生物实验报告

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实验题目：ABO血型鉴定

实验目的：1.掌握血涂片的制作，了解各种血细胞的结构特点

2.掌握ABO血型的鉴定方法

实验原理：人类的ABO血型遗传是由基因决定的。很多時间，一个基因只包含两个等位基因。但是，控制血型的基因I则有三个不同等位基因。即同一时间内，一个位点可以有其中任何两个等位基因出现。

等位基因A使红血球产生抗原A；

等位基因B使红血球产生抗原B；

等位基因O使红血球不产生抗原；

等位基因A和B为等显性，O对A和B均为隐性。

ＡＢＯ血型鉴定的原理是根据红细胞上有或无Ａ抗原和Ｂ抗原或AB抗原，将血型分为Ａ型、Ｂ型、ＡＢ型及Ｏ型四种。本实验采用红细胞凝集试验，用已知抗Ａ和抗Ｂ单克隆抗体来测定红细胞上有无相应的Ａ抗原或Ｂ抗原或AB抗原来确定ABO血型。

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实验人员：

实验日期：20xx年9月21日 室温：27℃ 大气压：1个标准大气压

实验名称： ABO血型鉴定

（一） 实验目的:通过本实验学习ABO血型鉴定的原理和方法。

（二） 实验对象：人体

（三） 实验步骤：（略）

（四） 实验结果：

表10-1 实验情况

标准A血清 标准B血清

人血凝集情况 不凝集 凝集

从上表可知：人血与标准A血清（含抗B抗体）混合后不发生凝集；人血与标准B血清（含抗A抗体）混合后发生凝集。

（五） 讨论：

血型通常是指红细胞膜上特异性抗原的类型。若将血型不相容的两个人的血液滴加在玻片上并使之混合，则红细胞可凝集成簇，这一现象称为红细胞凝集。在补体的作用下，可引起凝集的红细胞破裂，发生溶血。当给人体输入血型不相容的血液时，在血管内可发生红细胞凝集和溶血反应，甚至危及生命。红细胞凝集的本质是抗原-抗体反应。红细胞膜上抗原的特异性取决于抗原决定簇，这些抗原在凝集反应中被称为凝集原。能与红细胞膜上的凝集原起反应的特异抗体则称为凝集素。凝集素为γ-球蛋白，存在于血浆中。发生抗原-抗体反应时，由于每个抗体上具有2～10个抗原结合位点，因此抗体可在若干个带有相应抗原的红细胞之间形成桥梁，使它们聚集成簇，从而发生凝血。根据红细胞膜上是否存在A抗原和B抗原可将血液分为四种ABO血型：红细胞膜上只含有A抗原者为A型；只含B抗原者为B型；含有A与B两种抗原者为AB型；A和B两种抗原均无者为O型。不同血型的人的血清中含有不同的抗体，但不会含有与自身红细胞抗原相对应的抗体。在A型血的血清中，只含有抗B抗体；B型血的血清中只含有抗A抗体；AB型血的血清中没有抗A和抗B抗体；而O型血的血清中则含有抗A和抗B两种抗体。

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生理盐水凝集法

①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。

②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。

红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。

玻片法凝集结果判断：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，镜下红细胞分散。

在低倍镜下凝集程度强弱判断标准：

①呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞为（++++）。

②呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞为（+++）。

③数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占1／2为（++）。

④肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集团中有5～8个以上红细胞凝集为（+）。

⑤可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（±）。

⑥可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。

⑦镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）。

凝胶微柱法

是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。 抗A、抗B和抗AB标准血清标准

准血清均采自健康人，并应符合下述条件：①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。④冷凝集素效价：在1：4以下。⑤无菌。⑥灭活补体。 [3]

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实验三 ABO血型鉴定

一、实验目的

1、学习鉴别血型的方法

2、观察红细胞凝集现象

二、实验原理

血型是指红细胞的血型，是根据存在于红细胞膜外表面的特异性抗原来确定的，这种抗原是由遗传基因决定的。血清中的抗体可与红细胞膜上的不同抗原结合，产生凝集反应，最后发生红细胞的溶解。

ABO血型系统根据受试者红细胞上是否含有凝集原和凝集原的种类，将血型分为A, B, O及AB型。ABO血型鉴定是将受试者红细胞分别加入到标准A型血清、标准B型血清中进行鉴定。

三、实验材料

一次性采血针、消毒牙签、玻璃棒、标准抗A血清、标准抗B血清、75%酒精、酒精棉球、载玻片

四、实验步骤

1、将载玻片洗干净，擦干，不能留有水分，以防溶血。

2、在载玻片上滴上抗A血清、抗B血清。旁边放置两个消毒牙签。

3、用酒精棉球消毒无名指，等酒精挥发后，用采血针采血，将血液分别滴入血清中，再用牙签混合，室温下静置10~15分钟，观察凝集现象。

五、试验结果

1、只在抗A血清中有凝集反应，则血型为A型；

2、只在抗B血清中有凝集反应，则血型为B型；

3、在抗A及抗B血清中均有凝集反应，则血型为AB型；

4、在抗A及抗B血清中均无凝集反应，则血型为O型。

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实验8  ABO血型鉴定及分析

1 实验原理

血型通常是指红细胞膜上特异性抗原的类型，其分类的依据是红细胞表面是否存在某些可遗传的抗原物质。若将血型不相容的两个人的血液滴加在玻片上并使之混合，则红细胞可凝集成簇，这一现象称为红细胞凝集。造成凝集的机制是抗原-抗体反应。红细胞表面还有特异性糖蛋白抗原物质统称为凝集原（Agglutinogen）。在血浆中则含有与之相应的特异性抗体，称为凝集素（Agglutinin）。其中常用血型系统有ABO系统和Rh系统。

在ABO血型系统中，红细胞上只有凝集原A的为A型血，其血清中有抗B凝集素；红细胞上只有凝集原B的为B型血，其血清中有抗A的凝集素；红细胞上A、B两种凝集原都有的为AB型血，其血清中无抗A、抗B凝集素；红细胞上A、B两种凝集原皆无者为O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A的红细胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的红细胞发生凝集。

2 实验结果

从下表和图1可知：人血与标准A血清（含抗B抗体）混合后不发生凝集（反应10分钟后，仍然没有发生凝集）；人血与标准B血清（含抗A抗体）混合后发生凝集（反应迅速）。因此可以判定我的血型为A型血。

图1  血型检测实验结果

3分析与讨论

红细胞凝集的本质是抗原-抗体反应。红细胞膜上抗原的特异性取决于抗原决定簇，这些抗原在凝集反应中被称为凝集原。能与红细胞膜上的凝集原起反应的特异抗体则称为凝集素。凝集素为γ-球蛋白，存在于血浆中。发生抗原-抗体反应时，由于每个抗体上具有2～10个抗原结合位点，因此抗体可在若干个带有相应抗原的红细胞之间形成桥梁，使它们聚集成簇，从而发生凝血。根据红细胞膜上是否存在A抗原和B抗原可将血液分为四种ABO血型：红细胞膜上只含有A抗原者为A型；只含B抗原者为B型；含有A与B两种抗原者为AB型；A和B两种抗原均无者为O型。不同血型的人的血清中含有不同的抗体，但不会含有与自身红细胞抗原相对应的抗体。在A型血的血清中，只含有抗B抗体；B型血的血清中只含有抗A抗体；AB型血的血清中没有抗A和抗B抗体；而O型血的血清中则含有抗A和抗B两种抗体。

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1  目的

     指导工作人员进行ABO血型实验。

2  适用范围

     血型检验岗位工作人员

3  职责

     负责送检标本ABO血型的检测工作。

4  【原理】

ABO血型鉴定,是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原。同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或/和抗B。

【标本】

1． 静脉抗凝或不抗凝血1.5～2.0ml。

【器材】

载玻片、滴管、小试管、台式离心机或微柱凝胶离心机、玻璃棒、蜡笔或记号笔、显微镜等。

【试剂】

1.1 抗-A、抗-B试剂

1.2 5%和10%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液

1.3 受检者血清

1.4 受检者5%和10%红细胞盐水悬液

1.5 10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管

【操作步骤】

   2.1 试管法

2.1.1查抗原：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管加入抗-A和抗-B分型血清各 2滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。

2.1.2查抗体：取洁净小试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。

2.1.3立即1000rpm离心(离心时间为离心机校准时间)。

   2.1.4轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象,如肉眼观察不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜下观察有无凝集。

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ABO 血型鉴定

1、实验原理

根据红细胞上有或无A 抗原或（和）B 抗原，将血型分为A型、B型、AB型和O型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定A B O 血型。所谓正定型，是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原；所谓反定型，是用已知A红细胞B红细胞来测定血清中有无相应的抗A或（和）抗B。

2、使用的标本种类和收集方法

2.1、受检者5％红细胞悬液

红细胞悬液制备：采取受检者的红细胞，经盐水洗涤3次，取压积红细胞1滴加入生理盐水16滴（0.8ml）配成5％的红细胞悬液。

2.2、受检者血清

采取受检着静脉血2-3ml，置水浴箱中至完全凝固，3000转/分钟离心5分钟，分离上层血清备用。

2.3、标本接收

2.3.1、血型鉴定不接收临床送检标本（除外2.3.2规定内容）。

2.3.2、特殊急诊检验人员无法采血时，接收临床送检标本需登记采血护士姓名及送检护士姓名、并查对标本标签和检验单内容是否相符，如有不符可以拒收标本。

2.4、标本容器要求：洁净一次性塑料试管

3、使用的试剂

3.1、抗A 、抗B定型试剂（单克隆抗体）

3.1.1、批准文号：国药准字S10960081

3.1.2、生产厂家：长春生物制品研究所

3.1.3、保存条件：2-8℃避光保存，有效期内使用。

2．5 ％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液

2.5.1、制备方法

分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3 次，经盐水洗涤3次，取压积红细胞1滴加入生理盐水16滴（0.8ml）配成5％的红细胞悬液。

2.5.2、保存条件：配制好的5％的红细胞悬液在试管上注明红细胞血型及配制时间，2-8℃避光保存，有效期3天。

4、仪器：

4.1、仪器型号：TL80-1型医用离心机

4.2、仪器厂家：中国江苏姜岩是田里医疗器械有限公司

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