医院感染监测规范
（WS/T312--2009）
1、范围
本标准规定了医院感染监测的管理与要求、监测方法及医院感染监测质量保证。
本标准适用于医院和妇幼保健院。有住院床位的其他医疗机构参照执行。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是标注日期的引用文件，期限随后所有的修改（不包括勘误内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
国家突发公共卫生事件相关信息报告管理工作规范（试行） 卫生部20##年
国家突发公共卫生事件应急预案 卫生部20##年
3 术语和定义
3．1 医院感染监测 nosocomial infection surveillance
长期、系统、连续地收集、分析医院感染在一定人群中的发生、分布及其影响因素，并将监测结果报送和反馈给有关部门和科室，为医院感染的预防、控制和管理提供科学依据。
3．2 患者日医院感染发病率 nosocomial infection incidence per patient-day
是一种累计暴露时间内的发病密度，指单位住院时间内住院患者新发医院感染的频率，单位住院时间通常用1000个患者住院日表示。
3．3全院综合性监测 hospital-wide surveillance
连续不断地对所有临床科室的全部住院患者和医务人员进行医院感染及其有关危险因素的监测。
3．4目标性监测 target surveillance
针对高危人群、高发感染部位等开展的医院感染及其危险因素的监测，如重症监护病房医院感染监测、新生儿病房医院感染监测、手术部位感染监测、抗菌药物临床应用与细菌耐药性监测等。
3．5 抗菌药物 antimicrobial agents
具杀菌或抑菌活性、主要供全身应用（含口服、肌肉注射、静脉注射、静脉滴注等，部分也可以用于局部）的各种抗生素、磺胺类、咪唑类、硝咪唑类、喹诺酮类、呋喃类等化学药物。通常不包括抗寄生虫药物、抗病毒药物、抗结核药物和局部使用抗菌药物等。
3．6 抗菌药物使用率 usage rate of antibiotic
出院患者中使用抗菌药物的比率。
3．7 抗菌药物使用剂量 dose of antibiotic use
住院患者抗菌药物的每日使用量。
3．8 规定日剂量频数（DDD频数） number of Defined Daily Dose
为某一抗菌药物的总消耗量除以该药的规定日剂量。
4 监测的管理与要求
4．1 医院应建立有效的医院感染监测与通报制度，及时诊断医院感染病例，分析发生医院感染的危险因素，采取针对性的预防与控制措施。并应将医院感染监测控制质量纳入医疗质量管理考核体系。
4．2 医院应培养医院感染控制专职人员和临床医务人员识别医院感染暴发的意识与能力。发生暴发时应分析感染源、感染途径，采取有效的控制措施。
4．3 医院应建立医院感染报告制度，发生下列情况的医院感染暴发，医疗机构应报告所在地的县（区）级地方人民政府卫生行政部门。报告包括初次报告和订正报告，订正报告应在暴发终止后一周内完成。报告表见附录A。
4．3．1医疗机构经调查证实发生以下情形时，应于12h内向所在地的县级地方人民政府卫生行政部门报告，并同时向所在地疾病预防控制机构报告。
a）5例以上的医院感染暴发。
b）由于医院感染暴发直接导致患者死亡。
c）由于医院感染暴发导致3人以上人身损害后果。
4．3．2医疗机构发生以下情形时，应按照《国家突发公共卫生事件相关信息报告管理工作规范（试行）》的要求在2h内进行报告：
a）10例以上的医院感染暴发事件。
b）发生特殊病原体或者新发病原体的医院感染。
c）可能造成重大公共影响或者严重后果的医院感染。
4．3．3医疗机构发生的医院感染和医院感染暴发属于法定传染病的，还应当按照《中华人民共和国传染病防治法》和《国家突发公共卫生事件应急预案》的规定进行报告。
4．4 医院应制定切实可行的医院感染监测计划，如年计划、季度计划等。监测计划内容主要包括人员、方法、对象、时间等。
4．5 医院应按以下要求开展医院感染监测：
a）新建或示开展过医院感染监测的医院，应先开展全院综合性监测。监测时间应不少于2年。
b）已经开展2年以上全院综合性监测的医院应开展目标性监测。目标性监测持续时间应连续6个月以上。
c）医院感染患病率调查应每年至少开展一次。
4．6 人员与设施
4．6．1 人员要求 医院应按每200张~250张实际使用病床，配备1名医院感染专职人员；专职人员接受监测与感染控制知识、技能的培训并熟练掌握。
4．6．2 设施要求 医院应在医院信息系统建设中，完善医院感染监测系统与基础设施；医院感染监测设施运转正常。
5 监测
5．1 医院感染监测方法 根据监测范围，分为全院综合性监测和目标性监测。
5．1．1 全院综合性监测，具体监测方法按照附录B进行。
5．1．2 目标性监测
5．1．2．1 手术部位感染的监测，具体监测方法按照附录C进行。
5．1．2．2 成人及儿童重症监护病房（ICU）医院感染监测，具体监测方法按照附录D进行。
5．1．2．3 新生儿病房医院感染监测，具体监测方法按照附录E进行。
5．1．2．4 细菌耐药性监测，具体监测方法按照附录F进行。
5．2 医院感染调查方法
5．2．1 患病率调查，了解住院患者医院感染患病率。具体调查方法按照附录G进行。
5．2．2 临床抗菌药物使用调查，帮助了解患者抗菌药物使用率。具体调查方法按照附录H进行。
5．3 监测信息的收集
5．3．1 宜主动收集资料。
5．3．2 患者感染信息的包括查房、病例讨论、查阅医疗与护理记录、实验室与影像学报告和其他部门的信息。
5．3．3 病原学信息的收集包括临床微生物学、病毒学、病理学和血清学检查结果。
5．3．4 收集和登记患者基本资料、医院感染信息、相关危险因素、病原体及病原菌的药物敏感试验结果和抗菌药物的使用情况。
附录A（规范性附录）
医院感染暴发报告表
□初次 □订正
A．1 开始时间： 年 月 日 *至 年 月 日
A．2 发生地点： 医院（妇幼保健院） 病房（病区）
A．3 感染初步诊断： ；*医院感染诊断：
A．4 可能病原体： ； *医院感染病原体：
A．5 累计患者数： 例， *感染患者数： 例
A．6 患者感染预后情况：痊愈 例，正在治疗 例，病危 例，死亡 例
A．7可能传播途径：呼吸道（ ）、消化道（ ）、接触传播（ ）、血液体液（ ）、医疗器械（侵入性操作）（ ）、不明（ ）、 *传播途径：
A．8 可能感染源：患者、医务人员、医疗器械、医院环境、食物、药物、探视者、陪护者、感染源不明。 *感染源：
A．9 感染患者主要相同临床症状：
A．10 医院环境卫生学主要监测结果：
A．11 感染患者主要影像学检查结果（X光、CT、MRI、B超）：
A．12 感染患者主要病原学检查结果（涂片革兰染色、培养、病毒检测结果、血清学检查结果、同源性检查结果等）：
A．13 暴发的详细描述（主要包括暴发开始时间、地点、罹患情况、主要临床表现与实验室检查结果、调查处置经过与效果、暴发原因初步分析、*需要总结的经验等）：
报告单位： 填表人： 报告日期： 联系人电话（手机）：
详细通讯地址与邮政编码：
填表注意事项：分初次报告和订正报告，请标明并逐项填写，带*号的内容供订正报告时填写。暴发事件的详细描述本表不够时可另附纸填写。
附录B （规范性附录）
全院综合性监测
B．1 监测对象 住院患者(监测手术部位感染发病率时可包括出院后一定时期内的患者)和医务人员。
B．2 监测内容（最小数据量要求）
B．2．1 基本情况：监测月份、住院号、科室、床号、姓名、年龄、入院日期、出院日期、住院天数、住院费用、疾病诊断、疾病转归（治愈、好转、未愈、死亡、其他）、切口类型（清洁切口、清洁-污染切、污染切口）。
B．2．2 医院感染情况：感染日期、感染诊断、感染与原发疾病的关系（无影响、加重病情、直接死亡、间接死亡）、医院感染危险因素（中心静脉插管、泌尿道插管、使用呼吸机、气管插管、气管切开、使用肾上腺糖皮质激素、放射治疗、抗肿瘤化不治疗、免疫抑制剂）及相关性、医院感染培养标本名称、送检日期、病原体名称、药物敏感试验结果。
B．2．3 监测月份患者出院情况：按科室记录出院人数，按疾病分类记录出院人数，按高危疾病记录出院人数，按科室和手术切口类型记录出院人数；或者同期住院患者住院日总数。
B．3 监测方法 宜采用主动监测，感染控制专职人员主动、持续地对调查对象的医院感染发生情况进行跟踪观察与记录。
B．3．1 各医院应建立医院感染报告制度，临床科室工程师应及时报告医院感染病例。
B．3．2 各医院应制定符合本院实际的、切实可行的医院感染监测计划并付诸实施。
B．3．3 专职人员应以查阅病历和临床调查患者相结合的方式调查医院感染病例。
B．3．4 医院感染资料的来源，包括以患者为基础和以实验室检查结果为基础的信息。
B．4 资料分析
B．4．1 医院感染发病率
医院感染（例次）发病率=同期新发医院感染病例（例次）数×100% （式B．1）
观察期间危险人群人数
观察观察危险人群人数以同期出院人数替代。
B．4．2 日医院感染发病率
日医院感染（例次）发病率=观察期间内医院感染新发病例（例次）数×1000‰ （式B．2）
同期住院患者住院日总数
B．5 总结和反馈 结合历史同期和上月医院感染发病率资料，对资料进行总结分析，提出监测中发现问题，报告医院感染管理委员会并向临床科室反馈监测结果和分析建议。
附录C （规范性附录）
手术部位感染监测
C．1 监测对象 被选定监测手术的所有择期和急诊手术患者。
C．2 监测内容
C．2．1 基本资料 监测月份、住院号、科室、床号、姓名、年龄、调查日期、疾病诊断、切口类型（清洁切口、清洁-污染切、污染切口）。
C．2．2 手术资料 手术日期、手术名称、手术腔镜使用情况、危险因素评分标准（见表C．1），包括手术持续时间、手术切口清洁度分类、美国麻醉协会（ASA）评分（见表C．2）、围手术期抗菌药物使用情况、手术医师。
C．2．3 手术部位感染资料 感染日期与诊断、病原体。
C．3 监测方法
C．3．1 宜采用主动的监测方法；也可专职人员监测与临床医务人员报告相结合；宜住院监测与出院监测相结合。
C．3．2 每例监测对象应填写手术部位感染监测登记表。
表C．1危险因素评分标准
表C．2 ASA评分表
C．4 资料分析
C．4．1 手术部位感染发病率
手术部位感染发病率=指定时间内某种手术患者的手术部位感染数×100% （式C．1）
指定时间内某种手术患者数
C．4．2 不同危险指数手术部位感染发病率
某危险指数手术感染发病率=指定手术该危险指数患者的手术部位感染数×100% （式C．2）
指定手术某危险指数患者的手术数
C．4．3 外科医师感染发病专率
C．4．3．1 外科医师感染发病专率
某外科医师感染发病专率=该医师在该时期的手术部位感染病例数×100% （式C．3）
某医师在某时期进行的手术病例数
C．4．3．2 不同危险指数等级的外科医师感染发病专率
某医师不同危险指数感染发病专率=
该医师不同危险指数等级患者的手术部位感染例数×100% （式C．4）
某医师不同危险指数等级患者手术例数
C．4．3．3 平均危险指数
平均危险指数=∑（危险指数等级×手术例数） （式C．5）
手术例数总和
C．4．3．4 医师调正感染发病专率
医师调正感染发病专率= 某医师的感染专率 （式C．6）
某医师的平均危险指数等级
C．5 总结和反馈 结合历史同期资料进行总结分析，提出监测中发现问题，报告医院感染管理委员会，并向临床科室反馈监测结果和建议。
附录D （规范性附录）
成人及儿童生病监护病房（ICU）医院感染监测
D．1 ICU感染
指患者在ICU发生的感染，即患者住进ICU时，该感染不存在也不处于潜伏期；患者转出ICU到其它病房后，48小时内发生的感染仍属ICU感染。
D．2 监测对象 ICU患者。
D．3 监测内容
D．3．1 基本资料 监测月份、住院号、科室、床号、姓名、性别、年龄、疾病诊断、疾病转归（治愈、好转、未愈、死亡、其他）。
D．3．2 医院感染情况 感染日期、感染诊断、感染与侵入性操作相关性（中心静脉插管、泌尿道插管、使用呼吸机）、医院感染培养标本名称、送检日期、检出病原体名称、药物敏感结果。
D．3．3 ICU患者日志 每日记录新住进患者数、住在患者数、中心静脉插管、泌尿道插管及使用呼吸机人数、记录临床病情分类等级及分值（表D．1）。
表D．1 临床病情分类标准及分值
D．4 监测方法
D．4．1 宜采用主动监测，也可专职人员监测与临床医务人员报告相结合。
D．4．2 填写医院感染病例登记表。
D．4．3 每天填写ICU患者日志，见表D．2。
D．4．4 ICU患者各危险等级登记表，见表D．3。
表D．2 ICU患者日志
ICU科别：内科、外科、妇科、儿科、综合、其他
监测月份： 年 月
D．4．5 临床病情等级评定 对当时住在ICU的患者按“临床病情分类标准及分值”（表D．1）进行病情评定，每周一次（时间相对固定），按当时患者的病情进行评定。每次评定后记录各等级（A、B、C、D及E级）的患者数（见表D．3）。
表D．3 ICU患者各危险等级登记表
医务人员手卫生规范
（WS/T313---2009）
前 言
根据《中华人民共和国传染病防治法》和《 医院感染管理办法》制定本标准。
附录A和附录B为规范性附录。
本标准由卫生部医院感染控制标准专业委员会提出，
1 范围
本标准规定了医务人员手卫生的管理与基本要求、手卫生设施、洗手与卫生手消毒、外科手消毒、手卫生效果的监测等。
本标准适用于各级各类医疗机构。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是标注日期的引用文件，其随后所有的修改(不包括勘误内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB 5749 生活饮用水卫生标准
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.1 手卫生 hand hygiene
为医务人员洗手、卫生手消毒和外科手消毒的总称。
3.2 洗手 handwashing
医务人员用肥皂(皂液)和流动水洗手，去除手部皮肤污垢、碎屑和部分致病菌的过程。
3.3 卫生手消毒 antiseptic handrubbing
医务人员用速干手消毒剂揉搓双手，以减少手部暂居菌的过程。
3.4 外科手消毒 surgical hand antisepsis
外科手术前医务人员用肥皂(皂液)和流动水洗手，再用手消毒剂清除或者杀灭手部暂居菌和减少常居菌的过程。使用的手消毒剂可具有持续抗菌活性。
3.5 常居菌 resident skin flora
能从大部分人体皮肤上分离出来的微生物，是皮肤上持久的固有寄居菌，不易被机械的摩擦清除。如凝固酶阴性葡萄球菌、棒状杆菌类、丙酸菌属、不动杆菌属等。一般情况下不致病。
3.6 暂居菌 transient skin f1ora
寄居在皮肤表层，常规洗手容易被清除的微生物。直接接触患者或被污染的物体表面时可获得，可随时通过手传播，与医院感染密切相关。
3.7 手消毒剂 hand antiseptic agent
用于手部皮肤消毒，以减少手部皮肤细菌的消毒剂，如乙醇、异丙醇、氯己定、碘伏等。
3.7.1 速干手消毒剂 alcobol-based hand rub
含有醇类和护肤成分的手消毒剂。包括水剂、凝胶和泡沫型。
3.7.2 免冲洗手消毒剂 waterless antiseptic agent
主要用于外科手消毒，消毒后不需用水冲洗的手消毒剂。包括水剂、凝胶和泡沫型。
3.8 手卫生设施 hand hygiene facilities
用于洗手与手消毒的设施，包括洗手池、水龙头、流动水、清洁剂、干手用品、手消毒剂等。
4 手卫生的管理与基本要求
4.1 医疗机构应制定并落实手卫生管理制度，配备有效、便捷的手卫生设施。
4.2 医疗机构应定期开展手卫生的全员培训，医务人员应掌握手卫生知识和正确的手卫生方法，保障洗手与手消毒的效果。
4.3 医疗机构应加强对医务人员手卫生工作的指导与监督，提高医务人员子卫生的依从性。
4.4 手消毒效果应达到如下相应要求:
a)卫生手消毒，监测的细菌菌落总数应≤10cfu/ cm2。
b)外科手消毒，监测的细菌菌落总数应≤5cfu/cm2。
5 手卫生设施
5.1 洗手与卫生手消毒设施
5.1.1 设置流动水洗手设施。
5.1.2 手术室、产房、导管室、层流洁净病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重症监护病房、新生儿室、母婴室、血液透析病房、烧伤病房、感染疾病科、口腔科、消毒供应中心等重点部门应配备非手触式水龙头。有条件的医疗机构在诊疗区域均宜配备非手触式水龙头。
5.1.3 应配备清洁剂。肥皂应保持清洁与干燥。盛放皂液的容器宜为一次性使用，重复使用的容器应每周清洁与消毒。皂液有浑浊或变色时及时更换，并清洁、消毒容器。
5.1.4 应配备干手物品或者设施，避免二次污染。
5.1.5 应配备合格的速干手消毒剂。
5.1.6 手卫生设施的设置应方便医务人员使用。
5.1.7 卫生手消毒剂应符合下列要求：
a）应符合国家有关规定。
b）宜使用一次性包装。
c）医务人员对选用的手消毒剂应有良好的接受性，手消毒剂无异味、无刺激性等。
5.2 外科手消毒设施
5.2.1 应配置洗手池。洗手池设置在手术间附近，水池大小、高矮适宜，能防止洗手水溅出，池面应光滑无死角易于清洁。洗手池应每日清洁与消毒。
5.2.2 洗手池及水龙头的数量应根据手术间的数量设置，水龙头数量应不少于手术间的数量，水龙头开关应为非手触式。
5.2.3 应配备清洁剂，并符合5.1.3的要求。
5.2.4 应配备清洁指甲用品；可配备手卫生的揉搓用品。如配备手刷，刷毛应柔软，并定期检查，及时剔除不合格手刷。
5.2.5 手消毒剂应取得卫生部卫生许可批件，有效期内使用。
5.2.6 手消毒剂的出液器应采用非手触式。消毒剂宜采用一次性包装，重复使用的消毒剂容器应每周清洁与消毒。
5.2.7 应配备干手物品。干手巾应每人一用，用后清洁、灭菌；盛装消毒巾的容器应每次清洗、灭菌。
5.2.8 应配备计时装置、洗手流程及说明图。
6 洗手与卫生手消毒
6.1 洗手与卫生手消毒应遵循以下原则：
a)当手部有血液或其他体液等肉眼可见的污染时，应用肥皂(皂液)和流动水洗手。
b)手部没有肉眼可见污染时， 宜使用速干手消毒剂消毒双手代替洗手。
6.2 在下列情况下，医务人员应根据 6.1的原则选择洗手或使用速干手消毒剂：
a)直接接触每个患者前后，从同一患者身体的污染部位移动到清洁部位时。
b)接触患者粘膜、破损皮肤或伤口前后，接触患者的血液、体液、分泌物、排泄物、伤口敷料等之后。
c)穿脱隔离衣前后，摘手套后。
d)进行无菌操作、接触清洁、无菌物品之前
e)接触患者周围环境及物品后。
f)处理药物或配餐前。
6. 3 医务人员在下列情况时应先洗手，然后进行卫生手消毒：
a) 接触患者的血液、体液和分泌物以及被传染性致病微生物污染的物品后。
b) 直接为传染病患者进行检查、治疗、护理或处理传染患者污物之后。
6. 4 医务人员洗手方法，见附录A。
6.5 医务人员卫生手消毒应遵循以下方法：
a）取适量的速干手消毒剂于掌心。
b）严格按照附录A医务人员洗手方法A.3揉搓的步骤进行揉搓。
c）揉搓时保证手消毒剂完全覆盖手部皮肤，直至手部干燥。
7 外科手消毒
7.1 外科手消毒应遵循以下原则：
a）先洗手，后消毒。
b）不同患者手术之间、手套破损或手被污染时，应重新进行外科手消毒。
7.2 洗手方法与要求
7.2.1 洗手之前应先摘除手部饰物，并修剪指甲，长度应不超过指尖。
7.2.2 取适量的清洁剂清洗双手、前臂和上臂下1/3，并认真揉搓。清洁双手时，应注意清洁指甲下的污垢和手部皮肤的皱褶处。
7.2.3 流动水冲洗双手、前臂和上臂下1/3。
7.2.4 使用干手物品擦干双手、前臂和上臂下1/3。
7.3 外科手消毒方法
7.3.1 冲洗手消毒方法 取适量的手消毒剂涂抹至双手的每个部位、前臂和上臂下1/3，并认真揉搓2min~6min，用流动水冲净双手、前臂和上臂下1/3，无菌巾彻底擦干。流动水应达到GB5749的规定。特殊情况水质达不到要求时，手术医师在戴手套前，应用醇类手消毒剂再消毒双手后戴手套。手消毒剂的取液量、揉搓时间及使用方法遵循产品的使用说明。
7.3.2 免冲洗手消毒方法 取适量的免冲洗手消毒剂涂抹至双手的每个部位、前臂和上臂下1/3，并认真揉搓直至消毒剂干燥。手消毒剂的取液量、揉搓时间及使用方法遵循产品的使用说明。
7.4 注意事项
7.4.1 不应戴假指甲，保持指甲周围组织的清洁。
7.4.2 在整个手消毒过程中应保持双手位于胸前并高于肘部，使水由手部流向肘部。
7.4.3 洗手与消毒可使用海绵、其他揉搓用品或双手相互揉搓。
7.4.4 术后摘除外科手套后，应用肥皂（皂液）清洁双手。
7.4.5 用后的清洁指甲用具、揉搓用品如海绵、手刷等，应放到指定的容器中；揉搓用品应每人使用后消毒或者一次性使用；清洁指甲用品应每日清洁与消毒。
8 手卫生效果的监测
8. 1 监测要求
医疗机构应每季度对手术室、产房、导管室、层流洁净病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重症监护病房、新生儿室、母婴室、血液透析病房、烧伤病房、感染疾病科、口腔科等部门工作的医务人员手进行消毒效果的监测；当怀疑医院感染暴发与医务人员手卫生有关时，应及时进行监测，并进行相应致病性微生物的检测。
8.2 监测方法
按照附录B进行。
8.3 手卫生合格的判断标准
细菌菌落总数符合4.4的要求。
附录 A (规范性附录) 医务人员洗手方法
A.1 在流动水下，使双手充分淋湿。
A.2 取适量肥皂(皂液)，均匀涂抹至整个手掌、手背、手指和指缝。
A.3 认真揉搓双手至少15秒钟，应注意清洗双手所有皮肤，包括指背、指尖和指缝，具体揉搓步骤为：
A.3.1 掌心相对，手指并拢，相互揉搓，见图A.1。
A.3.2 手心对于背沿指缝相互揉搓，交换进行，见图A.2。
A.3.3 掌心相对，双手交叉指缝相互揉搓，见图A.3。
A.3.4 弯曲手指使关节在另一手掌心旋转揉搓，交换进行，见图A.4。
A.3.5 右手握住左手大拇指旋转揉搓，交换进行，见图 A.5。
A.3.6 将五个手指尖并拢放在另一手掌心旋转揉搓，交换进行，见图A.6。
A 4 在流动水下彻底冲净双手，擦干，取适量护手液护肤。
附录 B (规范性附录)
手卫生效果的监测方法
B.1 采样时间 在接触患者、进行诊疗活动前采样。
B.2 采样方法 被检者五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液浸湿的棉拭子在双手指曲面从指端到指端往返涂擦2次，一只手涂擦面积约30cm2，涂擦过程中同时转动棉拭子；将棉拭子接触操作者的部分剪去，投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，及时送检。
B.3 检测方法 将采样管在混匀器上振荡20秒或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，平皿内加入已溶化的45℃~48℃的营养琼脂15ml~18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±l℃混箱培养48h，计数菌落数。
细菌菌落总数计算方法：
细菌菌落总数(cfu/ cm2)=平板上菌落数×稀释倍数/采样面积(cm2) (式B.