篇一：蛋白质免疫印记技术实验报告

蛋白质免疫印迹技术
曹学敏郭晓华谷中如古泽江

河北大学生命科学学院2010生物技术河北保定 071002

摘要：目的：学习掌握动物抗血清的制备原理及技术，通过实际操作学会动物抗血清的制备，掌握Western－blotting的基本原理，熟悉Western－blotting的实验操作。方法：，使用鸡卵类粘蛋白对小白鼠进行常规免疫，获得抗血清，然后利用Western－blotting 检测抗血清。结果：纯化的鸡卵类粘蛋白能引起小鼠的免疫反应

关键词：常规免疫抗血清免疫印记

Abstract：objective：learn to master the theory and technology

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te technology of preparing animals’ antiserum by operating the experiment in person ,learn to prepare the animals’ antiserum , mastering the basic principles of Western－blotting, and being familiar with the experiment operation of Western－blotting. Methods : using chicken ovomucoid operating the routine immunization of laboratory rat, and obtain the antiserum, then detecting the antiserum through Western－blotting. Result: purified chicken ovomucoid can lead to the immunization of laboratory rat

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篇二：抗原与免疫血清的制备(实验报告)

抗原与免疫血清的制备

××××× ××× ××

抗体是机体接受抗原刺激后产生的一种具有免疫特异性的球蛋白。在免疫学实践中，为制备抗体常以抗原性物质（细菌、病毒、类毒素、血清及其他蛋白质）给动物注射。经过一定时间后，动物血清中可以产生大量的特异性抗体。这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清或者抗血清。

免疫血清的制备是一项常用的免疫学技术，高效价，高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂（如用于制备免疫标记抗体等），也可供特异性免疫治疗用^[1]。免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体，常可获得高效价的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫时，则需同时加用佐剂以增强抗原的免疫原性。免疫血清的特异性主要取决于免疫用抗原的纯度。因此，如欲获得高特异性的免疫血清，必须予先纯化抗原。此外，抗原的剂量、免疫途径及注射抗原的时间间隔等，也是影响免疫血清效价的重要因素应予重视。

在本实验中采用ELISA法和凝集反应的原理来测定免疫血清的效价：

ELISA测定的原理是利用标记技术将酶标记到抗体（抗原）上，使待检物中相应的抗原（抗体）与酶标记抗体（抗原）发生特异性反应。在遇到相应的酶底物时，酶能高效、专一催化、分解底物，生成有颜色的产物。根据颜色的深、浅、可以判断待检物中有无特异的抗原（抗体）以及量的大小。该方法可对待检样品进行定性和定量分析；同时具有微量、特异、高效、经济、简便等优点，因此是一种广泛应用于生物和医学领域的微量测定技术。

凝集反应是一种经典的抗原抗体反应，也是高等医学院校学生免疫学实验的重要内容之一，它是指可溶性抗原及其相应抗体在一定条件下出现肉眼可见的沉淀物的现象^[2]。凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类。前者可利用已知抗血清鉴定未知细菌，优点是极端快速，为诊断肠道传染病时鉴定病人标本中肠道细菌的重要手段；后者是一种定量法，现已发展成微量滴定凝集法，它可利用已知抗原测定人体内抗体的水平(效价)，也是诊断肠道传染病的重要方法。免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。机体的特异性免疫反应是指机体受抗原物质刺激后产生体液免疫（抗体）和细胞免疫（致敏的T淋巴细胞及其产物多种淋巴因子）的过程。这种结合反应的特异性可能是生物学中已知的最特异的反应^[3]。

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篇三：医学免疫学CDC实验报告

CDC实验

一.实验原理

细胞表面抗原与相应的抗体（IgG1~3或IgM）特异性结合形成的免疫复合物，可通过经典途径激活补体形成攻膜复合体而导致细胞膜穿孔。因此，水溶性染料如台盼蓝可进入受损细胞，染成蓝色，为阳性反应；不带抗原的细胞，未损伤，不染色，为阴性反应。

二. 实验步骤

1.胸腺细胞悬液制备

颈椎脱臼法处死小鼠

↓

暴露胸腔，分离出胸腺

↓

镊子夹住胸腺反复轻轻研磨

↓

单个细胞

PBS洗２次，1000rpm，10min

↓

加入5%小牛血清PBS制备细胞悬液

调节细胞浓度至3-4×107/ml

三.结果判断

①细胞膜穿孔的细胞呈蓝色，细胞膜完整的活细胞不着色。

②细胞毒性作用的判断标准如下：

阴性反应 ( － ) 死细胞占0-10%

可疑阳性反应 ( ± ) 死细胞占11-20%

弱阳性反应 ( + ) 死细胞占21-50%

阳性反应 ( ++ ) 死细胞占51-80%

强阳性反应 (+++ ) 死细胞占81-100%

四.结果记录

1.表格记录

2.照片展示

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篇四：免疫印迹实验报告——wester blot

Western blot实验报告

摘要：目的：学习并掌握western blot分离蛋白及观察方法

方法：western blot

结果：见后文

结论：western blot能很好地分离蛋白

关键词：western blot、分离、小鼠组织、蛋白

Western blot test report

Abstract: objective: Learn and master the western blot protein isolated and observation method Methods: western blot：,sds-page and electric transfer

Results: see below

Key words: Western blot、separate、mouse tissues、protein

前言:免疫印迹又称Western印迹(Western blotting)，与DNA的Southern印迹技术相对应，两种技术均把电泳分离的组分从凝胶转移至一种固相载体(通常为NC膜)，然后用探针检测特异性组分。不同的是，Western blotting所检测的是抗原类蛋白质成分，所用的探针是抗体，它与附着于固相载体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。该技术结合了凝胶电泳分辨力高和固相免疫测定特异敏感等诸多优点，具有从复杂混合物中对特定抗原进行鉴别和定量检测，以及从多克隆抗体中检测出单克隆抗体的优越性。该技术的灵敏度能达到标准的固相放射免疫分析的水平而无需对靶蛋白进行放射性标记。目前，Western blotting广泛用于蛋白质研究、基础研究和临床医学的研究。

免疫印迹可分成两个步骤：蛋白质由凝胶转移至固相基质；特异性抗体检测。

蛋白质转移通常由电泳实现，现常用的方法有二：1 半干法：将凝胶和固相基质似三明治样夹在缓冲液湿润的滤纸中间，通电10-30分钟可完成转移；2 湿法：将凝胶和固相基质夹在滤纸中间，浸在转移装置的缓冲液中，通电45分钟或过夜课完成转移。本试验采用湿法转移。免疫印迹用膜通常有硝酸纤维素膜和尼龙膜两种。大多数应用前者。本实验也用硝酸纤维素膜进行转移。

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篇五：现代生物学实验技术实验报告

现代生物学实验技术实验报告

实验一、超薄切片

一、实验目的

学习掌握常规生物样品前处理技术及样品包埋块的制备技术。

二、实验材料

植物幼嫩叶片、小鼠肝脏细胞

三、实验试剂

2.5％戊二醛、PBS、1％锇酸、30％丙酮、100％丙酮、Epon812包埋液、蜡油

四、实验器材

离心管、玻璃棒、滴管、移液枪、刀片、镊子、牙签、烘箱、切片机、

五、实验步骤

1、取材固定：从植株上取叶片或者取小鼠肝脏细胞，切取1mm3左右大小的组织块，立即放入PBS（pH7.2)配制的2.5%戊二醛中固定1小时。

2、用0.1molPBS缓冲液冲洗三次每次3～5分钟。

3、1％锇酸固定1小时，然后用缓冲液冲洗三次每次3～5分钟。

4、丙酮脱水：30％－50％－70％－80％－90％－100％－100％每级5～10分钟

5、浸透：脱水剂：包埋剂=3：1 1小时

脱水剂：包埋剂=1：3 过夜

6、聚合：45 ℃ 12h 60 ℃ 24h

磷酸缓冲液 0.2molL-1 PBS 配制

A液：Na2HPO4 .2H2O 35.61g

加DDW 至 1000ml

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篇六：免疫胶体金标记技术

基于免疫胶体金标记技术的检测研究及其在堆肥中的应用展望

作者：赖萃曾光明 黄丹莲冯冲凌胡霜苏峰峰赵美花黄超危臻

【摘要】金纳米颗粒作为一种性能优异的标记物应用广泛。随后发展出来的免疫胶体金标记技术作为一种灵敏度高、操作步骤简便、检测快速的免疫反应检测技术得到广泛关注。本文介绍了免疫胶体金标记技术的基本原理、制备方法并详述了近年来该技术的新发展。此外，结合免疫胶体金标记技术在免疫检测与环境检测实际工作中的应用，展望了其在堆肥环境检测中的应用潜力和发展前景。

【关键词】胶体金；标记；免疫检测；堆肥; 评述

Abstract Ｇold nanoparticle has been widely used as a good labeling substance.

Subsequently, increasing concern has been paid to immunogold labeling technique which has high sensitivity, simple procedure and rapid detection in immunoassay. Ｔhe basic principle, preparation methods and important developments of immunogold labeling technique were

introduced in this article. In addition, the new applications and prospects of immunogold labeling technique in compost detection were proposed based on the applications in immunoassay and environmental analysis.

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篇七：免疫报告

免疫学实验报告

——多克隆抗体制备

生物科学与工程学院

生物技术

吴凡

201020131112

多克隆抗体的制备和抗体效价的检测

实验一多克隆抗体的制备

一、目的

1. 加深对抗体基本知识的了解。

2. 了解多克隆抗体的制备基本方法及动物免疫的基本原理。

二、原理

抗原抗体反应

抗原抗体反应:是指抗原与相应抗体之间的特异性结合反应。

原理：抗原抗体反应的物质基础是抗原分子表面的抗原决定簇与抗体分子高变区之间的互补结合，在适宜条件下出现可见反应。免疫应答的效果取决于抗原和免疫动物的种类，但初次和二次免疫应答之间的关系是免疫应答的一个重要特点。三次或以后的抗原注射所产生的应答和二次应答结果相似。

把抗原注射到实验动物体内时，抗体会不同程度的与抗原结合，在抗原的刺激下，在血液中产生不同类型的抗体，这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。多克隆抗体中不同的抗体分子可以以不同的亲和能力与抗原分子表面不同的部分—抗原决定簇相结合。

动物的选择：

1 动物的种类和种系：供免疫用的动物主要是哺乳动物和禽类，常选择家兔、绵羊、山羊、马、骡和豚鼠及小鼠等。动物的免疫应答受动物的遗传基因影响，同一种系的动物对不同抗原的免疫应答和不同种系的动物对同一抗原的免疫应答均不尽相同。抗原的来源与免疫动物的亲缘较远，产生的抗体效价高，同种系或亲缘较近，产生的抗体的效价就差。

2 动物的生理状况：由于个体差异的存在，同一抗原免疫同一种系不同个体的动物，产生的抗体的效价有很大的差异。与动物的年龄和营养状况密切相关。免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物，雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适，有时甚至不产生抗体。

3 抗血清的需要量：根据实验中抗血清的需要量，选用最经济的动物、免疫动物的只数。一般实验室采用的抗体，多用兔和羊制备。在这次实验中，我们用的是兔子。

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篇八：免疫学实验指导

实验一 免疫球蛋白的粗提（盐析法）

一、实验目的

1、学习免疫球蛋白的粗提方法

2、实践IgG分离纯化过程

3、了解分离纯化抗体的原理

二、实验原理

随着免疫学的发展和需要，免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的手段。纯化的方法很多，有单一法，常用盐析法、凝胶柱层析、离子交换剂层析以及免疫亲和层析等技术对血清抗体进行分离纯化。但大多数采用二步法以上相结合的方法，特别是以硫酸铵提纯为基础，再经过透析或层析柱的方法来提高免疫球蛋白及其各成分的纯度最为常用。硫酸铵溶液能使蛋白质胶体脱水并中和其电荷而使之沉淀下来（称为盐析）。不同浓度的硫酸铵盐析蛋白成分不同，利用这一原理提取所需的免疫球蛋白成分。盐析只能粗提，为了获得纯化的免疫球蛋白成分，必须进一步采用层析的方法进行分离。

水膜与同性电荷的排斥作用是蛋白质胶体稳定的基础，在蛋白质胶体溶液中加入一定量的（NH₄）₂SO₄或Na₂SO₄盐类，使溶液中大部分自由水分子转变为离子水化分子，降低蛋白质极性基团与水分子的相互作用，破坏蛋白质水膜，蛋白质溶解度也随之降低。蛋白质由于分子质量和携带的电荷不同，可在不同浓度的高盐溶液内分级析出。33% （NH₄）₂SO₄为沉淀IgG的最适饱和度。

二、实验材料与试剂配制

1．人全血清（购买商品）

2．硫酸铵饱和溶液

硫酸铵 800g~850g

H₂O 1 000ml

加热至绝大部分溶质溶解为止，趁热过滤，置室温过夜，然后以28％NH₄OH调pH至7.0（不调pH值也可以）。

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免疫标记技术实验报告