实验四 果蔬菜中农药残留测定

环境工程 李婷婷 2110921109

一、 实验目的

1、 练习使用农药残留快速检测仪，掌握其操作过程；

2、 掌握酶抑制法的实验原理。

二、 实验原理

本实验采用酶抑制法，有机磷或氨基甲酸酯类农药能抑酶活性，使本可以由酶参与的显色反应而失去颜色，呈白色。可用比色法定量抑制程度。抑制率是有机磷或氨基甲酸酯类农药抑制酶能力的强弱。

在一定条件下,有机磷和氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶正常功能有抑制作用,其抑制率与农药的浓度呈正相关。

正常情况下,酶催化神经传导代谢产物(乙酰胆碱)水解,其水解产物与显色剂反应。产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率。通过抑制率可以判断出样品中是否含有高剂量有机磷和氨基甲酸酯类农药的存在。

三、 实验步骤

1 参数设置

2 校准测量：选择校准菜单后，取2.5ml试剂一移入比色瓶后，各取100ul试剂二和试剂三倒入比色瓶中，盖紧摇匀, 放入比色槽中

放置10min，按校准键，仪器显示正在预热，仪器发出嘀嘀嘀三声后，表示校准完毕。

3 空白测量：接上步，按空白测量键，仪器显示正在预热，发出嘀嘀嘀三声后，提示加入试剂四，取出比色瓶加入100ul试剂四，盖好摇匀，放入比色瓶中，按回车继续，仪器显示正在测量，倒计时三分钟，结束后同样发出嘀嘀嘀三声。并显示吸光度值A1，A2。 4 样品测量

4.1 样品制备：选取有代表性的果蔬样品，擦去表面泥土，叶菜用叶菜取样器取叶片部分，果实蔬菜可切割。然后切成1cm左右的见方碎片，称取2.0g样品。

4.2 样品中农药的提取：将6个样品提取瓶放在支架上，各放入2.0g样品，各加10.ml 试剂一，用搅拌针使样品全部浸入液体中，放入提取仪中萃取6分钟。之后放回支架，取2.5ml注入比色瓶中。

4.3 样品测量：选择测量键，各加100ul试剂二和试剂三混合摇匀。按确认键进行测量，预热结束后。仪器显示正在培养。10分钟后结束，发出嘀嘀嘀三声。提示加入试剂四。加入后，按确认键三分钟后，屏幕显示结果。

四、 实验结果与分析

1 抑制率公式：

E（%）={[(A2-A1)-(A4-A3)] /(A2-A1)} × 100%

E ：抑制率

A1：空白测量3分钟前的吸光度值

A2：空白测量3分钟后的吸光度值

A3：样品测量3分钟前的吸光度值

A4：样品测量3分钟后的吸光度值

2 结果判定：当被测样品的抑制率在50%以上时，表示被测样品中有高剂量有机磷和氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果，阳性结果的样品需要检测两次以上。对阳性结果的样品，可用其他方法进一步确定农药品种的含量，并报有关部门处理。

实验所测样品为豆角， 经实验测得：A1=-0.029，A2=0.617，A2-A1=0.646>0.300，所以空白有效。A3=0.329，A4=1.117<1.8，所以此样品检测有效。抑制率为4.1%，小于50%，所以样品检测一次即可。

五、 问题与讨论

本次实验中应注意的问题有以下几点：

1、试剂二用量：若A2-A1小于0.300，此空白无效，需要重新检测，若多次测定后，仍小于0.300，则需要增加试剂二的用量，直到大于为止。

2、吸光度确认：在样品测量结束后。若A4大于1.80，则此样品检测无效，需重新检测，多次测量后仍大于1.80，为果蔬色素干扰，需要对被测样品进行整株提取，不要剪碎样品。

3、注意时间间隔：提示加入试剂四时应该在嘀嘀嘀三声后加入(空白和样品)。且做空白和样品时加入试剂四的时间间隔应一致。加入试剂四后,轻轻摇匀后,放入比色槽后,应立即测量。

4、注意移液器的操作：移液器有两个档,吸取时应用第一个档,排除液体时下推至第二个档。

第二篇：蔬菜中11种有机磷和10种有机氯,菊酯类农药残留的同时测定

蔬菜中11种有机磷和10种有机氯、菊酯类农药残留的同时测定

冷中成 王强 张惠 黄永伦

（达州市质检中心 四川达州 635000）

摘 要：建立了一种气相色谱法同时测定蔬菜中有机磷、有机氯和菊酯类农药残留量的分析方法。样品采用石油醚-丙酮（1+1，V/V）提取，用Al2O3柱净化, 石油醚-丙酮（2+1，V/V）淋洗。采用ZB-5石英毛细管柱和FPD检测器分析有机磷农药残留；采用HP-5石英毛细管柱和ECD检测器分析有机氯和菊酯类农药残留。以低限加标样品的3倍信噪比确定方法的检出限（LODs），以两个添加水平测定样品的回收率和相对标准偏差（RSD）。该方法的检测限能达到μg/Kg水平；各类农药的加标回收率在74.3%～112.8%之间，RSD均低于10% 。

关键词：蔬菜，有机磷，有机氯，菊酯类，农药残留，气相色谱法

SIMULTANEOUS DETERMINATION OF RESIDUE OF ORGANOPHOSPHORUS，ORGANOCHLORINE AND PYRETHROID PESTCISDES IN VEGETABLES BY GAS CHROMATOGRAPHY

Leng Zhongcheng Wang Qiang Zhang Hui Huang Yonglun

(Dazhou Institute of Supervision and Inspection on Quality，Sichuan Dazhou，635000, China )

Abstract: A gas chromatographic method was established to simuitaneously determine multiple pesticides in vegetables including organophosphorus, organochlorine and pyrethroid. The pesticide residue in vegetables was extracted with pethroleum ether-acetone(1+1, V/V).The extract was purified by Al2O3-column with pethroleum ether-acetone(2+1, V/V) as elution solvent. ZB-5 column and FPD detector were used in the separation and detection of organophosphorus. HP-5 column and FPD detector were used in the separation and detection of organochlorine and pyrethroid. The limits of detection were evaluated on the lower concentration spiked sample under the signal-to-noise of 3﹕1. The recoveries and relative standard derivations were checked by spiking pesticide standard solution at two levels to untreated samples. The limits of detection were at μg/Kg level. The average recoveries of pesticides were from 74.3%～116.8%. The RSDs were less than 10%.

Keywords: gas chromatography, vegetables, organophosphorus, organochlorine, pyrethroid

随着人们生活水平的提高，人们对食品质量安全愈来愈重视，国家对食品中的农药残留也提出了新的要求，GB2763-2005《食品中农药最大残留量》中列出了136种农药在食品中的最大残留限量。蔬菜作为人们每天膳食中不可或缺的食品，其在种植过程中因违规或非科学施用农药，难免造成农药在蔬菜中的残留，而危及人体健康。为了搞好食品质量安全工作，维护人们的身体健康，必须检测蔬菜中农药残留。蔬菜中农药残留的检测有国家标准

（2-4）⑴

混合提取液：石油醚+丙酮（1+1）； 无水硫酸钠：700℃灼烧4h后备用；

中性氧化铝：550℃灼烧4h后调节水分3%备用；农药标准品均由农业部环境保护科研监测所农药残留分析专用国家标准品中心提供，根据需要用石油醚稀释至适当浓度的工作液。 1.2色谱条件

A通道（ECD）：色谱柱:HP-5 30m×0.25mm毛细管柱,汽化温度250℃，电捕310℃，柱压0.18MPa，补充气（N2）60 ml/min,分流50﹕1；

B通道（FPD）：色谱柱:ZB-5 30m×0.25mm×0.25um毛细管柱,汽化温度250℃， FPD240℃，柱压0.12MPa，空气160ml/min，氢气160ml/min，补充气（N2）60 ml/min,分流50﹕1； A、 B通道柱温：初始温度160℃，保持9 min,以20℃/min

的升温速率升至200℃，保持12min，再以20℃/min的升温速率升至240℃，保持25min。 1.3分析步骤

取适量经去除非食用部分且用水冲洗后晾干的蔬菜样品于组织捣碎机中打成匀浆后，称取5.00g于研钵中，加入适量的无水硫酸钠研磨成干粉，转入到具塞三角瓶中，用少量混合

，各类食品中农

药残留的检测也有不少文献报道⑸⑹，但有机磷、有机氯和菊酯类几类农药的同时测定的文献较少。本文利用具有FPD和ECD两个检测器的气相色谱仪，双通道同时测定蔬菜中敌敌畏，甲胺磷，甲拌磷，氧化乐果，二嗪农，乐果，甲基对硫磷，马拉硫磷，对硫磷，水胺硫磷，喹硫磷等11种有机磷，六六六，滴滴涕等2种有机氯和氯菊酯，氰戊菊酯，溴氰菊酯等3种菊酯类农药残留，可满足实际检测工作的需要。 1.试验部分 1.1仪器与试剂

GC4011A型气相色谱仪（配有FPD和ECD两个检测器），组织捣碎机，超声波清洗器，R-201D-Ⅱ型旋转蒸发仪，D10-12

氮吹仪，KD浓缩器。

作者简介：冷中成（1973--），男，四川达州人，质量工程师，研究方向为食品化工分析。(QQ:582221262@qq.com 0818-2398985 四川达洲市朝阳东路文化巷64号635000)

提取液清洗研钵并转入具塞三角瓶中，加入20 ml混合提取 液摇匀后放入超声波清洗器中超声波提取10 min ，过滤。再加入20 ml混合提取液摇匀重复提取一次。合并两次的滤液旋转蒸发至2～5ml，经中性氧化铝净化柱净化，用KD浓缩器

图1

图2

2结果与讨论 2.1提取液的选择

在试验中选用了单一的石油醚，丙酮，以及石油醚和丙酮（1+1，V/V）混合溶液，石油醚和丙酮（2+1，V/V）混合溶液，石油醚和丙酮（1+2，V/V）混合溶液，经试验发现石油醚和丙酮（1+1，V/V）混合提取液的效果最好，获得了满意的回收率，各种农残的提取回收率在74.3%—112.8%。 2.2净化方法的选择

经试验，采用依次从下至上加入3g左右无水硫酸钠，5g左右中性氧化铝，再加5g左右无水硫酸钠的净化柱净化，石油醚和丙酮（2+1，V/V）混合溶液淋洗，能有效地除去杂质成分，从而获得满意的净化效果，净化前后谱图比较见图3、图4、图5和图6。

图3 样品中有机磷农残的检测色谱图(未净化)

2.3回收率及精密度试验

收集，氮吹近干后用石油醚定容至1.0 ml，分别取1.0ul进气相色谱仪B通道FPD和A通道ECD进行分析，以保留时间定性，外标法定量。在上述色谱条件下，各农药组分的出峰顺序和保留时间见图1、图2。

1a-六六六， 2?-六六六， 3г-六六六， 4δ-六六六， 5甲体-滴滴涕，6乙体和丙体-滴滴涕，7丁体-滴滴涕， 8 氯菊酯，9氰戊菊酯，10溴氰菊酯

图1中各峰的组分名

1敌敌畏，2甲胺磷，3甲拌磷，4氧化乐果， 5二嗪农，6乐果，7甲基对硫磷，8马拉硫磷， 9对硫磷，10水胺硫磷，11喹硫磷

图2中各峰的组分名

图4 样品中有机磷农残的检测色谱图(净化后

)

图5 样品中有机氯等农残的检测色谱图(未净化

))

图6 样品中有机氯等农残的检测色谱图(净化后)

按试验方法在空白蔬菜样品中加入各种农药的混 合标准液进行回收率及精密度试验，测得的结果见表1。 表1 回收率及精密度试验（ n=6 ） Tab.1 Recovery and precision test(n=6) 农药 加入量 测得量 回收率

RSD Pesticide

Added

Found

Recov

（μg/kg） （μg/kg） （%） （%） 敌敌畏

25.0 22.75 91.0 6.4 50.0

46.20 92.4 5.7 甲胺磷 25.0 23.20 92.8 5.2 50.0

47.25 94.5 3.8 甲拌磷 25.0 21.28 85.1 7.2 50.0

43.15 86.3 6.4 氧化乐果 25.0 27.65 110.6 1.8 50.0

56.40 112.8 1.4 二嗪农 25.0 24.60 98.4 2.4 50.0

50.60 101.2 3.6 乐果 25.0 24.93 99.7 3.1 50.0

51.20 102.4 2.5 甲基对硫磷

25.0 24.78 99.1 1.6 50.0 49.95 99.9 1.8 马拉硫磷

25.0 24.60 98.4 0.9 50.0 49.35 98.7 1.2 对硫磷 25.0 22.40 89.6 3.4 50.0 45.60 91.2 2.2 水胺硫磷

25.0 19.90 79.6 1.3 50.0 40.70 81.4 1.4 喹硫磷 25.0 23.38 93.5 0.8 50.0 46.90 93.8 1.2 α-六六六

25.0 22.88 91.5 1.4 50.0 46.05 92.1 2.3 β-六六六

25.0 19.55 78.2 3.7 50.0 39.30 78.6 3.3 γ-六六六

25.0 21.00 84.0 4.5 50.0 42.35 84.7 4.1 δ-六六六

25.0 24.85 99.4 3.6 50.0 49.60 99.2 3.0 甲体-滴滴涕

25.0 21.33 85.3 5.6 50.0 42.90 85.8 5.9 乙+丙体滴滴

50.0 37.25 74.5 8.4 100.0 74.30 74.3 9.3 丁体-滴滴涕

25.0 20.10 80.4 4.8 50.0 40.85 81.7 5.6 氯菊酯 25.0 27.38 109.5 1.9 50.0 55.10 110.2 1.2 氰戊菊酯

25.0 26.93 107.7 2.0 50.0 53.95 107.9 2.7 溴氰菊酯

25.0 25.55 102.2 1.6 50.0

51.40

102.8

1.4

2.4方法应用

运用本法对四川省达州市超市和蔬菜批发市场45个蔬菜样品中有机磷、有机氯和菊酯类农药残留进行了检测，其中有28.89%检出了有机磷农药残留，有15.56%检出了有机氯和菊酯类农药残留。

[参考文献]

[1] 李永波，潘英.如何减少蔬菜农药残留对健康的危害[J].中国食物与营养，2007，（4）：14—15

[2] GB/T5009.145-2003植物性食品中有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留的测定.

[3] GB/T5009.146-2003植物性食品中有机氯和拟除虫菊酯农药多种残留的测定.

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