说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验（酶的专一性）必做，其他三个小实验选做（至少做一个）
写实验报告时，可以只写需要做的实验内容！
实验四 酶的特性实验
一、实验目的
酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。通过本实验了解酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。
二、实验内容
本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响4个小实验组成。
（一）酶的专一性
1、实验原理
本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。用班氏试剂检查糖的还原性。班氏试剂为碱性硫酸铜，能氧化具还原性的糖，生成砖红色沉淀氧化亚铜。
2、材料、仪器与试剂
(1)材料：新鲜配制的唾液及其稀释液
(2)仪器：恒温水浴；沸水浴；试管及试管架；
(3)试剂：2%蔗糖溶液；溶于0.3% NaCl的0.5%淀粉溶液；班氏试剂。
3、实验操作
（1）稀释唾液的制备
①唾液的获取
用一次性杯取一定量的饮用水，漱口以清洁口腔，然后在嘴中含10-20ml饮用水，轻漱2min左右时间，即可获得唾液的原液，内含唾液淀粉酶。
②不同稀释度唾液的制备（用大试管）
本实验需制备1：1、1：5、1：20、1：50、1：200等五个不同浓度的稀释唾液。
举例说明：1:5指的是稀释了5倍的唾液，制备方法为1份原液+4份蒸馏水。
1：20指的是稀释了20倍的唾液，制备方法为1份1：5的稀释液+3分蒸馏水。
（2）唾液淀粉酶最佳稀释度的确定（严格按表1添加顺序做实验，用小试管做实验）
表1 唾液淀粉酶稀释度的确定
（2）淀粉酶的专一性
表2 淀粉酶专一性实验
（二）温度对酶活力的影响
1、实验原理
酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反应速度最高。淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。
2、材料、仪器与试剂
（1）材料：新鲜配制的唾液及其稀释液
（2）仪器：试管及试管架；恒温水浴；冰浴；沸水浴；
（3）试剂：溶于0.3% NaCl的0.5%淀粉溶液；KI－I2碘溶液；
3、实验操作
取4支干燥的试管，编号后按下表加入试剂：
表3 温度对酶活力影响实验加样顺序
摇匀后，将1、3号试管放入37℃恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10分钟后1、2、3管均取出（将2号内液体分两半），用KI－I2溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果。将2号管剩下的一半溶液放入37℃水浴中继续保温10分钟后，再用KI－I2液实验，记录实验结果。
（三）PH对酶活力的影响
1、实验原理
酶的活力受环境PH值的影响极为显著。不同酶的最适PH不同。本实验观察PH对唾液淀粉酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适PH约为6.8。
2、材料、仪器与试剂
（1）材料：新配制的溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液
（2）仪器：试管及试管架；吸管；滴管；恒温水浴
（3）试剂：PH为5.0、5.8、6.8、8.0的缓冲溶液；KI－I2碘溶液；PH试纸
3、实验操作
表4 PH对酶活性的影响实验
为了更好的理解表格内容，下面对实验过程进行说明：
各取缓冲液3ml，分别注入4支带有号码的试管，随后于各个试管中添加0.5%淀粉溶液1ml和最佳稀释度的唾液1ml。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔为1分钟。将各试管中物质混匀，，并依次置于37℃恒温水浴中保温。
待向第4管加入唾液2ml后，每隔1分钟由第3管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小滴KI－I2溶液。添加KI－I2溶液，检验淀粉的水解程度。待混合变为淡棕黄色（颜色有点淡即可）后，向所有试管依次添加1-2滴KI－I2溶液。添加滴KI－I2溶液的时间间隔，从第1管起，亦均为1分钟。观察各试管中物质呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。
（四）唾液淀粉酶的活化及抑制
1、实验原理
酶的活性受活化剂或抑制剂的影响，氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。
2、材料、仪器与试剂
（1）材料：0.5%淀粉溶液；最佳稀释度的唾液
（2）仪器：试管及试管架；恒温水浴
（3）试剂：1% NaCl溶液；1% CuSO4溶液；KI－I2碘溶液；1%Na2SO4溶液
3、实验操作（注意本实验的淀粉溶液为无NaCl的淀粉溶液）
表4 唾液淀粉酶活化及抑制实验
三、注意事项
各人唾液中淀粉酶活力不同，故本实验需要先做一个唾液淀粉酶稀释度的确定实验，以确定最佳稀释度。
四、思考题
1、何谓酶的最适pH和最适温度？
2、说明底物浓度、酶浓度、温度和pH对酶反应速度的影响。
3、作为一种生物催化剂，酶有哪些催化特点？
第二篇：实验十一 酶的特性
实验十一 酶的特性
目的
进一步理解酶的有关性质，如温度对酶活力的影响、pH值对酶活力的影响、酶的激活与抑制及酶的专一性。
一、温度对酶活力的影响
原理
酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最快。大多数动物酶的最适反应温度为37～40℃，植物酶的最适反应温度为50～60℃。
酶对温度的稳定性与其存在形式有关，有些酶的干燥制剂，虽加热到100℃其活性并无明显改变，但在100℃的溶液中却很快完全失去活性。通常低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。
器材
①试管及试管架。
②恒温水浴。
③冰浴。
④沸水浴。
试剂
①含0.3％氯化钠的0.2％淀粉溶液：需新鲜配制。
②稀释200倍的唾液：用蒸馏水漱口，以清除食物残渣。再含一口蒸馏水，30s后使其流入量筒并稀释200倍(稀释倍数可根据各人唾液酶活性调整)，混匀备用。
③碘化钾-碘溶液：碘化钾20g及碘10g溶于100ml水中，使用前稀释10倍。
操作
淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。
取3支试管，编号后按下表加入试剂，摇匀后，将1号、3号试管放入37℃恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10min后取出，将2号管内液体分为两半，用碘化钾-碘溶液来检验1、2、3管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果，将2号管剩下的一半溶液放入37℃水浴中继续保温10min后，再用碘液实验，结果如何?
表 温度对酶活影响实验操
二、pH值对酶活性的影响
原理
酶的活力受反应溶液中pH值的影响极为显著，不同酶的最适pH值不同。本实验观察pH值对唾液淀粉酶活性的影响。
器材
①试管及试管架。
②移液管。
③滴管。
④50ml锥形瓶。
⑤恒温水浴。
试剂
①新配制的溶于0.3％氯化钠的0.5％淀粉溶液。
②稀释200倍的新鲜唾液。
③0.2mol／L磷酸氢二钠溶液。
④0.1mol／L柠檬酸溶液。
⑤碘化钾-碘溶液。
⑥pH试纸：pH5～8范围的试纸。
操作
取4个标号的50ml锥形瓶。用移液管按下表添加0.2mol／L磷酸氢二钠溶液和0.1mol／L柠檬酸溶液以制备pH5～8的4种缓冲液。
表 pH对酶活影响实验操作
从4个锥形瓶中各取缓冲液3ml，分别注入4支带有标号的试管中，随后于每个试管中添加0.5％淀粉溶液2ml和稀释200倍的唾液2ml。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔各为1min。将各试管内容物混匀，并依次置于37℃恒温水浴中保温。
第4管加入唾液2min后，每隔1min由第3管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小滴碘化钾-碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时，向所有试管依次添加1～2滴碘化钾-碘溶液。添加碘化钾-碘溶液的时间间隔，从第一管起，亦均为观察各试管内容物呈现的颜色，分析pH值对唾液淀粉酶活性的影响，并指出唾液淀粉酶的最适pH值。
三、唾液淀粉酶的活化和抑制
原理
酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。
器材
①恒温水浴。
②试管及试管架。
试剂
①0.1％淀粉溶液。
②稀释200倍的新鲜唾液。
③1％氯化钠溶液。
④1％硫酸铜溶液。
⑤1％硫酸钠溶液。
⑥碘化钾-碘溶液。
操作
按下表准备4支试管并依次加入各种试剂，反应后观察结果并记录。
表 唾液淀粉酶活化剂抑制实验的操作和结果记录
