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生物：《现代生物科技专题》专题1-3 知识点总结 一、 基因工程 1、（a）基因工程的诞生 （一）基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA 重组和转基因技术，赋予 生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在 DNA 分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA 重组技术。 2、（a）基因工程的原理及技术 原理：基因重组 技术：（一）基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位 的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA 片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 2.“分子缝合针”——DNA 连接酶 (1)两种DNA 连接酶（E·coliDNA 连接酶和T4DNA 连接酶）的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E·coliDNA 连接酶来源于T4 噬菌体，只能将双链DNA 片段互补的黏性末端之间的 磷酸二酯键连接起来；而T4DNA 连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 (2)与DNA 聚合酶作用的异同:DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端， 形成磷酸二酯键。
DNA 连接酶是连接两个DNA 片段的末端，形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点， 供外源DNA 片段插入。③具有标记基因，供重组DNA 的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具 有自我复制能力的双链环状DNA 分子。 （3）其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒 (二)基因工程的基本操作程序 2 / 11 第一步：目的基因的获取 1.目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。 2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转 录法_和化学合成法_。 3.PCR 技术扩增目的基因 （1）原理：DNA 双链复制 （2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA 解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互 补DNA 链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA 聚合酶从引物起始互补链的合成。 第二步：基因表达载体的构建 1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达 和发挥作用。 2.组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 （1）启动子：是一段有特殊结构的DNA 片段，位于基因的首端，是RNA 聚合酶识别和结合 的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 （2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA 片段 ，位于基因的尾端。 （3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的 细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。 第三步：将目的基因导入受体细胞_ 1.转化的概
念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 2.常用的转化方法： 将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转化法，其次还有 基因枪法和 花粉 管通道法等。 将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。 将目的基因导入微生物细胞： 3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。 第四步：目的基因的检测和表达 1.首先要检测 转基因生物的染色体DNA 上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA 分子杂交 技术。 2.其次还要检测 目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用 用标记的目的基因作探针与 mRNA 杂交。 3 / 11 3.最后检测 目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取 蛋白质，用相应的 抗体进行 抗原－抗体杂交。 4.有时还需进行 个体生物学水平的鉴定。如 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。 （三）（b）基因工程的应用 1.植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。 2.动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。 3.基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。 （四）（a）蛋白质工程的概念 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或 基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需 求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）（1）蛋白质工程崛起的缘由： 基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质 （2）
蛋白质工程的基本原理：它可以根据人的需求来设计蛋白质的结构，又称为第二代的 基因工程。 基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找 到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白质工程特有的途径；以下按照基因工程的 一般步骤进行。（注意：目的基因只能用人工合成的方法） 设计中的困难：如何推测非编码区以及内含子的脱氧核苷酸序列 二、细胞工程 （一）植物细胞工程 1.理论基础（原理）：细胞全能性 2.植物组织培养技术（b） （1）过程：离体的植物器官、组织或细胞 ―――→愈伤组织 ―――→试管苗 ――→植物 体 （2）用途：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。 A 植物繁殖 微型繁殖：可以高效快速地实现种苗的大量繁殖 作物脱毒：采用茎尖组织培养来除去病毒（因为植物分生区附近的病毒极少或没有） 人工种子：以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经人工薄膜包装 得到的种子。优点：完全保持优良品种的遗传特性，不受季节的限制；方便储藏和运输 4 / 11 B 作物新品种培育 单倍体育种： a 过程：植株（AaBb）通过减数分裂得到花粉（AB、Ab、aB、ab 四种类型）；对花粉进行花 药离体培养（技术是植物组织培养）；得到单倍体植株；对其幼苗时期进行秋水仙素处理； 得到了正常的纯合二倍体植株（AABB、AAbb、aaBB、aabb 四种类型）。 b 优点：明显缩短育种年限 C 突变体利用：在组织培养中会出现突变体，通过从有用的突变体中选育出新品种（如筛选 抗病、抗盐、含高蛋白的突变体） D 细胞产物的生产：通过能够产生
对人们有利的产物的细胞进行组织培养，从而让它们能 够产生大量的细胞产物。 （3）地位：是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。 3.植物体细胞杂交技术 （1）过程： （2）诱导融合的方法： 物理法包括离心、振动、 电刺激等。化学法一般是 用聚乙二醇（PEG）作为 诱导剂。 （3）意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。 （二）动物细胞工程 1. 动物细胞培养（a） （1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后 放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 （2）动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→ 用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培 养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。 ② 植 物 细 胞 A 植 物 细 胞 B 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 ① ③ ④ ⑤ 图（2） 5 / 11 （3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞 数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象 称为细胞的接触抑制。 （4）动物细胞培养需要满足以下条件 ①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素， 以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危 害。 ②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血 清、血浆等天然成分。 ③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃＋0.5℃；
pH：7.2～7.4。 ④气体环境：95%空气＋5%CO2。O2 是细胞代谢所必需的，CO2 的主要作用是维持培养液的pH。 （5）动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医 学研究的各种细胞。 2.动物体细胞核移植技术和克隆动物 （1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。 （2）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；卵(母)细胞细胞质多， 营养丰富。 （3）体细胞核移植的大致过程是： 高产奶牛（提供体细胞）进行细胞培养；同时采集卵母细胞，在体外培养到减二分裂中期的 卵母细胞，去核（显微操作）[注：为什么要用卵细胞？它可以提供充足的营养；操作简便； 细胞质不会抑制细胞核全能性的表达]；将供体细胞注入去核卵母细胞；通过电刺激使两细 胞融合，供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎；将胚胎移入受体（代孕）母牛体内；生 出与供体奶牛遗传基因相同的犊牛 （4）体细胞核移植技术的应用： ①加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育；②保护濒危物种，增大存活数量； ③生产珍贵的医用蛋白；④作为异种移植的供体；⑤用于组织器官的移植等。
（5）体细胞核移植技术存在的问题： 克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。 3.动物细胞融合 6 / 11 （1）动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融 合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。 （2）动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物 原生质体融合的方法类似，常用的
诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。 （3）动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的不亲和性，成为研究细胞遗传、细胞免疫、 肿瘤和生物生物新品种培育的重要手段。 （4）动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较： 细胞工程 植物体细胞杂交 动物细胞融合 理论基础 细胞的全能性、细胞膜的流动性 细胞增殖、细胞膜的流动性 融合前处理 酶解法去除细胞壁（纤维素酶、果 胶酶） 注射特定抗原，免疫处理正常小鼠 诱导手段 物理法:离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG） 物理法:离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇 生物法：灭活的病毒（灭活的仙台病 毒） 诱导过程 第一步：原生质体的制备 （酶解法） 第二步：原生质体融合（物、化法） 第三步：杂种细胞的筛选和培养 第四步：杂种植株的诱导与鉴定 正常小鼠免疫处理 动物细胞的融合（物、化、生法） 杂交瘤细胞的筛选与培养 专一抗体检验阳性细胞培养 单克隆抗体的提纯 用途和意义 克服远缘杂交的不亲和障碍，大大 扩展杂交的亲本组合范围 应用：白菜-甘蓝等杂种植株 （1） 制备单克隆抗体 （2） 诊断、治疗、预防疾病，例 如“生物导弹”治疗癌症 4.单克隆抗体 （1）抗体：一个B 淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度 低、特异性差。 （2）单克隆抗体的制备过程： 对免疫小鼠注射特定的抗原蛋白（目的使小鼠产生了效应B 细胞）；提取B 淋巴细胞；同 时用动物细胞培养的方法培养骨髓瘤细胞并提取；促使它们细胞融合[注：融合的结果是有 7 / 11 很多不符合要求的；如有2 个B 淋巴细胞融合的细胞等，所以要进行筛选]；在特定的选择 培养基上筛
选出融合的杂种细胞[特点是能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体]；然后对 它进行克隆化培养和抗体检测[筛选出能够分泌所需抗体的杂种细胞]；最后将杂交瘤细胞 在体外做大规模培养或注射入小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠腹水中可得到大量的单 克隆抗体。 （3）杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。
（4）单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。 （5）单克隆抗体的作用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗 原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。用于治疗疾病和运载药物：主 要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。 三、胚胎工程 （一）动物胚胎发育的基本过程 （1）精子的发生：补充，精原细胞先进行有丝分裂后进行减数分裂；变形过程中，细胞核 为精子头的主要部分，高尔基体发育为顶体，中心体演变为精子的尾，线粒体在尾基部形 成线粒体鞘膜，其他物质浓缩为原生质滴直至脱落。[线粒体为精子运动提供能量] （2）卵子的发生：在胎儿时期，卵原细胞进行有丝分裂演变成初级卵母细胞[被卵泡细胞包 围]，减一分裂在排卵前后完成，形成次级卵母细胞和第一极体进入输卵管准备受精；减二 分裂是在受精过程中完成的。 （3）受精：精子获能（在雌性动物生殖道内）；卵子的准备（排出的卵子要在输卵管中进 一步成熟到减二中期才具备受精能力）；受精阶段[卵子周围的结构由外到内：放射冠、透 明带、卵黄膜]，a 顶体反应：精子释放顶体酶溶解卵丘细胞之间的物质，穿越放射冠。 b 透明带反应：顶体酶可将透明带溶出孔道，
精子穿入，在精子触及卵黄膜的瞬间阻止后来 精子进入透明带的生理反应[它是防止多精子入卵受精的第一道屏障]；c 卵黄膜的封闭作 用：精子外膜和卵黄膜融合，精子入卵后，卵黄膜会拒绝其他精子再进入卵内的过程[它是 防止多精子入卵受精的第二道屏障]；精子尾部脱落，原有核膜破裂形成雄原核，同时卵子 完成减二分裂，形成雌原核[注意：受精标志是第二极体的形成；受精完成标志是雌雄原核 融合成合子]。 （4）胚胎发育：a 卵裂期：细胞进行有丝分裂，数量增加，胚胎总体积不增加；b 桑椹胚： 32 个细胞左右的胚胎[之前所有细胞都能发育成完整胚胎的潜能属全能细胞]；c 囊胚：细 胞开始分化，其中个体较大的细胞叫内细胞团将来发育成胎儿的各种组织；而滋养层细胞 8 / 11 将来发育成胎膜和胎盘；胚胎内部逐渐出现囊胚腔[注：囊胚的扩大会导致透明带的破裂， 胚胎伸展出来，这一过程叫孵化]；d 原肠胚：内细胞团表层形成外胚层，下方细胞形成内 胚层，由内胚层包围的囊腔叫原肠腔。[细胞分化在胚胎期达到最大限度] 9 胚胎工程的理论基础（识记） （1）胚胎工程的概念及技术手段：对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技 术，如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。 （2）体外受精[属有性生殖过程]：a 卵母细胞的采集和培养 对体型小的动物用促性腺激素 处理，从输卵管冲取卵子（可直接受精）；对体型大的动物从卵巢中采集卵母细胞（要在体 外培养成熟）b 精子的采集 假阴道法、手握法和电刺激法；获能 对啮齿动物、兔、猪等的 精子用培养法（放入人工配制的获能液中）；对牛、羊等精子用化学法（放
在肝素或钙离子 载体溶液中） （3）胚胎的早期培养：a 培养液成分：无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、 血清等[注意与动物细胞培养液成分的比较]；b 当胚胎发育到适宜的阶段时，可将其取出向 受体移植或冷冻保存。 （4）胚胎移植：a 概念：将雌性动物的早期胚胎移植到同种的、生理状态相同的其他雌性 动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。是生产胚胎的供体和孕育胚胎的受体共同繁殖 后代的过程，通过转基因、核移植、体外受精获得的胚胎必须移植给受体才能获得后代。 b 优势：可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，缩短供体本身的繁殖周期。 c 胚胎移植的生理学基础：同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的[对供体和受体 进行同期发情处理]；早期胚胎形成后处于游离状态，为胚胎的收集提供可能；受体对移入 子宫的外来胚胎基本不发生免疫排斥反应；移入受体的供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不 受影响。 d 胚胎移植的程序：对供、受体母牛进行选择，用激素进行同期发情处理；对供体母牛用激 素做超数排卵处理；选择同种优秀公牛配种
[有性生殖过程]；对胚胎进行收集[此时胚胎处于 游离状态]；对胚胎进行质量检查[此时胚胎应发育到桑椹胚或囊胚]；胚胎移植[或冷冻保存]； 检查受体母牛是否受孕；产下胚胎移植的犊牛。 （5）胚胎分割：a 概念：用机械方法将早期胚胎切割成 2、4、8 等分等，经移植获得同卵 双胎或多胎的技术[可看作是动物无性繁殖或克隆] b 基本过程：选择良好的桑椹胚或囊胚移入培养皿中，用分割针或分割刀片将其切开，吸出 其中的半个胚胎注入透明带中或直接移植给受体。
[注意：内细胞团要均等分割，否则会影 9 / 11 响胚胎的恢复和进一步发育] 10 胚胎干细胞的移植（识记） （1）胚胎干细胞的含义：由早期胚胎[囊胚]或原始性腺[胎儿]中分离出来的一类细胞，又叫 ES 或EK 细胞。 （2）特征：形态上体积小、细胞核大、核仁明显；功能上具有发育的全能性，即可分化为 成年动物体内任何一种组织细胞。[体外培养下，ES 细胞可以只增殖不分化] （3）应用：用于治疗人类疾病，如利用 ES 细胞诱导其分化成新的组织细胞特性，移植 ES 细胞可使坏死或退化的部位得以修复。 1、胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如胚胎移植、 体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。经过处理后获得的胚胎，还需移植到雌性 动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。 2、动物胚胎发育的基本过程 （1）受精场所是母体的输卵管。
（2）卵裂期：特点：细胞有丝分裂，细胞数量不断增加，但胚胎的总体体积并不增加，或 略有减小。 （3）桑椹胚：特点：胚胎细胞数目达到32 个左右时，胚胎形成致密的细胞团，形似桑椹。 是全能细胞。 （4）囊 胚：特点：细胞开始出现分化（该时期细胞的全能性仍比较高）。聚集在胚胎一 端个体较大的细胞称为内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织。中间的空腔称为囊胚腔。 （5）原肠胚：特点：有了三胚层的分化，具有囊胚腔和原肠腔。 （二）胚胎干细胞 1、哺乳动物的胚胎干细胞简称ES 或EK 细胞，来源于早期胚胎或从原始性腺中分离出来。 2、具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有 发育的全能性，
可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可 以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。
3、胚胎干细胞的主要用途是：①可用于研究哺乳动物个体发生和发育规律；②是在体外条 件下研究细胞分化的理想材料，在培养液中加入分化诱导因子，如牛黄酸等化学物质时，就 可以诱导ES 细胞向不同类型的组织细胞分化，这为揭示细胞分化和细胞凋亡的机理提供了 有效的手段；③可以用于治疗人类的某些顽疾，如帕金森综合症、少年糖尿病等；④利用可 以被诱导分化形成新的组织细胞的特性，移植ES 细胞可使坏死或退化的部位得以修复并恢 10 / 11 复正常功能；⑤随着组织工程技术的发展，通过ES 细胞体外诱导分化，定向培育出人造组 织器官，用于器官移植，解决供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题。 （三）胚胎工程的应用 1.体外受精和胚胎的早期培养 (1)卵母细胞的采集和培养：主要方法：用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后， 从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。第二种方法：从刚屠宰母畜的卵巢中 采集卵母细胞；第三种方法是借助超声波探测仪、腹腔镜等直接从活体动物的卵巢中吸取卵 母细胞。采集的卵母细胞，都要在体外经人工培养成熟后，才能与获能的精子受精。 (2) 精子的采集和获能：在体外受精前，要对精子进行获能处理。 (3) 受精：获能的精子和培养成熟的卵细胞在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。 (4)胚胎的早期培养：精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入发育培养液中继续培养， 以检查受精状况和受精卵的发育能力。培养液成分
较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需 添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清等物质。当胚胎发育到适宜的 阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。不同动物胚胎移植的时间不同。(牛、羊一般 要培育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植，小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植，人 的体外受精胚胎可在4 个细胞阶段移植。) 2.胚胎移植 (1)胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其它方式得到的胚胎，移植 到同种的、生理状态相同的其它雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。其中提供 胚胎的个体称为“供体”，接受胚胎的个体称为“受体”。（供体为优良品种，作为受体的 雌性动物应为常见或存量大的品种。） 地位：如转基因、核移植，或体外受精等任何一项胚胎工程技术所生产的胚胎，都必须经过 胚胎移植技术才能获得后代，是胚胎工程的最后一道“工序”。 (2) 胚胎移植的意义：大大缩短了供体本身的繁殖周期，充分发挥雌性优良个体的繁殖能 力。 (3) 生理学基础：①动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。 这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。 ②早期胚胎在一定时间内处于游离状态。这就为胚胎的收集提供了可能。 ③受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应。这为胚胎在受体的存活提供了可能。 11 / 11 ④供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中 不受影响。 (4) 基本程序主要包括： ①对供、受体的选择和处理。选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常 繁殖能力的受体，供体和受体
是同一物种。并用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对 供体母牛做超数排卵处理。 ②配种或人工授精。 ③对胚胎的收集、检查、培养或保存。配种或输精后第7 天，用特制的冲卵装置，把供体 母牛子宫内的胚胎冲洗出来(也叫冲卵)。对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或 胚囊胚阶段。直接向受体移植或放入－196℃的液氮中保存。 ④对胚胎进行移植。 ⑤移植后的检查。对受体母牛进行是否妊娠的检查。 3.胚胎分割 (1)概念：是指采用机械方法将早期胚胎切割2 等份、4 等份等，经移植获得同卵双胎或多 胎的技术。
(2)意义：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，属于无性繁殖。
(3)材料：发育良好，形态正常的桑椹胚或囊胚。（桑椹胚至囊胚的发育过程中，细胞开始 分化，但其全能性仍很高，也可用于胚胎分割。）
(4)操作过程：对囊胚阶段的胚胎分割时，要将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎 的恢复和进一步发育。