毒理学实验报告思考题习题答案汇总
作者：南无宝宝
实验一
1、简述常用实验动物的种类
1.科研人员用的：小白鼠、狗、兔子
2.学校教学用的：青蛙（人工繁殖的）、鱼、蚯蚓
2、选择实验动物的原则
1.根据实验的要求而选择不同的实验动物 2.选用动物的数量必须符合统计学上预计数字的需要。3.根据实验的性质也可选不同品系的动物：其目的在于使动物试验结果有规律性、重复性和可比性。4.由于同一种实验动物存在着个体差异，还应注意个体的选择：
（1）年龄：一般均选用成年动物来进行实验。动物年龄常按其体重来估计，选用的动物体重大体上小白鼠20～30g、豚鼠500g左右、家兔2kg左右医学教|育网搜集整理。
（2）性别：在实验研究中，动物如无特殊需要，一般宜选用雌雄各半。
（3）生理状态：实验动物应证明确实健康外，雌性动物若处于怀孕、授乳期不宜采用。
3、把12只动物随机平分成三组。详细叙述分组过程
2．将实验单位随机分成三组 设有动物15只，随机等分成A、B、C三组。将动物编号后，按上述方法，从随机数字表抄录15个数字，将各数一律以3除之，并以余数1、2、3代表A、B、C，结果归入A组的动物6只，归入B组的动物4只，归入C组的动物5只，即：
要使三组的动物数相等，须把原归A组的6只动物中的1只改配到B组去。可以随机数字表继续按斜角线抄录一个数字，得60，以6除之，除尽（相当于余数为6），就可以把第六个A（即12号）动物改为B组。调整后各组的动物编号如下：
4、绘图，任选三个两位数字编号并画出它在小白鼠身上的染色法标记。
10 左上右无 11 左上右上 12左上 右中
实验二
1、简述抓取小鼠和家兔的方法及注意事项
小鼠的抓取固定 抓取时，用左手拇 指和食指捏住小鼠尾巴中部放在格板或铁笼上。 2、趁着小鼠试图挣脱的瞬间，迅速用另外三个手指压住小鼠的尾巴根部握 入手掌。 3、放松拇指和食指，用另外三个手指控制小鼠，然后用食指和拇指捏住小 鼠头部两边疏松的皮肤提起小鼠，完成抓取固定。注意事项：抓小鼠尾巴应抓住尾巴中部或根部，不能仅捏住小鼠尾巴的尾端，因 为这时小鼠的重量全部集中到尾端，如果小鼠挣扎，有可能弄破尾端。在进行解 剖、手术、心脏采血、尾静脉注射时，可将小鼠用线绳捆绑在木版上，或固定在 尾静脉注射架及粗试管中。
兔的抓取固定 抓取固定方法是用右手把两耳拿在手心并抓住颈后部皮肤，提起家兔，然 后用左手托住臀部。 另一种方法是使用家兔固定栏，打开固定栏的前盖，抓取家兔放进栏内，右 手抓住家兔耳朵将头部拉过固定栏的开孔，迅速关上栏门 。
2、简述小鼠皮下注射，皮内注射，肌肉注射，腹腔注射及尾静脉注射的操作方法
（一）皮下注射
注射时以左手拇指和食指提起皮肤，将连有5（1/2）号针头的注射器刺入皮下。鼠在后大腿的内侧或小腹部；大白鼠可在侧下腹部。（二）皮内注射
皮内注射时需将注射的局部脱去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮肤并使之绷紧，在两指之间，用结核菌素注射器连4(1/2)细针头，紧贴皮肤表层刺入皮内，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射药液，此时可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。
（三）肌肉注射
肌肉注射应选肌肉发达，无大血管通过的部位，一般多选臀部。注射时垂直迅速刺入肌肉，回抽针栓如无回血，即可进行注射。给小白鼠作肌肉注射时，用左手抓住鼠两耳和头部皮肤，右手取连有5（1/2）针头的注射器，将针头刺入大腿外侧肌肉，将药液注入。
（四）腹腔注射
用小白鼠做实验时，以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推 0.5～1.0cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液（图1），为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。
（五）静脉注射 小白鼠：一般采用尾静脉注射，鼠尾静脉有三根，左右两侧及背侧各一根，左右两侧尾静脉比较容易固定，多采用，背侧一根也可采用，但位置容易固定。操作时先将动物固定在鼠筒内或扣在烧杯中，使尾巴露出，尾部用45～50℃的温水浸润半分钟或用酒精擦拭使血管扩张，并可使表皮角质软化，以左手拇指和食指捏住鼠尾两侧，使静脉充盈，用中指从下面托起尾巴，以无名指和小指夹住尾巴的末梢，右手持注射器连4(1/2)号细针头，使针头与静脉平行（小于30℃），从尾下四分之一处（约距尾尖2-3厘米）处进针，此处皮薄易于刺入，先缓注少量药液，如无阻力，表示针头已进入静脉，可继续注入。注射完毕后把尾部向注射侧弯曲以止血。如需反复注射，应尽可能从末端开始，以后向尾根部方向移动注射（图3）。
3、简述家兔耳缘静脉注射的操作方法
兔耳缘静脉沿耳背后缘走行。将覆盖在静脉皮肤上的毛拔去或剪去，可用水湿润局部，将兔耳略加搓揉或用手指轻弹血管，使兔耳血流增加，并在耳根将耳缘静脉压迫，以使其血管怒张。用左手食指和中指夹住静脉近心端，拇指和小指夹住耳缘部分，以左手无名指和小指放在耳下作垫，待静脉充盈后，右手持注射器使针头由静脉末端刺入，顺血管方向向心端刺约1~1.5cm，放松左手拇指和食指对血管的压迫，右手试推注射器针芯，若注射阻力较大或出现局部肿胀，说明针头没有刺入静脉，应立即拔出针头，若推注不大阻力，可将药物徐徐注入，注射完毕后将针头抽出，随即以棉球压迫止血。
实验三
1、简述鼠尾和小鼠眼眶静脉采血的操作方法
⒈剪尾采血
需血量很少时常用本法，如作红、白细胞计数、血红蛋白测定、制作血涂片等可与此法。动物麻醉后，将尾尖剪去约5mm，从尾部向尾尖部按摩，血即从断端流出。也可用刀割破尾动脉或尾静脉，让血液自行流出。如不麻醉，采血量较小。采血结束后，消毒、止血。
用此法每只鼠可采血10余次。小鼠可每次采血约 0.1ml，大鼠约 0.4ml。
⒉眼眶后静脉丛采血
穿刺采用一根特制的长7～10cm硬的玻璃取血管,其一端内径为 1～1.5mm，另一端逐渐扩大，细端长约 1cm即可，将取血管浸入 1％肝素溶液，干燥后使用。采血时，左手拇指及食指抓住鼠两耳之间的皮肤使鼠固定，并轻轻压迫颈部两侧，阻碍静脉回流，使眼球充分外突，提示眼眶后静脉丛充血。右手持取血管，将其尖端插入内眼角与眼球之间，轻轻向眼底方向刺入，当感到有阻力时即停止刺入，旋转取血管以切开静脉丛，血液即流入取血管中。采血结束后，拔出取血管，放松左手，出血即停止。
用本法在短期内可重复采血。小鼠一次可采血0.2～0.3ml，大鼠一次可采血 0.5～1.0ml。
对大鼠损伤小，建议尝试使用
2、分别叙述小鼠，大鼠和家兔常用的处死方法
（一）大鼠和小鼠
１脊椎脱臼法：右手抓住尾巴将动物放在鼠笼盖或粗糙的表面上向后拉，用左手拇指和食指用力向下按住鼠头，使颈椎脱臼（脊髓与脑髓拉断），动物立即死亡。
２断头法：此法适用于鼠类小动物。用剪刀在颈部将鼠头剪断，并使颈部对准容器，以免血液四溅。由于脑脊髓离断且大量出血，动物立即死亡。
３击打法：此法适用于大鼠、家兔等。抓住动物尾部，提起，用力摔击头部，或用木捶用力捶其后脑部，动物痉挛后即处死。
４急性失血法：
常剪断动物的股动脉，放血致死。如果正在做手术性或解剖性实验，可剪断颈动脉，腹主动脉或剪破心脏放血。可采用摘眼球法，右手取一眼科弯镊，在鼠右或左侧眼球根部将眼球摘去，并将鼠倒置；头向下，大量失血而致死。
５化学药物致死法：在一密闭容器内，预先放有浸有全身麻醉作用的乙醚或氯仿的棉花，将动物投入容器内，使动物吸入麻醉药而致死。也可皮下注射士的宁（马钱子碱），注射量为小鼠０.７６～２.０ｍｇ／ｋｇ，大鼠为３.０～３.５ｍｇ／ｋｇ。
（二）兔
１空气栓塞法
此法适用于较大动物的处死。向动物静脉内注射注入一定量的空气使之发生空气栓塞，形成严重的血液循环障碍而死。兔、猫用此法处死需注入20～40ml空气，犬致死的空气剂量为80～150ml。一般注如入后动物能很快死亡。本法的优点是处死方法简单、迅速。缺点是由于动物死于急性循环衰竭，各脏器淤血十分明显。
２急性失血法
先使动物麻醉、暴露股三角区或腹腔，再切断股动脉或腹主动脉，迅速放血。放血时可用湿纱布擦，或用少量自来水冲洗切口，以保持其畅通，动物在３～５分钟内即可死亡。采用此法动物十分安静，对脏器无损害，但器官贫血比较明显。
小鼠等小动物可采用颈总动脉大量失血而致死的方法。犬等大型动物要先麻醉后放血，要使放血的切口保持通畅，一般在股三角区横切约lOcm的切口，切断股动、静脉，便大量失血而死。
３破坏延脑法
对家兔可用木捶用力捶其后脑部，损坏延脑，动物痉挛后死亡。
４化学药物致死法
（１）静脉注射10％氯化钾（ｋＣｌ）溶液，使动物心肌松弛，失去收缩能力，心脏发生急性扩大致心跳停止而死亡。成年兔由兔耳缘静脉注入10％氯化钾（ｋＣｌ）溶液5～10ml／只，狗由狗前肢或后肢皮下静脉注入20～30ml／只，即可致死。
（２）静脉注射10％福尔马林溶液，使血液内蛋白凝固，动物由于全身血液循环严重障碍和缺氧而死。狗用２０ml／只，即可致死。
（３）皮下注射的士宁致死：用量为：豚鼠为3.0～4.4mg/kg，家兔为0.5～1.Omg/kg，犬为0/3～0.42mg/kg。猫１.０～２.０mg/kg，大白鼠３.０～３.５mg/kg，小白鼠０.７６～２.０mg/kg。
如果动物或其组织要送检，必须注明处死方法。
实验四
1、急性毒性实验的概念
急性毒性试验是指一次或24小时内多次染毒的试验，是毒性研究的第一步。要求采用啮齿类或非啮齿类两种动物。通常为小鼠或大鼠采用经口、吸入或经皮染毒途径。急性毒性试验主要测定半数致死量（浓度），观察急性中毒表现，经皮肤吸收能力以及对皮肤、粘膜和眼有无局部刺激作用等，以提供受试物质的急性毒性资料，确定毒作用方式、中毒反应，并为亚急性和慢性毒性试验的观察指标及剂量分组提供参考。
2、哪些药物适用于经皮肤的毒性实验
药物对皮肤的毒性类型
主要有以下几种：
1药疹：但最常见的有磺胺类药、解热镇痛药、镇静催眠药类以及青霉素、链霉素等
(2)药物的光敏反应：起光敏反应的药物主要包括喹诺酮类、磺胺类、四环素类、磺酰脲类、利尿药、吩噻嗪类、非甾体抗炎药、口服避孕药及局部用药等。
(3)原发性刺激：主要指药物直接对皮肤局部产生的刺激作用，刺激症状是皮肤接触药物后
所产生的一种反应。
(4)皮肤过敏反应：易引起皮肤过敏反应的药物有青霉素、磺胺类、氯丙嗪、普鲁卡因、苯佐卡因等。
(5)药物超敏反应综合症症最常见的药物有卡马西平、苯妥英钠、苯巴比妥、拉莫三嗪、苯砜、美西律等。
(6)氨苯砜综合症：是在服用氨苯砜后出现的一组以发热、皮损、肝损害、黄疸、淋巴结病
及溶血性贫血为主要表现的综合症。
(7)红人综合征：引起该征的药物还有环丙沙星、两性霉素B、利福平、替考拉宁等，这些
药物联用加重该不良反应。
(8)经皮肤吸收产生全身中毒反应
小鼠脱毛有几种方法，各自的操作要点(一)剪毛法：剪毛法是将动物固定后，先用蘸有水的纱布把被毛浸湿，再用剪毛剪刀紧贴皮肤剪去被毛。不可用手提起被毛，以免剪破皮肤2.拔毛 小鼠作尾静脉注射时，需用拇指、食指将局部被毛拔去，以利操作。
(三)剃毛法：剃毛法是用剃毛刀剃去动物被毛的方法。如动物被毛较长，先要用剪刀将其剪短，再用刷子蘸温肥皂水将剃毛部位浸透，然后再用剃毛刀除毛。本法适用于暴露外科手术区。
(四)脱毛法：脱毛法是用化学药品脱去动物被毛的方法。首先将被毛剪短，然后用棉球蘸取脱毛剂，在所需部位涂一薄层，2～3分钟后用温水洗去脱落的被毛，用纱布擦干，再涂一层油脂即可。
适用于鼠的脱毛剂的配方为：1. 硫化钠3g,肥皂粉1g,淀粉7g,加适量水调成糊状；2. 硫化钠8g,淀粉7g，糖4g，甘油5g，硼砂1g,加水75ml；3. 硫化钠8g溶于100ml水中。
4、化学物质对皮肤刺激性的判断方法
表1.皮肤刺激反应评分标准
表2.皮肤刺激强度评价标准
实验五
1、经口急性毒性实验常用的给药方法
霍恩氏法 固定剂量法 毒性等级法 灌胃法
2、小鼠灌胃法染毒的操作要点及注意事项
3、如何设计急性毒性实验的剂量组
对于剂量组的测定，对一个未知毒性的外来化合物求其LD50(LC50)，应先做预试验。做预试验方法很多，首先了解分析受试化合物的化学结构和其理化性质，确定其所属已知化合物或其衍生物的种类，有何特殊基团及其分子量、熔点、沸点、比重、闪点、挥发度、蒸气压、水溶性和脂溶性等，并以其LD50(LC50)值作为受试化合物的预其毒性中值；但应注意，一定是相同动物种系和相同接触途径。以此预期毒性中值为待测化合物的中间剂量组，再上下各推一到两个剂量组做预试验。每个剂量组间的组距可以大些，有利于找出受试化合物的致死剂量范围。初起组距可用剂量间的4倍差，即以log4(log4＝0.6)来划分各组剂量。设置几个剂量组较为合适，应依预试验结果而定。一般设置5~7个剂量组即可，它即符合统计计算要求又可节省人力和财力。每个剂量组的动物数，小鼠不少于10只、大鼠6~8只，若设计采用霍恩氏法计算LD50时，动物数可减少。每组动物应雌雄各半；如化合物毒性有性别差异，则应分别求雌、雄性动物各自的LD50(LC50)。
4、半数致死量的计算方法
计算公式
①基本公式 lg LD50＝XK－d(∑P-0.5)
式中：XK死亡率为100%组的对数剂量
d对数组距
∑P各组死亡率之和
②校正公式
当Pm>0.8或Pn<0.2时可用下公式计算
lg LD50＝XK－d(∑P-
)
③ LD50＝lg-1lgLD50，单位应换算成mg∕kg 或g∕kg表示。
④ 95%可信限：
LD50±4.5S ㏒ LD50·LD 50
S ㏒LD50 ＝d√∑p（1-p）/（n-1）
式中：S ㏒ LD50是 ㏒ LD 50 的标准误
P各组死亡率
n每组动物数
实验七
1、小鼠急性肝损伤模型的原理
四氯化碳(CCl4)进入机体后，经肝脏细胞色素P-450激活，生成三氯甲基自由基(CCl3·)，后者攻击肝细胞内质网膜上的磷脂分子，引起膜的脂质过氧化，CCl3·继而与膜脂质和蛋白质等生物大分子进行共价结合，引起膜结构和功能完整性的破坏。CCl3·还可抑制细胞膜和微粒体膜上钙泵的活性，使Ca2+离子内流增加，从而引起肝细胞坏死。受试动物肝损伤后，血液中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性升高，肝脏外观呈土黄色，组织病理学检查可见肝脏炎症细胞侵润、肝细胞坏死等。
2、叙述制备小鼠急性肝损伤模型的方法与注意事项
⑴复习实验动物选择、性别鉴定、称重、编号和随机分组。
⑵小鼠经口染毒操作。
将小鼠随机分成4组，即高、中、低3个剂量组，1个对照组，每组20只，雌雄各半。染毒途径可选用灌胃，一次性给药。灌胃时高、中、低剂量一般可分别为CCl4原液2ml、1ml、0.5ml／kg体重。给予肝毒物后禁食过夜，16～24h后断头处死动物，采集血液，12000rpm离心5min，用试剂盒或自配试剂测定血清ALT酶活性。
⑶实验操作要点
①选择健康实验动物，称重、编号，随机分组。
②实验动物称重、编号和随机分组方法。
③小鼠灌胃操作技术。
小鼠灌胃法 将钝头的16号注射针(适用于小鼠)(注意事先可用焊锡在针尖周围焊一圆头，使其不易损伤动物的消化道)安装在适当容积的注射器上，吸取所需的受试物溶液，左手抓住动物双耳后至背部的皮肤(小鼠仅抓住耳后、颈部的皮肤，用无名指、小手指和大鱼际肌将其尾根部压紧)，将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者。注意使动物的上消化道固定成一直线。右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避开牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即可深入至胃部。如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免操作穿破食管，甚至误人气管，导致动物立即死亡。
进针深度一般是小鼠2.5～4cm。为了验明是否已正确地地插入胃部，可轻轻回抽注射器，如无气泡抽出，表明已插入胃中；如有大量气泡，则提示误插气管，应抽出重插。随后将受试物溶液注入。灌胃容量小鼠通常为0.2—lml。
④毒性症状的观察。
注意事项：
⑴血清中的ALT在室温(25℃)可保存2天，在冰箱(0℃～4℃)可保存1周，冰冻(－25℃)可保存1个月。
⑵CCl4的操作要在有机溶剂通风厨进行，避免对室内环境和操作人员的污染和接触。
实验八
1、获取肝损伤小鼠血清的方法操作者左手握住动物，右手持剪刀，快速剪断头颈部，倒立动物将血液滴人容器。注意防止剪断的毛发掉入接血容器中。
2、比色法检测肝损伤小鼠模型血清丙氨酸氨基转换酶(ALT)活性的原理
3、比色法检测肝损伤小鼠模型血清丙氨酸氨基转换酶(ALT)活性时需要注意什么问题①测定结果超过150U时，应将血清稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。
②一般在急性病毒性肝炎期、化学性肝细胞坏死时ALT明显增高；肝癌、肝硬化、慢性肝炎，ALT中度增高；阻塞黄疸、胆管炎可轻度增高。但ALT升高也可见于肝外疾病，此时应多方面分析，综合考虑。
4、血清ALT酶活性增加代表何种生理意义
20##-9-23 13:45
谷丙转氨酶，主要存在于各种细胞中，尤以肝细胞为最，整个肝脏内转氨酶含量约为血中含量的100倍，正常时，只有少量释放入血中，血清中其酶的活性即可明显升高。在各种病毒性肝炎的急性期，药物中毒性肝细胞坏死时，ALT大量释放入血中。因此它是诊断病毒性肝炎、中毒性肝炎的重要指标
临床意义
（1）血清ALT活性增高
① 肝胆疾病：传染性肝炎、肝癌、中毒性肝炎、脂肪肝和胆管炎等。
② 心血管系统疾病：心肌梗死、心肌炎、心力衰竭时肝淤血和脑出血等。
③ 药物和毒物：氯丙嗪、异菸肼、奎宁、水扬酸制剂及乙醇、铅、汞、四氯化碳或有同磷等引起ALT活性增高。