篇一：免疫组化实验报告

免疫组化实验报告

一、仪器与试剂

1.仪器：

包理机：KD-BM 生物组织包埋机，浙江省金华市科迪仪器设备有限公司；

切片机：LEICA2016，德国；

水浴锅：SHA-C，江苏金坛市荣华仪器制造有限公司；

图像采集:采用OLYMPUS BX-41荧光显微镜及NIKON DIGITAL SIGHT 彩色CCD；

数据分析软件:Image Pro Plus6.0 (Media Cybernetics公司；

2.试剂：

免疫组化染色试剂盒: Histostain-Plus Mouse Primary (Cat. No. 85-6643, Invitrogen, USA)

Histostain-Plus Rabbit Primary(Cat. No. 85-6743, Invitrogen, USA)

试剂A （蓝色液体）：封闭用正常山羊血清工作液

试剂B （黄色液体）：生物素化二抗工作液

试剂C （橙色液体）：辣根酶标记链霉卵白素工作液

DAB Kit (Cat. No. 00-2014, Invitrogen, USA)

二、石蜡包埋法
    1.组织浸入石蜡后，包埋前将组织移入包埋用石蜡杯内。从恒温箱取出置于三角架上，其下点燃酒精灯，以保持石蜡的溶解状态。
    2.准备好包埋框，将包埋用的镊子在酒精灯上加温（防止镊子粘蜡）后，左手持蜡杯，右手把加温的镊子放在蜡口（直立状）倒蜡时让石蜡沿镊子注入包埋框内。
    3.迅速镊取组织块放入包埋框石蜡内，切面朝下放正置入框底并轻轻压平，以保证不再有气泡。
    4.待石蜡表面凝固前将标签贴于其上，需注意勿使标签与标本混淆，当蜡块冷至蜡面有一层透明蜡膜时，浸入冷水中迅速使其冷却，否则蜡内常形成结晶。
    5.蜡块完全硬固后除去铜框，以保证蜡彻底凝固，立即修切，准备制成切片或储藏备用。

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篇二：免疫组化报告1

免疫组化报告

1：实验目的

检测食管鳞状细胞癌的组织情况。

2：实验方法

用免疫组化Envision法

3：使用的实验设备和药品

（1）孵育箱，冰箱，微波炉，切片机，染缸，载玻片，盖玻片，显

微镜

（2）过氧化物酶，固定液（10%中性缓冲福尔马林），4%的多聚

甲醛磷酸缓冲液，双氧水，75%，85%，95%，100%的乙醇，重铬酸钾浓硫酸，蒸馏水，多聚左旋赖氨酸，PBS，中性树胶，DAB色液，苏木素，0.1%HCL，二甲苯，石蜡 4：实验步骤

（1）取材：在病变区，交接区，远离病变区取材

（2）固定：在固定之前用PBS轻洗所取组织样品，然后将组织样

品至于小烧杯中用4%多聚甲醛磷酸缓冲液（用量应是样品的5倍）浸润，固定10—20分钟后取出，自然干燥

（3）脱水：用梯度乙醇溶液（75%，85%，95%，100%的乙醇）作为脱水剂，此步骤应在4摄氏度下进行。将梯度乙醇至于小烧杯中，然后放入组织样本放于冰箱内，时间依据组织样本大小而定，时间应充分。

（4）透明，此过程需在4摄氏度下进行。时间依据组织样本大小而定。

（5）浸蜡，温度不能高于60摄氏度，将组织样本取出后，放入低熔点软蜡中，时间依据组织样本大小而定。

（6）包埋，放入前确定组织各个面，所需的断面朝下。

（7）修块，不能把蜡边与组织边缘靠的太近或太远。

（8）切片，把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片。厚度通常为5—7μm。切好的蜡带放入40℃左右的温水中将蜡片展平。

（9）捞片，烤片

将载玻片浸泡在重铬酸钾浓硫酸清洁液中24小时，然后流水充分冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍以上，而后置95%乙醇中12小时。取出擦干或烤干，贮放于玻片盒内备用。盖玻片很薄，以上处理程序必须缩短时间，清洁液浸泡只需2小时，流水冲洗注意勿损伤玻片。取出擦干或烤干，贮放于玻片盒内备用。防脱片处理

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篇三：免疫组化实验步骤及配方

免疫组化步骤

1. 多聚甲醛灌流取材，多聚甲醛后固定，30%多聚糖溶液沉糖;

2. 冰冻切片（1d-14d 脊髓>=20?m;14d-28d>=10?m;DRG d=10?m）

3. 0.01M PBS洗 10min×3次;

4. 1N HCL 暴露抗原 30min；

5. 去离子水洗，0.01M PBST洗 10min×3次；

6. 3%双氧水(0.01M PBS配制)洗10min，灭活内源性HRP；

7. 0.01M PBST洗 10min×3次；

8. 5%-10%血清封闭30min（0.01M PBST 配制）；

9. 一抗过夜，一抗用PBST稀释；

10. 0.01M PBS洗 10min×3次，二抗3孵育小时；

11. 0.01M PBS洗 10min×3次，HRP-亲和素3小时；

12. 0.01M PBS洗 10min×3次，DAB显色 12-18min。

免疫组化常用试剂配制

1. 0.1M PB: 14.5g Na2HPO4·12H2O

500mL H2O

1.5g NaH2PO4·2H2O

2. 0.1M PBS : 500mL 0.1M PB

45g NaCl

3. 0.01M PBST: 100mL 0.01M PBS

10滴 Triton X-100

4. IN HCL: 盐酸：水=1：10

5. 4%多聚甲醛： 13.6g KH2PO4

3.6g NaOH

40g 多聚甲醛

1000mL H2O

注：1). 需要60°C加热溶解，过滤使用；

2).多聚甲醛每次比需要多称10g，以弥补后面过滤的损失；

3).现将多聚甲醛溶于1000mL水中，然后一边加热搅拌一

边缓慢加入多聚甲醛的助溶剂NaOH，待NaOH和多聚甲醛都完全溶解后再加入KH2PO4，溶后过滤备用。

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篇四：免疫组化实验步骤

免疫组化操作步骤

一、实验原理与意义

免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通

过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新

技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧

光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋

白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。

（一）、仪器设备

1. 18cm不锈钢高压锅或电炉或用微波炉.

2. 水浴锅

（二）、试剂

1. PBS缓冲液（ph7.2―7.4）：NaC137mmol/L，KCl 2.7mmol/L ,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L. 2．0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液（CB,ph6.0,1000ml）：柠檬酸三钠3g,柠檬酸0.4g。

3．0.5mol/L EDTA缓冲液（ph8.0）：700ml水中溶解186.1g EDTA& 8226;2H2O,用10mmol/L NaOH调至ph8.0, 加水至1000ml.

4. 1mol/L的TBS缓冲液（ph8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至pH8.0, 加水1000ml。

5. 酶消化液：a.0.1%胰蛋白酶:用0.1%CaCl 12(ph7.8)配制。b.0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。

6. 3%甲醇―H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制

7. 风裱剂：a.甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液（pH9.0–9.5）等量混合 b 油和TBS(PBS)配制

8．TBS/PBS PH9.0–9.5,适用于荧光纤维镜标本;ph7.0-7.4适合光学纤维标本

（三）、操作流程

1、脱蜡和水化：脱蜡前应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。

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篇五：免疫组化实验结果的判定和分析

免疫组化实验结果的判定和分析

就实验结果而言，免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析、图片的确定与选取、相关数据的提供，上述工作是免疫组化工作的重点内容。只有严格的实验设计、标准的实验操作、专业化的结果分析才能满足客户的要求，更好地为客户提供最优质的服务。免疫组化结果的判定原则：

⒈必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。

⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内；PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内；EMA应定位在细胞膜上等等。不在抗原所在部位的阳性着色，一概不能视为阳性。

⒊阴性结果不能视为抗原不表达。由于检测方法灵敏度有高低之分，有时可因染色方法灵敏度不够，而导致阴性反应，判断时应注意。

⒋尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表达，特别是酶免疫标记。因为这类阳性着色多系内源干扰，或系人为因素所致。

⒌对免疫组化标记结果的意义不能绝对化，应结合临床资料、X线等影像学及实验结果综合分析。

对照染色设计：

(一）对照染色的目的

设对照的目的是为了排除假阴性和假阳性。假阴性的原因主要有三种：

① 组织处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽；

② 抗体失活、效价过低或稀释度不合适（主要指一抗，即特异性抗体）；

③ 染色步骤遗漏及差错，或显色剂的选择、缓冲液pH和离子强度不当等。假阳性均系由多种因素造成的非特异着色所致，原因主要有：

① 自发荧光或内源酶等干扰；

② 抗体试剂不纯(特别是一抗）；

③ 操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当等；

④ Fc受体的干扰，等等。

（二）对照的种类及其选用目的

对照染色大致可分为四类：即阳性组织对照、阴性组织和阴性试剂对照及自身对照。 ⒈阳性组织对照

指用已证实含有靶抗原的同源及不同源组织切片或细胞涂片与待检实验切片同时作同样处理和免疫染色的组织对照。正确的结果应呈现阳性，目的是为了证实所用免疫组化染色流程的有效性，排除假阴性的可能。

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篇六：免疫组化实验步骤

免疫组化实验步骤

实验目的：检测某抗体在某组织中的表达情况。

实验原理：免疫组化是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原

理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术。

实验用品：烤箱、微波炉、显微镜、37℃温箱、通风橱、加样器、滴管、玻片、二甲苯、乙

醇（100%、85%、75%）、蒸馏水、0.01M柠檬酸盐、3%H2O2 、1×PBS、10%羊血清、DAB、苏木素（中衫金桥）、1%盐酸酒精、淡氨水、中性树胶，一抗，二抗

试剂配制：

1、1×PBS（PH 7.2~7.4）

磷酸二氢钠 1.5g

磷酸氢二钠 22g

NaCl 42.5g

1000ml蒸馏水搅拌溶解，定溶至5000ml

2、10%羊血清

100%羊血清 100μl

PBS 900μl

3、0.01M柠檬酸盐缓冲液

柠檬酸 0.8g

柠檬酸三钠 6g

1000ml蒸馏水搅拌溶解，定溶至2000ml

4、1%盐酸酒精

乙醇 300ml

盐酸 4ml

蒸馏水至400ml

5、淡氨水

蒸馏水 495ml

浓氨水 5ml

6、3% H2O2（避光保存）

30% H2O2 100μl

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篇七：免疫组化入门实验操作

免疫组化入门实验操作

一、实验目的：

1. 了解免疫组化基本原理。

2. 了解免疫组化实验操作及注意事项。

3. 免疫组化结果判定。

通过实验，让学生熟悉免疫组化操作流程及注意事项，对抗原抗体结合、抗原修复和酶催化底物显色进行研究。要求学生通过查阅文献，在归纳、对比、总结的基础上对免疫组化有进一步的了解。

二、实验原理：

三、实验材料：

一抗：CD5、CK8、Ki67

二抗： MaxVision3

其它：柠檬酸抗原修复液、过氧化物酶阻断剂、PBS缓冲液、DAB、孵育盒、染色架、苏木素、盖玻片、冲洗瓶、中性树胶，孵育盒。

四、实验步骤：

1. 脱蜡水化

二甲苯5min，二甲苯5min，二甲苯5min，无水乙醇2min，无水乙醇2min，95%酒精2min，85%酒精2min，自来水冲洗。

2. 抗原修复

高压锅中加入1200mL柠檬酸修复液，电磁炉煮沸后放入切片，扣紧锅盖，功率调至800W，至压力阀均匀喷气后计时1.5min，移开高压锅室温冷却10min，自来水冷却。

3. 过氧化物酶阻断

修复结束后，流水冲洗干净，除去自来水，在离组织3mm处用免疫组化油笔画圈或用纸巾擦干组织外残留的液体，滴加50 μL（一滴）过氧化物酶阻断剂，室温孵育10min，PBS冲洗3×3min。

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篇八：免疫组化实验

免疫组化实验方法

2009-05-26 00:00 来源：abmart 点击次数： 22889 关键词：免疫组化实验方法IHCICC

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一、免疫组化（Immunohistochemistry,IHC/ Immunocytochemistry, ICC）原理

免疫组化是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术（Immunohistochemistry）或免疫细胞化学技术（Immunocytochemistry）。

众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒）。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。

免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。

用于病理诊断的主要有免疫荧光法和免疫酶法。免疫荧光法是现代生物学和医学中广泛应用的方法之一，包括荧光抗体和荧光抗原技术，具有抗原抗体反应的特异性，染色技术的快速性，在细胞或组织上定位的准确性，以及荧光效应的灵敏性等优势。但是，由于免疫荧光法必须具有荧光显微镜，荧光强度随时间的延长而逐渐消退，结果不易长期保存等缺点，在普及应用上受到一定限制，而逐渐被免疫酶法所取代。

…… …… 余下全文