血清谷丙转氨酶活力测定
目的和要求
了解转氨酶的性质及临床意义。掌握用测定试剂盒方法测定谷丙转氨酶（GPT或ALT）活力。 原理
在氨基酸分解代谢中，联合脱氨基作用是大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与谷氨酸氧化脱氨基作用偶联而完成。此过程可用下式表示：
本实验以丙氨酸的氧化脱氨为例，测定谷丙转氨酶活性。
在谷丙转氨酶的催化下，丙氨酸和α–酮戊二酸作用生成丙酮酸和谷氨酸。此反应可逆，平衡点近于
1。无论正向或逆向反应皆可用于测定此酶的活性，既可测定所产生的氨基酸，也可测定生成的α–酮酸，因此可有多种测定方法。
本实验以丙氨酸及α–酮戊二酸作为谷丙转氨酶（GPT或ALT）作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定其酶活力。丙酮酸能与2，4二硝基苯肼结合，生成丙酮酸–2，4–二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439～530nm，可用于测定丙酮酸含量。
α–酮戊二酸也能与2，4二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱与丙酮酸二硝基苯稍有差别，在520nm波长比色时，α–酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远较丙酮酸二硝基苯腙为低（约相差3倍）。经转氨酶作用后，α–酮戊二酸减少而丙酮酸增加，因此在波长520nm处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α–酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系，故可以籍以测定谷丙转氨酶的活力。
但是，由于在实验中不宜有过多的α–酮戊二酸以降低其对显色的干扰，因此，对于作为底物的α–酮戊二酸浓度作了一定的限制，从而不能保证酶反应充分进行，以致丙酮酸产量与酶之间的关系并不始终成一直线关系。当酶量增大时，曲线斜率减小。因此在测定时，如酶活力较大（大于100单位），应将样品稀释后再进行测定。
另外，2，4二硝基苯肼对此显色反应也有一定的干扰，因此，在制作丙酮酸标准曲线时，虽没有加α–酮戊二酸，但是丙酮酸二硝基苯腙的吸光度与丙酮酸含量之间的关系也并不始终呈一直线关系，丙酮酸含量增大时，曲线斜率降低，因此，必须采用标准曲线中呈现出直线关系的部分来测定丙酮酸的生成量。
试剂和器材
一、试剂
1. 谷丙转氨酶基质液（pH7.4）：100ml×1瓶。
2. 2，4–二硝基苯肼液：100 ml×1瓶。
3.4mol/LnaOH:100ml×1，用时加蒸馏水至1 000ml。
4. 2μmol/L丙酮酸钠标准液1支。
5. 0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.1）一瓶。
二、器材
1. 试管1.5cm×15cm(×10).。
2. 移液器。
3. 恒温水浴锅。
4.722型分光光度计。
操作步骤
1.取试管6支，按下表进行操作。
管号
试剂
0.1mol/L磷酸缓冲液/ml 2μmol/L丙酮酸标准液/ml 基质缓冲液/ml 2，4—二硝基苯肼液/ml 相当于酶活力卡门氏单位
0.10 0.0 0.50 0.50 0
1 2 3 4 5
0.10 0.05 0.45 0.50 28
0.10 0.10 0.40 0.50 57
0.10 0.15 0.35 0.50 97
0 0
0.1
0.10 0.25
0.2
0.3
0.25 0.50 200
0.5
15
混匀后，37℃水浴20min 0.4mol/LnaOH/ml
5
5
5
5
5
5
室温放置10min，在505nm比色，以蒸馏水调零，测各管吸光度。以各管吸光度减去零管吸光度，所得差值为纵坐标，相应的卡门氏单位为横坐标，作标准曲线图。
另取2支试管，按下表进行操作。
血清/ml
基质液/ml，37℃预温5min 混匀后，37℃水浴30min 2，4‐二硝基苯肼液/ml 血清/ml
混匀后，37℃水浴20min 0.4mol/LNaOH
5
5
0.5
0.5 0.1
测定管 0.1 0.5
0.5 对照管
室温放置10min,在505nm比色，以蒸馏水调零，测各管吸光度。以各管吸光度减去零管吸光度之差值，查标准曲线，求得相应的GPT活力单位。
第二篇：彭尖 长期运动对白蛋白与血清谷丙转氨酶的影响
长期运动对白蛋白与血清谷丙转氨酶的影响
彭尖 王一蓉（研究生）陈嘉勤（指导老师）
(湖南师范大学体育学院,长沙市 410012)
摘要：对本校12名学生(其中包括6名持续参加训练的校运动队学生和6名普通大学生),在安静状态下测定了血清谷丙转氨酶和白蛋白水平,并对运动员与非运动员的血清谷丙转氨酶和白蛋白值进行比较研究。结果表明：校运动队学生的血清谷丙转氨酶和白蛋白的值均比普通大学生的低。说明长期坚持运动在一定程度上有利于降低血清谷丙转氨酶和白蛋白的值。
关键词：普通大学生 校队运动员 白蛋白 血清谷丙转氨酶 1 前言
白蛋白又称清蛋白。一类分子较小，呈球状，能溶于水的蛋白质。主要存在于哺乳动物、细菌、霉菌和植物中。卵白蛋白、乳白蛋白、豆白蛋白和血清白蛋白等都属此类。卵白蛋白是蛋清中的一种重要蛋白质，约占蛋清总蛋白的70%，分子内含糖，属于糖蛋白，加热即凝固，加硫酸铵至半饱和即沉淀析出。血清白蛋白是血清中含量最丰富的蛋白质，占血清总蛋白量的50%以上，不含糖，在饱和硫酸铵溶液中沉淀析出。血清白蛋白在血液中有重要生理功能，和维持血液正常渗透压有关，是血液总渗透压的主要调节物质，缺少该白蛋白可能导致机体浮肿。血清白蛋白的另一作用是作为脂肪酸的载体参与运送脂肪酸。白蛋白含量可作为诊断某些疾病的指标，如尿中白蛋白的含量的变化
能反映肾脏的某些病变，有些疾病可引起血浆白蛋白含量的改变，如肝硬化病人的血浆白蛋白含量比正常人高。血清白蛋白有药用价值，注射白蛋白针剂可治疗浮肿等症。
在临床上血清谷内转氨酶(GPT)的测定对病毒性肝炎的诊断最有价值,但并非特异性、如不注意分析、容易产生片面现象。 G PT在肝细胞含量最多，在肾、心肌、脑、肠等组织中也含少量。
2研究对象和方法
2.1实验对象：本校12名学生，其中包括6名校运动队学生。
2.2实验仪器：试管、试管架 恒温水浴 721分光光度计 5ml移液管，0.5ml移液管。
2.3试剂：
2.3.1、白蛋白试剂：0.5mol/L琥珀酸缓冲液、BCG贮存液（10mmol/L）、叠氮钠贮存液、 聚氧化乙烯月桂醚（Brij-35）贮存液、BCG试剂、40g/L白蛋白标准应用液
2.3.2、谷丙转氨酶试剂：0.1mol磷酸盐缓冲液、GPT基液、2,4—二硝基苯肼（1/mmol）、丙酮酸标准液（2.0μmol/ml）、0.4N NaOH溶液
2．4实验方法：
2.4.1、谷丙转氨酶
2.4.1.1、标准曲线的制作
2.4.1.2、样品的测定
取四支试管编号后按下表操作 单位： ml 空白管 标准管 血清对照管 血清测定管 磷酸盐缓冲液 0.2 — — —
丙酮酸标准液 — 0.2 — —
人血清 — — — 0.2 37℃水浴保温10min
GPT基质液 0.5 0.5 0.5 0.5 混匀后37℃水浴保温60min
2,4—二硝基苯肼 0.5 0.5 0.5 0.5 人血清 — — 0.2 —
混合后37℃水浴保温20min
0.4NNaOH 5.0 5.0 5.0 5.0
混匀在1小时内用520nm空白管调零，读取各管吸光度
2.4.1.3计算
血清GPT活力 = A测?A对照
A标 × 2.0 × 100 = 单位/dl
1单位相当于生成丙酮酸1μmol
GPT正常值：100单位以下；可疑值：100~150单位/dl； 异常值：大于150单位/dl。
2.4.2、白蛋白
混匀，室温放置10分钟，在波长630nm，用空白管调零点，读取各管的吸光度。
根本混浊，可做标本空白管（血清0.02ml加琥珀酸缓冲液4ml），再测定管及光度减去标本空白管吸光度后，计算结果。
[计算]
血清白蛋白（g/L）= 测定管吸光度?标准白蛋白浓度?g/L?标准管吸光度
同时测定血清标本的总蛋白浓度，减去血清蛋白浓度，即得血清球蛋白浓度，并可计算出血清白蛋白与球蛋白的比值。
[正常参考值]
白蛋白35~55g/L
白蛋白/球蛋白（A/G）=1.5~2.5：1
2．5、研究方法：实验法 数据统计法 文献资料法 按不同等级受试者分为二组，对照组(普通大学生)，实验组(运动员)，分别于同一时间基础条件下测心率及肘前静脉采血3毫升，以3000转／分低温离心10分钟，血清置一20℃以下冷冻备用。全部数据以均值±标准误表示，组间比较采用T检验。
3结果与分析：
普通大学生与校运动队员血清白蛋白和谷丙转氨酶比较：
由表中结果显示校运动队的血清白蛋白的值全部低于普通大学生的值,校运动队的谷丙转氨酶的值大部分低于普通大学生的(P<0.05)。
4．讨论
4．1血清白蛋白在肝脏合成。血清蛋白浓度增高常见于严重失水，血浆浓缩所致，此时并非蛋白质绝对量增多。白蛋白浓度降低与总蛋白浓度降低的原因相同。但有时总蛋白浓度接近正常，而白蛋白浓度降低，同时又伴有球蛋白浓度增高。急性白蛋白浓度降低主要由于急性大量出血或严重灼伤时血浆大量丢失。慢性白蛋白功能障碍、腹水形成时白蛋白的丢失和肾病时尿液中的丢失，严惩时白蛋白浓度可低于10g/L。白蛋白浓度低于20g/al时，由于胶体渗透压的下降，常可见到水肿等现象。
4．2生物体内转氨基作用是将α-氨基酸的氨基在酶的催化下转移到α-酮酸上生成新的α-氨基酸的化学反应。催化此反应的酶称为转氨
酶，转氨酶广泛存在于机体的各组织内，肝中谷丙转氨酶（GPT）活性极强，心肌中此酶活性亦很强。
4．3丙转氨酶(ALT)活力增高是诊断肝炎的一个重要指标.而引起SGPT增高的因素也较多。正常人血清中含有一定水平的此种酶活性。当肝、心受到损害时，此酶大量释放至血清中，引起血清GPT活性显著增加，临床上常借以帮助诊断。需注意的是血细胞中亦含有GPT，取血溶血时，血清GPT亦增高。
5．小结
5.1 通过调查显示结果发现校运动队员的血清谷丙转氨酶值比普通大学生的值低.
5.2 校运动队员的白蛋白比普通大学生的什低.
5.3 长期坚持运动可使血清谷丙转氨酶和白蛋白的值降低.
6.参考文献
6.1 李可鹏. 运动及饮食对谷丙转氨酶的影响 西北国防医学杂志 19xx年04期
6.2 潘怀欢. 乙肝表面原阳性运动员谷丙转氨酶变化的探讨 广东卫生防疫 19xx年02期