生物技术大实验
试验课教案
授课人:陈启龙
授课班级:20##级生物技术(本科)
授课时间:20##-20##学年度第二学期
生物技术大实验实验课总体安排
课程名称:生物技术大实验
面向专业:生物技术(本科)
应开实验时数:48
实验类别:基础
设置情况:独立设课
开课时间:第三学年第二学期
考核方式:口试与操作
实验目的与要求:
通过实验教学,训练学生掌握研究生物技术的最基本操作技能,加深理解生物技术的基本理论,同时培养学生观察、分析、解决问题的能力。
试验一 感受态细胞的制备
一 试验目的:理解并掌握感受态细胞制备的技术
二 试验原理:利用预冷的CaCl2液改变DH5a菌的细胞的通透性,便于质粒的转化。
三 主要仪器、试剂:
分光光度计;恒温振荡培养箱;冷冻离心机;
酵母粉;NaCl;胰蛋白胨;CaCl2;DH5a菌;
四 试验步骤:
1.LB培养基的配制:
酵母粉2.5g、NaCl5.0g、胰蛋白胨5.0g 定容至500ml,pH值7.0
2.将LB培养基分装:
5ml―――离心管
100ml――250ml的锥形瓶中(扩大培养用)
100ml――250ml的锥形瓶中加琼脂1.7g制平板用
其余于500ml锥形瓶中保存备用
3.配制0.05M CaCl2,并将以上培养基等灭菌
4.接种DH5a菌于37℃倒置培养10-12小时
5.挑单菌落于5ml离心管中37℃振荡培养12小时
6.扩大培养单菌落,在2小时后开始测OD值,其值在0.3-0.4之间为宜。
7.制备感受态细胞
1)将对数期菌液倒入5mlEP管,配平,冰浴10分钟,4℃离心(4000r,10分钟)
2)去上清,加预冷的CaCl2 1ml重悬细胞,用枪打散转入1.5mlEP管中
…… …… 余下全文