微生物大小及数量的测定

摘要：本实验主要学习并掌握显微测微尺测定微生物大小的方法和如何使用血细胞计数板计量微生物细胞数量。

关键词：显微测微尺   显微计数法    血细胞计数板

前言

（一）微生物大小的测定

微生物细胞大小，是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小，只能在显微镜下测量。用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

镜台测微尺（图1）是中央部分刻有精确等分线的载玻片。一般将1mm等分为100格，每格长度等于0．01mm（即10⁶μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是专用于校正目镜测微尺每格的相对长度。

目镜测微尺（图1）是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片，其中央刻有精确的刻度，有等分50小格或100小格两种，每5小格间有一长线相隔。由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同。因此，目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小。在使用前必须用镜台测微尺进行校正，以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值，然后才可用来测量微生物的大小。

图1  测微尺及其安装和校正

（二）微生物数量的测定

显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm³，而且盖玻片和载波片之间的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。除了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法，此法一般用于牛乳的细菌学检查。显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操作简单。但此法的缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和。目前已有一些方法可以克服这一缺点，如结合活菌染色微室培养（短时间）以及加细胞分裂抑制剂等方法来达到只计数活菌体的目的。本实验以血球计数板为例进行显微镜直接计数。

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    实验九 微生物的大小及数量测定

摘要

通过显微测微尺测量酿酒酵母的长和宽，对其细胞体的大小有一个具体的了解；使用血球计数板对稀释n倍的酵母菌悬液进行细胞数量的测定，从而达到定量了解微生物的生长繁殖情况。

关键词

    目镜测微尺     物镜测微尺     血球计数板

前言

微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一，也让我们对微生物的实际大小有了一个感性的认识。微生物数量的测定在微生物生长曲线中运用非常重要，我们从微生物的数量上了解其生长状况，这也能指导我们的工业生产。

一、实验目的

1、掌握测微尺、血球计数板的使用方法；

2、掌握微生物数量大小及数量测定方法。

二、实验原理

（一）微生物大小的测定

微生物细胞大小，是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小，只能在显微镜下测量。用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

镜台测微尺（图1a）是中央部分刻有精确等分线的载玻片。一般将1mm等分为100格，每格长度等于0．01mm（即10⁶μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是专用于校正目镜测微尺每格的相对长度。

目镜测微尺（图1b）是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片，其中央刻有精确的刻度，有等分50小格或100小格两种，每5小格间有一长线相隔。由于所用目镜放大倍数和物镜放大倍数的不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同。因此，目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小。在使用前必须用镜台测微尺进行校正，以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值，然后才可用来测量微生物的大小。

图1  测微尺及其安装和校正

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实验四、微生物大小的测定

一、目的

学习并掌握测定微生物大小的原理和方法

二、材料

1、仪器：显微镜、测微尺、挑针、装有蒸馏水的滴瓶

2、菌种：青霉、镰刀菌

三、步骤

1、目镜测微尺的标定

1放置目镜测微尺：取出目镜，将透镜旋下，把目镜测微尺放在目镜镜筒○

内，注意刻度面朝下，旋紧透镜，施加镜筒。

2放置镜台测微尺：将镜台测微尺放在载物台上，刻度面朝上，并对准聚○

光器。

3标定目镜测微尺：先用低倍镜（4×）调焦，看清镜台测微台刻度后，○

转动目镜，使其目尺刻度线与镜台尺的刻度线平行，用推进器调动镜台尺，使镜台尺与目尺的某一刻度重合。然后找另外一条线重合线，分别数出并记录两者重合线间台尺与目尺各自的格数。

4计算： ○

两重合线间台尺格数?10 台尺每格10μm 两重合线间目尺格数

用相同方法计算出不同倍数（4×,10×,40×）目尺每格代表的实际长度

2、微生物大小测定

标定好后，移去台尺，换上待测微生物玻片，分别在10倍和40倍镜下测出待测微生物的大小。

微生物实际大小＝所测格数×目尺每格代表长度

四、实训报告

表1 台尺校正表

物镜 目镜格数 台尺格数 校正值（?m ／格） 10×

40× 微生物的实际大小=

五、思考题：为何当目镜不变，目镜测微尺也不变，而改变物镜后，目镜测微尺所测定的微生物长度不同？

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【实验题目】  

微生物大小及数量的测定

【实验目的】

1.        了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。

2.        学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。

3.        了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算。

【实验器材】

1、菌种：

   酵母菌液，枯草芽孢杆菌

2、试剂： 

   结晶紫，蒸馏水，香柏油，二甲苯等

3、仪器和用具： 

   显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺，血球计数板、盖玻片、吸水纸、计数器、滴管、擦镜   纸，酒精灯等

【实验原理】

 一、微生物大小的测定

1、 测微尺的构造

    微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台接物测微尺组成。

?目镜测微尺

    目镜测微尺是一块圆形玻璃片，其中有精确的等分刻度，在 5mm 刻尺上分 50 份，或把10 mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

?镜台测微尺

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实验四  微生物大小的测定

一、实验目的

1．熟悉目测微尺和物测微尺的使用方法，掌握测定微生物大小的技能。

3．巩固光学显微镜的使用方法

二、实验要求

1．预习有关微生物大小测定等方面的知识；

2．遵守实验室安全制度，听从指导教师安排；

3．认真听讲，不懂就问；

4．完成实验报告

三、实验仪器和材料

目测微尺、物测微尺、光学显微镜、微生物标本片

四、实验原理及方法

1. 目测微尺：

目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

2. 物测微尺

    中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将1mm等分成100格，每格长0.01mm（即10µm）。它并不直接测细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。

五、实验步骤及内容

1．目测微尺的标定

把物测微尺放在载物台上使刻度朝上。用低倍镜找到物测微尺的刻度，移动物测微尺和目测微尺使两者的第一条线重合，顺着刻度找出另一条重合线。再分别求出高倍镜和油镜下目测微尺每格的长度。

2．菌体大小的测量

    将物测微尺取下，换上标本片，选择适当的物镜测量目的物的大小，分别找出菌体的长和宽占目测微尺的格数，再按目测微尺1格的长度算出菌体的长度和宽度。

六、实验结果

1.将目镜测微尺校正结果填入表1

表1 目镜测微尺校正结果

2. 在高倍镜下测量枯草芽孢杆菌大小 ，将结果填入表2

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微生物的大小测定与显微计数

一．实验目的

1.      学习并掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方法。

2.   了解血细胞计数板的构造及计数原理。

3.   掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

二．实验原理

1. 测微尺的构造：显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台接物测微尺组成

(1) 目镜测微尺是一块圆形玻璃片，其中有精确的等分刻度，在 5mm 刻尺上分 50 份。目镜测微尺每格实际代表的长度随使用接目镜和接物镜的放大倍数而改变，因此在使用前必须用镜台测微尺进行标定。

(2) 镜台测微尺为一专用的载玻片，中央有精确等分线将长为 1mm 的直线等分成 100 个小格，每格长 10μm，专用于校正目镜测微尺。

(3) 球菌用直径表示大小；杆菌用宽和长来表示。本实验要分别测量酵母菌和枯草芽孢杆菌的大小，酵母菌的大小以直径来表示，枯草芽孢杆菌的大小以菌体的宽和长来表示。

(4) 目镜测微尺每格长度（μm）=(两重合线间镜台测微尺的格数×10)/两重合线间目镜测微尺的格数。

2. 微生物数量的测定

(1) 显微直接计数法：将小量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法.通常使用的计菌器是血球计数板。

(2) 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。此实验用的血球计数板，一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格（也有的计数区被分成16个中格，每个中格被分成25个小格），总共400个小方格。每个计数区边长为1mm，面积1mm²，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm³。设五个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，如果是25个中方格的计数板，则

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