Q：样品如何处理？

A：根据样品分离目的不同，主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。

1、还原SDS处理：在上样buffer中加入SDS和DTT（或Beta巯基乙醇）后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。

2、带有烷基化作用的还原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团，得到较窄的谱带；另碘乙酸胺可捕集过量的DTT，而防止银染时的纹理现象。100μl样品缓冲液中10μl 20%的碘乙酸胺，并在室温保温30min。

3、非还原SDS处理：生理体液、血清、尿素等样品，一般只用1%SDS沸水中煮3min，未加还原剂，因而蛋白折叠未被破坏，不可作为测定分子量来使用。

Q：SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分的作用？

A:聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关；

制胶缓冲液：浓缩胶选择pH6.7，分离胶选择pH8.9，选择tris－HCL系统，具体作用后面介绍；

TEMED与AP：促凝作用，加速聚丙烯酰胺的凝固；

十二烷基硫酸钠（SDS）：阳离子去污剂，作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。

Q：提高SDS-PAGE电泳分辨率的途径？

A：1、聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝胶的分辨率。建议做法：待凝胶在室温凝固后，可在室温下放置一段时间使用。忌即配即用或4度冰箱放置，前者易导致凝固不充分，后者可导致SDS结晶。一般凝胶可在室温下保存4天，SDS可水解聚丙烯酰胺。

2、一般常用的有氨基黑、考马斯亮蓝、银染色三种染料，不同染料又各自不同的染色方法，具体可参照郭尧君编著的《蛋白质电泳技术手册》P82-103。

Q：“微笑”（两边翘起中间凹下）形带原因？

A：主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶中。

处理办法：待其充分凝固再作后续实验。

Q：“皱眉”（两边向下中间鼓起）形带原因？

A：主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。

处理办法：可在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。

Q：为什么带出现拖尾现象？

A：主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。

处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；电泳缓冲液时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。

Q：为什么带出现纹理现象？

A：主要是样品不溶性颗粒引起的。

处理办法：加样前离心；加适量样品促溶剂。

Q：什么是“鬼带”，如何处理？

A：“鬼带”就是在跑大分子构象复杂的蛋白质分子时，常会出现在泳道顶端（有时在浓缩胶中）的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀，主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分子，其分子量要比目标条带大，有时不能进入分离胶。但它却于目标条带有相同的免疫学活性，在WB反应中可见其能与目标条带对应的抗体作用。

处理办法：在加热煮沸后，再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇，以补充不足的还原剂；或可加适量EDTA来阻止还原剂的氧化。

Q：为什么溴酚蓝不能起到指示作用？

A：我们在实验中常会遇到溴酚蓝已跑出板底，但蛋白质却还未跑下来的现象。主要与缓冲液和分离胶的浓度有关。

处理办法：更换正确pH值的Buffer；降低分离胶的浓度。

Q：为什么电泳的条带很粗？

A：电泳中条带很粗是常见的事，主要是未浓缩好的原因。

处理办法：适当增加浓缩胶的长度；保证浓缩胶贮液的pH正确（6.7）；适当降低电压；

Q：为什么电泳电压很高而电流却很低呢？

A：这种现象一般初学者易出现。比如电压50v以上，可电流却在5mA以下。主要是由于电泳槽没有正确装配，电流未形成通路。包括：a.内外槽装反；b.外槽液过少；c.电泳槽底部的绝缘体未去掉（比如倒胶用的橡胶皮）。

处理办法：电泳槽正确装配即可。

Q：浓缩胶与分离胶断裂、板间有气泡对电泳有影响吗？

A：这主要出现在初学者中，一般对电泳不会有太大的影响。前者主要原因是拔梳子用力不均匀或过猛所致；后者是由于在解除制胶的夹子后，板未压紧而致空气进入引起的。

二 .实验原理

?      带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移动，这种现象称为电泳。

?      PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。

?      SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基磺酸钠）， SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

?      SDS电泳的成功关键之一是电泳过程中，待别是样品制备过程中蛋白质与SDS的结合程度。影响它们结合的因素主要有三个：

1)       溶液中SDS单体的浓度，当单体浓度大于1mmol/L时大多数蛋白质与SDS结合的重量比为1:1.4，如果单休浓度降到0.5 mmol/L以下时，两者的结合比仅为1: 0.4这样就不能消除蛋白质原有的电荷差别，为保证蛋白质与SDS的充分结合，它们的重量比应该为1:4或1:3

2)       样品缓冲液的离子强度。SDS电泳的样品缓冲液离子强度较低，通常是10～100mmol/L

3)       二硫键是否完全被还原

4)       采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测蛋白质分子量时，只有完全打开二硫键，蛋白质分子才能被解聚，SDS才能定量地结合到亚基上而给出相对迁移率和分子量对数的线性关系。因此在用SDS处理样品同时往往用巯基乙醇处理，巯基乙醇是一种强还原剂，它使被还原的二硫键不易再氧化，从而使很多不溶性蛋白质溶解而与SDS定量结合。

5)       有许多蛋白质是由亚基（如血红蛋白）或两条以上肽链（如胰凝乳蛋白酶）组成的，它们在SDS和巯基乙醇作用下，解离成亚基或单条肽链，因此这一类蛋白质，测定时只是它们的亚基或单条肽链的MW。

6)       已发现有些蛋白质不能用SDS-PAGE测定分子量。如电荷异常或构象异常的蛋白质，带有较大辅基的蛋白质（某些糖蛋白）以及一些结构蛋白，如胶原蛋白等。

7)       一般至少采用两种方法测定未知样品的分子量，互相验证。

聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂N，N，N¢，N¢—四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。

第二篇：实验总结2

还封小学实验教学工作总结

通过实验，学生的观察能力、实验能力、操作能力、比较能力、分类能力、推理能力等得到了不同程度的提高。养成了爱科学、学科学的学习积极性，做实验能正确规范地操作，善于观察，乐于探究、总结。并能将学到的相关知识应用于生活实际中，能够解释常见的自然现象及生活现象。

小学《科学》教材体现了面向全体学生、具有弹性和开放性的特点。在使用这一教材中，我感觉这一教材在编排中充分考虑了学生在生活环境、经验背景、个性特点等方面存在的差异，在学习内容、教学活动、设计制作、综合评价等多方面都给学生和教师提供了更多的选择机会和创新空间。它并不象小学自然教材那样内容非常的固定，实验过程、方法非常的单调、一陈不变，而是相当的灵活，教师可依据学校和学生的实际进行调节，而学生也可以有更多的自行探索创新的空间，因此，我觉得这一教材具有弹性和开放性的特点。

随着课程改革的深入进行，教师确实转变了观念，构建了新的教育教学理念，自学相关知识，及时查阅课程改革的相关资料，借鉴实验区的优秀经验，在学校教研课题“小组合作探究学习”的大课题的前提下，确立了“提出问题、做出假设、设计实验、操作实验、总结规律、交流互补”的六步教学模式，课堂真正体现了学生自主探究的理念。根据年级特征及学生的年龄特征，在教学中教师扶放有度，高年级可完全放手让学生自行操作，中年级在教师的适当帮助下可进行自主探究(除带有危险性的操作外)，学生的自主能动性被充分地调动起来，学习的兴趣浓厚，实验室成了学生爱去、常去的乐园。

在抓好课堂教学的同时，根据班级具体情况安排指导学生参与课外研究，将课堂教学延伸到课外，丰富了学生的知识，培养了学习科学知识的兴趣，提高了技能，培养学生长期坚持实验、连续观察记录、查阅资料的学习习惯，逐步提高学生的科学素养，鼓励学生走进大自然探究科学知识，学习和应用科学知识解决生活中的实际问题。在本学期中，多数学生主动参与，自主探究，积极性非常高。很多学生积极参与科普制作竞赛，体现了他们对科普知识的热爱。

实验室、准备室由实验专职教师全面管理，做到认真负责，定期清洗、整理、保养、核对仪器、药品的使用情况，及时上帐下帐，做到帐物相符，仪器得到了有效保管和使用，平时填写好各种表册，认真对待实验登记表的填写。

今后，我校将继续转变观念，重视学生学法的培养、指导，充分发挥师生的创造性和积极性，积极开展实验教学的改革和探索，努力培养学生爱科学、学科学、用科学的积极性，保证实验开出率继续保持甚至超过100%。

还封小学

20xx年x月

第三篇：乙酰苯胺的制备(实验报告实验总结范文模板)

（实验报告）乙酰苯胺的制备

【目的要求】

⑴ 熟悉氨基酰化反应的原理及意义，掌握乙酰苯胺的制备方法； ⑵ 进一步掌握分馏装置的安装与操作；

⑶ 熟练掌握重结晶、趁热过滤和减压过滤等操作技术。

【预习指导】

⑴ 预习实验原理，了解乙酰化试剂的反应活性及用乙酸作乙酰化剂制备乙酰苯胺的方法。

⑵ 认真阅读重结晶的原理和意义，复习趁热过滤和减压过滤操作技术。 ⑶ 通过查阅资料填写下表：

【实验原理】

乙酰苯胺为无色晶体，具有退热镇痛作用，是较早使用的解热镇痛药，因此俗称“退热冰”。乙酰苯胺也是磺胺类药物合成中重要的中间体。由于芳环上的氨基易氧化，在有机合成中为了保护氨基，往往先将其乙酰化转化为乙酰苯胺，然后再进行其他反应，最后水解除去乙酰基。

乙酰苯胺可由苯胺与乙酰化试剂如：乙酰氯、乙酐或乙酸等直接作用来制备。反应活性是乙酰氯＞乙酐＞乙酸。由于乙酰氯和乙酐的价格较贵，本实验

选用纯的乙酸（俗称冰醋酸）作为乙酰化试剂。反应式如下：

NH2

+

CH3COOH

NHCOCH3

+

H2O

苯胺 乙酸 乙酰苯胺

冰醋酸与苯胺的反应速率较慢，且反应是可逆的，为了提高乙酰苯胺的产率，一般采用冰醋酸过量的方法，同时利用分馏柱将反应中生成的水从平衡中移去。由于苯胺易氧化，加入少量锌粉，防止苯胺在反应过程中氧化。 乙酰苯胺在水中的溶解度随温度的变化差异较大（20℃，0.46g；100℃，5.5g），因此生成的乙酰苯胺粗品可以用水重结晶进行纯化。其操作流程如下：

馏出液

水

乙酸水水溶性杂质水水溶性杂质

固相乙酰苯胺

固相

活性炭有色杂质

【仪器药品】

圆底烧瓶(100mL) 刺形分馏柱 直形冷凝管 接液管 量筒（10mL） 温度计（200℃） 烧杯（250mL） 吸滤瓶 布氏漏斗 小水泵 保温漏斗 电热套

苯胺 冰醋酸 锌粉 活性炭

【实验步骤】

⑴ 酰化

在100ml圆底烧瓶中，加入5 ml新蒸馏的苯胺［1］、8.5ml冰醋酸和0.1g锌粉。立即装上分馏柱，在柱顶安装一支温度计，用小量筒收集蒸出的水和乙酸。实验装置参考图16-9。用电热套缓慢加热至反应物沸腾。调节电压，当温度升至约105℃时开始蒸馏。维持温度在105℃左右约30min，这时反应所生成的水基本蒸出。当温度计的读数不断下降时，则反应达到终点，即可停止加热。

⑵ 结晶抽滤

在烧杯中加入100ml冷水，将反应液趁热［2］以细流倒入水中，边倒边不断搅拌，此时有细粒状固体析出。冷却后抽滤，并用少量冷水洗涤固体，得到白色或带黄色的乙酰苯胺粗品。

⑶ 重结晶

将粗产品转移到烧杯中，加入100ml水，在搅拌下加热至沸腾。观察是否有未溶解的油状物，如有则补加水，直到油珠全溶。稍冷后，加入0.5g活性炭，并煮沸10min。在保温漏斗中趁热过滤除去活性炭［3］。滤液倒入热的烧杯中。然后自然冷却至室温，冰水冷却，待结晶完全析出后，进行抽滤。用少量冷水洗涤滤饼两次，压紧抽干。将结晶转移至表面皿中，自然晾干后称量，计算产率。

【注意事项】

⑴ 反应所用玻璃仪器必须干燥。

⑵ 锌粉的作用是防止苯胺氧化，只要少量即可。加得过多，会出现不溶于水的氢氧化锌。

⑶ 反应时分馏温度不能太高，以免大量乙酸蒸出而降低产率。

⑷ 重结晶过程中，晶体可能不析出，可用玻璃棒摩擦烧杯壁或加入晶种使晶体析出。

⑸ 冰醋酸具有强烈刺激性，要在通风橱内取用。 ⑹ 切不可在沸腾的溶液中加入活性炭，以免引起暴沸。 【注释】

【1】久置的苯胺因为氧化而颜色较深，使用前要重新蒸馏。因为苯胺的沸点较高，蒸馏时选用空气冷凝管冷凝，或采用减压蒸馏。

【2】若让反应液冷却，则乙酰苯胺固体析出，沾在烧瓶壁上不易倒出。 【3】趁热过滤时，也可采用抽滤装置。但布氏漏斗和吸滤瓶一定要预热。滤纸大小要合适，抽滤过程要快，避免产品在布氏漏斗中结晶。

思 考 题

⑴ 用乙酸酰化制备乙酰苯胺方法如何提高产率？

【参考答案】

1、加入冰醋酸使之与苯胺反应最慢易于控制 2、增加乙酸的用量减少可逆反应，得到较高产率

3、保持沸腾不断除去生成的水，有效的使平衡向正方向移动 4、为防止苯胺被氧化加入锌粉

⑵ 反应温度为什么控制在105℃左右？过高过低对实验有什么影响？ 【参考答案】

因为该反应为可逆反应，不断除去反应生成物水，能有效地使平衡正向进行，从而提高反应产率。而水的沸点为100℃，乙酸的沸点为117℃，温度保持在105℃，能使水被蒸馏出去而乙酸不会，进而既除了水，又减少反应物醋酸的损失。

⑶ 根据反应式计算，理论上能产生多少毫升水？为什么实际收集的液体量多于理论量？ 【参考答案】

因为醋酸的沸点是118.C，虽然高于水的沸点，但是醋酸易挥发，，在加热的同时会有醋酸蒸发出来，经过冷凝后而收集下来，所以要比理论值多。

⑷ 反应终点时，温度计的温度为何下降？ 【参考答案】

苯胺+乙酸----->乙酰苯胺+水

该反应是可逆反应，为了促进反应，会利用分馏将反应生成的水蒸出，以推进反应不断向右进行，实验时的温度是100-110度，虽然乙酸沸点才97度，水的沸点100度，但是通过分馏柱，只有少量乙酸被蒸出，大部分水会被分馏柱分出反应结束时，没有水生成了，没有馏分出来，温度计的测温小球就接触不到蒸汽，自然温度就下降了。