实验6 血红蛋白含量的测定(必修)
酸化血红蛋白稀释测定法(改良沙利氏法)
[目的与原理]
掌握测定鱼类血红蛋白含量的原理和方法,应用改良沙利氏法测定不同鱼类血红蛋白含量。
本实验是应用比色法测定鱼的血红蛋白量。血红蛋白本身的色泽,常随所结合的氧量多
少而改变,不便比色。但是加入稀盐酸于血液中可使血红蛋白变成不易变色的高铁血红蛋白,这就可以与标准色相比,从而测出其含量。通常以每100ml血液中含血红蛋白克数来表示,正常鱼血红蛋白含量为7—8g。
[实验对象]
鲤、鲫或草鱼。
[试剂与器材]
血红蛋白比色计,搪瓷盘,注射器,凹瓷盘,小试管,试管架,蒸馏水,75%酒精,棉球,0.1mol/L盐酸(配置盐酸用具),蒸馏水,滴管,纱布,烧杯,抗凝剂(1%肝素钠溶液或10%草酸钾溶液)。
[实验步骤]
1、了解血红蛋白比色计的构成 血红蛋白计主要包括吸血管、比色计和比色管等部件。
吸血管为一厚壁毛细玻璃管,其上有10μl、20μl的刻度,尾端连有橡皮头,供吸血用。比色计的两侧,装有标准浓度的高铁血红蛋白溶液,也有用比色玻璃柱(或片)来代替的。比色管可插在比色计中,与两侧的标准比色柱进行比色。比色管的两侧通常刻有两行刻度。一行为血红蛋白的绝对值,以g计数(每100毫升血液中所含血红蛋白的克数)来表示,刻度范围为2~22。另一行为血红蛋白相对值,以%(即相当于正常平均值的百分数)来表示,
刻度范围为10%~160%。目前测定常用绝对值来表示。
2、用蒸馏水将比色管洗净,吸血管则依次用蒸馏水,95%酒精和乙醚洗净干燥备用。
3、用滴管加0.1mol/L盐酸4—6滴到刻度比色管内,约加到管下端刻度“2”或“10%”
处为止。
4、采血:采血方法见实验49,用吸血管吸血至20μl刻度(要准确)。用绵球仔细将管
尖端外面的血拭去。
5、将吸血管中血液轻轻地滴到比色管中盐酸底部,并用上层较清的盐酸溶液反复清洗
…… …… 余下全文