五、样品测试时的其他条件

要严格按照各厂家试剂盒说明书操作，包括试剂加量、洗涤次数、温育反应时间、显色时间、读书时间、阴阳性对照状况、仪器设备稳定性等。如ELASA法，必须用仪器测定，不能目测。必须按规定波长测试。要随时掌握仪器的正确性。

六、检测工作规范化

要建立样本采集、运送保存、实验操作、消毒隔离以及实验结果解释与最终报告等一套完整的工作制度，并实行岗位责任制，避免差错。

本SOP编写日期：20xx年06月01号

编写人签名：

复核人签名：

某某单位

HIV实验室安全规定

编号：HIV/SOP/002

一、 实验室要求

1、专用实验室（或至少有专用的检测台），赢划分为清洁区和污染区（有条件的可设半污染区），并有明显标记，有充足的操作空间。

2、实验室墙面、地面、台面材料应耐酸、易于清洁消毒、不渗漏液体；室内应有防蚊、防蝇、防鼠等设备。

3、检验台上应装置紫外灯。

4、备有消毒药品、消毒器材和设备。

5、装有脚踏或感应流水装置，备有冲眼水，足够的一次性手套、口罩、隔离服和防护眼镜。

6、清洁区备有存放个人衣服、用品的设施；有条件的可设置专用沐浴设备。

7、实验室应装置恒温设备，室温保持20~25℃.

二、安全操作

1、实验室工作人员要熟悉生物安全操作知识和消毒技术。

2、不得在实验室内喝饮料、吸烟、吃食物和化妆打扮等；不得在实验室内会客。

3、实验室用品（包括工作服）不得用于其他用途；不可将私人和无关的物品带入实验室。

4、工作时要戴手套、穿工作衣和隔离衣，操作时手套破损应立即丢弃、洗手并带上新

手套。

5、不要用戴手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等。

6尽量避免使用尖锐物品和器具；宜用不易破碎材料制品；禁止用口吸任何物质。

7、工作结束后，要对工作台面等消毒，如用消毒液清洗后要干燥20分钟以上，操作时有标本、检测试剂溅时应及时消毒；平时要保持环境整洁。

8、工作完毕，脱去手套后洗手，再去工作衣，用肥皂和流动水洗手。

9、遇有意外事故，应立即处理并分别以口头和书面报告上级部门。如工作人员皮肤被刺伤，可以用流动水局部清洗或用刺激性较轻的含氯创伤消毒剂浸泡皮肤创口；样品或检测试剂溅入眼内立即用生理盐水冲洗，溅入嘴内，先吐出残留的液体后，用水反复漱口。

10、有高危的意外事故发生，除进行局部处理外，同时应立即采取预防措施，包括对其随访、HIV检测、休养并暂时离开原岗位3个月，按医嘱服用抗HIV药物进行预防。

三、废弃物品消毒处理

1、血液标本置于合适容器内，加盖盖紧后运送，切勿污染盛器外部。如果盛器被污染，要用消毒液消毒。也可将血样置于有盖的塑料管内，外面套上塑料袋，封口，连同送检单一并运送，有血液外溢时，立即用消毒液消毒。

2、各种试剂和化学品均应贴有标签，放置于合适的位置，试验台上不放置不必要的物品。任何测试用的样品和试剂不宜置于桌面或架子的边沿，以防滑落打破，污染环境。一旦污染，先在污染区外周围倒入消毒液，逐渐向中心消毒处理。

3、试验室所有垃圾，包括用过的一次性手套和工作衣，置于专门污物袋内，经焚烧或有效消毒处理后丢弃，污染的非一次性工作衣应先消毒后再洗涤。

4、所有用过的实验用品，尤其是血样管和血液标本先在实验室内消毒，再移出清洗，待消毒后再用。

5、所有尖锐物品应置于不宜刺破的容器内，消毒后用合适的方法处理。

6、常用的消毒剂和消毒方法与病毒性肝炎消毒方法相同。

四、健康监护

1、实验室工作人员从事工作前必须进行HIV抗体和乙肝、丙肝等肝炎病毒标记物的检测。

2、每半年进行一次HIV抗体的复查，并保存血样一年以上

3、遇有意外事故，接触者应在接触当时、接触后6周、3个月、6个月及12个月各采集血样检查一次。

4、患有皮肤疾患，尤其是皮肤溃烂、破损情况要及时诊治。

本SOP编写日期：20xx年10月06日

编写人签名：

复核人签名：

洗板机使用记录

酶标仪使用记录

初筛阳性送检化验单

秘密 编号2006001

中国疾病预防控制中心制订