化学实验报告之电泳
实验目的：认识胶体粒子是带电粒子
实验原理：带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动
实验器材及药品：铁架台、U形管、石墨碳棒、粗铜丝、滴管、导线、直流电源、Fe(OH)3胶体、定量NaCl溶液
实验操作：1、将烧杯中的蒸馏水加热至沸腾，向沸水中逐滴滴加入6滴FeCL3饱和溶液。继续煮沸至溶液呈红褐色，停止加热。观察制得的Fe（OH）3胶体
2、取一支U形管，注入Fe（OH）3胶体到距离管口5.0cm处，固定在铁架台上，用滴管给U形管的两端沿壁慢慢注入一定浓度的NaCL溶液，使U形管两端明显分层，形成清晰的液面
3、给U形管两端插入碳棒电极，并分别连接电源的正负极，观察现象并记录时间。
实验现象：U形管和阴极连接的一端液面上升，出现明显的液面差，阴极一端颜色加深，阳极一端颜色变浅
实验分析：在外加直流电源的作用下，Fe（OH）3胶体微粒在分散介质里向阴极作定向移动,注意碳棒不要和胶体接触，，否则胶体放电或电解水，NaCL溶液的浓度不要太大最好是51毫摩每升。
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实验十二 电泳
一、目的要求
1）掌握电泳法测ζ电势的原理和技术；
2）从实验现象中加深对胶体的电学性质的理解，即在外电场作用下，胶粒和介质分别向带相反电荷的电极移动，就产生了电泳和电渗的电动现象（因电而动）。
二、基本原理
1．电泳
由于胶粒带电，而溶胶是电中性的，则介质带与胶粒相反的电荷。在外电场作用下，胶粒和介质分别向带相反电荷的电极移动，就产生了电泳和电渗的电动现象。影响电泳的因素有：带电粒子的大小、形状；粒子表面电荷的数目；介质中电解质的种类、离子强度，pH值和粘度；电泳的温度和外加电压等。从电泳现象可以获得胶粒或大分子的结构、大小和形状等有关信息。
2．三种电势
：热力学电势（或平衡电势），固体表面相对溶液的电势，=f（固体表面电荷密度，电势决定离子浓度）。
jd：斯特恩电势。
离子是有一定大小的，而且离子与质点表面除了静电作用外，还有范德华吸引力。所以在靠近表面1-2个分子厚的区域内，反离子由于受到强烈的吸引，会牢固的结合在表面，形成一个紧密的吸附层，称为固定吸附层或斯特恩层；在斯特恩层中，除反离子外，还有一些溶剂分子同时被吸附。反离子的电性中心所形成的假想面，称为斯特恩面。在斯特恩面内，电势呈直线下降，由表面的直线下降到斯特恩面
。称为斯特恩电势。
z：电动电势。
当固、液两相发生相对移动时，紧密层中吸附在固体表面的反离子和溶剂分子与质点作为一个整体一起运动，其滑动面在斯特恩面稍靠外一些。滑动面与溶液本体之间的电势差，称为 
电势。电势与电势在数值上相差甚小，但却具有不同的含义。应当指出，只有在固、液两相发生相对移动时，才能呈现出电势。
电势的大小，反映了胶粒带电的程度。电势越高，表明胶粒带电越多，其滑动面与溶液本体之间的电势差越大，扩散层也越厚。当溶液中电解质浓度增加时，介质中反离子的浓度加大，将压缩扩散层使其变薄，把更多的反离子挤进滑动面以内，使电势在数值上变小当电解质浓度足够大时，可使电势为零。此时相应的状态，称为等电态。处于等电态的胶体质点不带电，因此不会发生电动现象，电泳、电渗速度也必然为零，这时的溶胶非常容易聚沉。
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琼脂糖凝胶电泳实验
20##-11-03 09:43:56 来源：生物秀 评论：0 我要评论
实验二琼脂糖凝胶电泳实验【实验目的】（1） 学习琼脂糖凝胶电泳的基本原理；（2） 掌握使用水平式电泳仪的方法；（3） 学习在含有甲醛的凝胶上进行RNA电泳的方法。【实验原理】琼脂糖凝胶电泳是基因工程实验室中分离鉴定核酸的常规方法。核酸是两性电解质，其等电点为pH2-2.5，在常规的…
凝胶加样缓冲液
使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速 率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围内，这些对应 关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。
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基因组DNA的提取和电泳（实验五）实验报告
一、实验目的
了解DNA提取的方法，以及琼脂糖凝胶电泳分析DNA技术。
二、器材和试剂
1. 器材
水平琼脂糖电泳仪，离心机，水浴锅，研钵，离心管、移液枪、水稻幼苗等
2. 试剂
1. 1mol/L Tris.Cl(pH8.0) 的配制：称取12.11g 的Tris，置于80 mL的ddH20,加入浓盐酸（约4.2 mL）,调节pH值至8.0，定容至100 mL。
2. 0.5 mol/L EDTA(pH8.0)的配制：18.61g Na2EDTA·2H2O，加入80 mL的ddH2O,用NaOH颗粒调pH值至8.0（约需2 g），定容至100 mL。
3. 提取缓冲液的配制： 100 mmol/L Tris.Cl(pH8.0), 20 mmol/LEDTA, 500 mmol/L NaCl, 1.5%SDS
4. 80/4/16氯仿：异戊醇：乙醇
5. 6?Loading buffer：0.15％溴酚蓝，0.15％二甲苯青FF，5 mmol/L EDTA，50％甘油
6. 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
三、实验步骤
1. 在15mL的离心管中加入5mL的提取缓冲液，60℃水浴预热。
2. 植物叶1-2g，剪碎，在钵体中加入石英砂，加入预热的提取缓冲液，磨成粉末状，60℃水浴保温20 min，其间不时缓慢摇动。
3. 5000 rpm离心5分钟，仔细吸取上清液至另一离心管中，
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实验十：血清醋酸纤维薄膜电泳
【实验名称】 ：血清醋酸纤维薄膜电泳
09救援一班 第3大组
室温：25°
（一）实验目的：
1.学习醋酸纤维薄膜电泳原理。
2.掌握血清醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的技术。
3.熟悉血清蛋白组分定量方法，并确定血清中蛋白与球蛋白的比值。
（二）实验原理：
血清绝大多数蛋白质的等电点在pH5.0～7.0。在pH8.6的巴比妥缓冲液中，血清蛋白全部带负电荷，在直流电场中向正电极移动，移动的速度与带电蛋白质颗粒所带电荷成正比，与蛋白质颗粒的大小成反比。如果样品点在醋酸纤维薄膜的同一条线上，电泳相同的时间，不同的蛋白质颗粒移动的距离不同，通过染色，薄膜条上的血清的蛋白质被分离成不同的条带。将此薄膜条透明，可以进行扫描，或将色带剪下，将颜色洗脱，进行比色，都能获得各色带所含蛋白质占血清总蛋白的百分比，并可计算血清中清蛋白／球蛋白比值，正常值为1.5～2.5。
（三）实验材料与仪器：
1．实验仪器材料：1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）2、人血清；3、烧杯及培养皿 数只；4、x光片；5、镊子；6、试管 六只；7、电泳槽；8、直流稳压电泳仪；9、7220型分光光度计；10、剪刀
2．实验试剂：1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液：取两个大烧杯，分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml蒸馏水中；2、染色液，可反复使用；3、漂洗液：取乙醇45ml，冰醋酸10ml，混匀；4、浸出液：0.4mol/L NaOH溶液；
（四） 实验步骤：
1、准备和点样
取一条醋酸纤维薄膜，侵入缓冲液中，完全侵泡后，用镊子轻轻取出，将薄膜无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液。
用X光片蘸取少量血清，然后轻轻于距离薄膜端1.5cm处接触，样品即成一条线突于纤维膜上。待血清透入膜内，将薄膜放在电泳槽上。
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多聚酶链式反应（PCR）扩增DNA片段及琼脂糖凝胶电泳产物检测
一、实验目的：
1、了解PCR技术的基本操作
2、理解PCR的原理
3、讨论PCR的应用
二、实验原理：
PCR是一种在体外模拟细胞内环境进行迅速扩增DNA片段的技术，这一技术需要模板、四种脱氧核苷酸等组分条件外，还需要不同温度环境以进行DNA的解旋和聚
1、PCR反应组分
细胞内DNA复制条件分析：
此外，试验中用到的还有Mgcl2，Mg2+能激活酶的活性；10* Buffer 缓冲液，为Taq酶提供合适的PH条件。
2、PCR反应条件
PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，现在使用的PCR仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器。
PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸。
(!)变性（模板DNA解旋）
模板DNA经加热至90℃以上。一定时间后，使模板DNA双链解离，使成为单链，以便于它与引物结合，为下轮反应作准备。
(2)复性（退火）
模板DNA经加热变性成单链后，温度降到50℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
(3)延伸
DNA模板－引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下以脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，按碱基互补配对的原则与半保留复制的原理，合成一条新的DNA链。
3、PCR产物的检测
(1)紫外分光光度计
DNA在260nm的紫外波段有一强烈的吸收峰，可以通过与蒸馏水的对比进而计算扩增出DNA的含量。
(2)琼脂糖凝胶电泳
DNA在电厂作用下，可以由电源的负极向正极泳动，泳动的速度与DNA片段的长度成负相关，与电压强度成正比，因此可以分离不同长度的DNA。在有DNA marker（不同已知碱基对大小的DNA片段的混合物）的条件下，由于不同碱基大小的DNA片段在琼脂糖凝胶上涌动的速度不同，因此电泳完毕后会出现在胶块的不同位置。通过将扩增出的DNA片段与已知的条带做比较，可以大概推测出该片段的碱基对的大小。如果要进一步检测其大小，可以换另外规格的DNA marker 继续电泳。核酸荧光染料可以与DNA嵌合，一起电泳，DNA图谱观察仪可以激发特定的蓝色光源，荧光染料在该光照射下可见到荧光，荧光的亮度与DNA大小成正比。
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