实验计划书(初定)
此为初步计划书,还有很多不成熟甚至错误之处 xxx xxxx年xx月xx号 ,望老师给予指出!
I 总体计划
本实验总体上分为三大步。(1)生理实验部分:本部分主要进行papaya硬度和细胞壁相关酶类活性的测定。(2)分子实验部分:本部分主要是获得papaya细胞壁相关酶类的基因序列以及由RNA差异表达谱获得细胞壁代谢酶基因等的表达特征。(3)验证实验部分:本部分主要通过实时荧光定量PCR的方法(Real time Q-PCR)验证并初步确定与“橡皮化”相关的细胞壁代谢酶基因的家族成员。
生理实验部分是第一步需要实施的,也是比较独立的部分,初步定为40天左右的时间结束。分子实验和验证实验部分是本实验的核心,这两部分紧密结合,需要同步进行,首先是各种样本(CK,ETH,1-MCP)的获得,随后是各样本的RNA提取,然后委托深圳华大基因公司进行转录组测序并从转录组中筛选细胞壁代谢相关的基因序列,采用5RACE及3RACE的方法,获得这些基因的全长序列以及构建差异表达谱进行相关差异基因筛选等生物信息分析,最后通过实时荧光定量PCR的方法(Real time Q-PCR)验证并初步确定与“橡皮化”相关的细胞壁代谢酶基因的家族成员。
II 详细计划
一,买果。
二,采后预处理:
采后立即运回实验室,剔除病果和机械损伤果,选用形状、大小、外观颜色相对一致的番木瓜果实,剪留0.5cm长果柄为实验材料。先用1.0 g/L的次氯酸钠溶液洗果10 min,再用0.5g/L的施保功溶液浸泡果实10 min,取出晾干后备用。
三,样品分组(四组):
1.对照组:果实用PE(聚乙烯)保鲜袋包装,轻绑袋口,置于低温(15℃)的恒温箱中贮藏。
2.1.0μl/L的1-MCP处理(橡皮化果实):在室温条件下(25℃),用浓度1.0μl/L的1-MCP密闭熏蒸处理果实24 h,取出果实后用PE保鲜袋包装,轻绑袋口,置于15℃(冷藏)、RH(相对湿度)为90%的条件下贮藏。
…… …… 余下全文