Agilent 1200高效液相色谱仪标准操作程序

1.     目的

使操作人员的操作步骤规范化。                          

2.     适用范围

适用于仪器安装、调试、校准后正常状态下进行的操作。

3.     责任者

质控科仪器分析员对此规程负责。

4.     规程

4.1清洗液、流动相、封柱液预处理

4.1.1所有清洗液、流动相、封柱液在使用前均需过滤、脱气以及混合均匀。

4.1.2甲醇-水（10：90）、乙腈-水（10：90）、超净水、乙腈均需存放在棕色溶剂瓶中。

4.1.3含有乙腈的溶液以及不含乙腈但含有较高比例的其他有机溶剂的溶液在过滤时需使用有机相微孔滤膜，其它溶液在过滤时需使用水相微孔滤膜。

4.1.4存放清洗液、流动相、封柱液的溶剂瓶在每次装入溶液前需用少量过滤好的该溶液清洗数次。

4.2接通电源,开启连机电脑,再接通仪器电源,仪器自检完毕，处于准备进行状态。双击桌面图标“仪器1联机”，打开Agilent 1200化学工作站，在左上角下拉框中选择“方法与运行控制”界面。显示如下图标：

注意：一定要先双击“仪器1联机”图标，进入联机状态，方可双击“仪器1脱机”图标，同时进入脱机界面。否则，将无法联机。

4.2泵

4.2.1 准备清洗液并装入溶剂瓶中，将吸滤器放入瓶内。安装所需用柱子。

4.2.3 将吹扫阀（即“Purge”阀）打开，单击泵图标 ，选择“设置泵”，将“流速”设置为3.00ml/min。选择清洗液所在通道（建议为A通道），单击“确定”，在“系统视图”中单击“启动”运行泵，泵运行10分钟后，观察压力，应小于10bar，若大于此压力，应更换purge阀滤芯，调节流速1.00ml/min。

4.2.4关闭purge阀，观察柱压是否正常。

4.2.5选择“控制”，在“用于泵密封垫清洗的泵”（Seal Wash）中选择“定期清洗”，“周期”设置为5min，“持续”设置为0.1min，同时观察试剂架中10%异丙醇是否充足，相应的废液瓶是否有充足空间。

4.2.6 根据“柱使用记录中所规定的方法”清洗柱子约30分钟后，在“控制”组中的“泵”选项中选择“待机”，待系统压力降到10bar以下后，更换流动相，在“控制”组中的“泵”选项中选择“启动”改用流动相平衡柱子，约30分钟后柱子处于平衡状态。设定所需流速，在“停止时间”中设定所需运行时间，在“后运行时间”设定所需后运行时间；选择“溶剂”项，设定各通道比例，单击“确定”。

4.2.6 如进行梯度分析，在“设置泵”组中选择“时间表”，单击“追加”，根据具体方法进行时间和相应的参数设置。

4.3 柱温箱

4.3.1在系统视图中，单击柱温箱图标，并从菜单中选择“设置柱温箱”，设置“温度”选项，单击“确定”。

4.3.2在实验开始时，用清洗液清洗柱子时，应同时开启柱温箱；在实验结束时，用清洗液清洗柱子时，应关闭柱温箱，让柱子随着清洗过程慢慢冷却。要避免到封柱过程结束后才关闭柱温箱，这会导致柱的寿命减短。

4.4自动进样器

4.4.1在系统视图中，单击自动进样器图标，从菜单“设置进样器”，在“进样”组中，选择“洗针进样”，清洗瓶通常设为“91”；在最优化中设为“无”。

4.4.2 清洗瓶中的清洗剂通常为滤过的超净水，只需盖瓶盖，无需放置垫片。

4.5可变波长检测器（VWD）

4.5.1在系统视图中，单击检测器图标，并从菜单中选择“设置VWD信号”，在“信号”组中设置波长，在“峰宽（响应时间）”组中，单击下拉列表并选择“>0.1min（2s）”，单击“确定”。

4.5.2在“控制”组中，选择关闭或打开氘灯。一般情况下，待到系统走流动相时即打开氘灯预热；分析结束时，用清洗液清洗柱子时，即时关闭氘灯。

4.7“自动进样器”、“柱温箱”、“检测器”中的时间表设置均与“泵”一致。

4.8 上述“自动进样器”、“泵”、“柱温箱”、“检测器”的相关参数设置完毕后可在主界面选择“方法”，选择“方法另存为”保存方法，以后使用时可选择“调用方法”。

4.9 序列

4.9.1在“方法和运行控制”视图中，单击主工具栏上的，切换至“序列”面板，点击“仪器控制”。

4.9.2单击选择“序列参数”出现如下对话框：

“操作者姓名”一般填写姓名的首字母集合；“数据文件”选择“自动”；子目录填写“xxyyzz-aaa”，其中xxyyzz为6位数的年月日组合，aaa为品名的首字母集合；“运行部分方法”选择“依据运行时选项表”；“等待时间”设置为0min；“未就绪超时”设置为0min；如该序列要走过夜，在“关闭”选择“序列运行后命令/宏”，如果所用的仪器为单元泵，选择“LAMPALL OFF”,如果所用的仪器为四元泵，选择“macro SHUTDOWN MAC,go”

4.9.3单击“确定”。

4.9.4单击“序列“面板，出现如下对话框，设定序列表。

在“样品瓶“中输入样品瓶位置“1～99”；在样品样品名称中输入相应样品名称，具体参见附件一；在方法名称中输入相应的方法名称，具体参见附件二；在“进样次数/瓶”输入所需进样的次数；使用“插入”、“追加一行”和“剪切”按钮编辑序列行数，单击“确定”。

4.9.5单击主界面上的“序列”，选择“保存序列”，保存所设置的序列。

4.10 数据分析

4.10.1在“视图”中选择“数据分析”将主界面切换到数据分析。

4.10.2单击，切换至积分工作区。

4.10.3选择“调用信号”调用所需的信号。

4.10.4在“积分/报告”工具栏中，单击切换到积分事件表。其中，基线校正可以设置为“经典”或“高级”，在进行有关物质分析时设置为“高级”；斜率灵敏度在有关物质分析时设置为“0.5”，其他分析时设置为“1”；峰宽设置为“0.04”；“最小峰面积”和“最小峰高”在有关物质分析时均设置为“0”，其他分析时可设置适合的数值；“肩峰”选择“关闭”；“ 信号指定事件”选择“VWD缺省”。单击保存已修改的积分事件表并关闭积分工作区。

4.10.5单击打开“保存方法”对话框保存方法。

4.10.6单击放大光标查看积分基线，单击缩小至初始大小。

4.11样品分析

待基线走平稳后，在序列“仪器控制”主界面点击“开始”进样。

4.12仪器及柱子清洗

根据“柱使用记录中所规定的方法”清洗柱子及流路，注意一般甲醇-水（10：90）、乙腈-水（10：90）不超过60分钟。再用10倍柱体积封柱液清洗柱子及流路。退出工作软件并保存数据，关机。

5.     维护

5.1泵

5.1.1主动入口阀滤芯，每6个月清洗一次。

5.1.2溶剂过滤器，每3个月清洗一次。

5.1.3 泵密封垫、柱塞杆每2年清洗一次。

5.2自动进样器

5.2.1针头，每6个月清洗一次。

5.2.2针座，每6个月清洗一次。

5.2.3转子密封垫，每6个月清洗一次。

5.2.4 计量泵，通常不进行维护，除非发现进样量精密度降低或计量设备泄漏。

5.3柱温箱，进行必要的清洁。

5.4 检测器

5.4.1 氘灯，当不能点亮或者漂移超过范围是更换。

5.4.2 流通池，噪声、渗漏、光强度降低时进行清洗。

6附件

  

第二篇：Agilent1200高效液相色谱仪操作规程

Agilent1200高效液相色谱仪操作规程

一、Agilent1200化学工作站开机顺序(LAN卡联接)

1、将待测样品按要求前处理，准备HPLC 所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等

2、打开计算机，进入Bootp；

3、打开主机各模块电源（不分先后），等待Bootp接收,等待各模块就绪后,再双击工作站图标,进入化学工作站；

4、调出一个分析方法，检查各参数的设置；

5、旋开泵上的排气阀，将工作站中的泵流量设到5ml/min，溶剂A设到100%；

6、在工作站中打开泵，排出管线中的气体数分钟；

7、依此切换到B、C、D溶剂分别排气；

8、将工作站中的泵流量设到1ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；

9、关闭排气阀，检查柱前压力；

10、待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯，观察基线情况；

二、数据采集方法编辑

1 由运行控制进入样品信息，设定操作者姓名，样品数据文件名等。 2自动进样器参数设定:

1）选择合适的进样方式, “Standard Injection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“Injection with Needle Wash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，“UnRegistered”--此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“Use injectorprogram”---可以点击“Edit ”键进行进样程序编辑。

2)单击确定进入下一画面。

3 泵参数设定：（四元泵）

1）在流量（Flow）处输入流量,如1.5ml/min，在溶剂 B处输入70.0,(A=100-B-C-D) ,也可插入一行时间列表（Timetable） ,编辑梯度。在最大压力极限处（Pressure LimitsMax）输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。

2）单击确定进入下一画面。

4 柱温箱参数设定:

1）在柱温下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击更多键,选中与左侧一致，使柱温箱的温度左右一致。

2）单击确定进入下一画面。

5 DAD检测器参数设定:

1）在波长下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在峰宽 (响应时间)下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)。

2）在时间列表中可以插入一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm。

3）点击确定进入下一画面。

6 单击方法菜单，选中保存方法，输入一方法名，如“test”，单击确定。

7、运行序列：新建序列，在序列参数中输入样品信息，在序列表中输入样品位置，方法等，运行该序列，等仪器就绪，基线平稳，从方法菜单中选择运行方法，

进样。

三、数据处理操作步骤

1 由主菜单上的视图进入数据分析，到数据处理界面；

2 由主菜单上的文件进入调用信号，调出要分析的数据文件色谱图； 3 由主菜单上的图形进入信号选项，调整谱图坐标:

1)点自定义量程，在时间范围中输入横坐标(时间）(例如0到10)；

2)在响应范围:中输入纵坐标(响应值）(例如-50到800)；

3)在量程框中，调到全部使用相同量程；

4)点击确定退出。

4 由主菜单上的积分进入积分事件，设置、修改积分参数；

1)在斜率灵敏度后，输入斜率值；

2)在峰宽后中，输入最小峰宽值；

3)在最小峰面积后，输入最小峰面积值；

4)在最小峰高后，输入最小峰高值；

5)点击左上方带钩的图标，确认；

5 由主菜单上的报告进入设定报告，设置报告参数：

1)在定量结果栏中，选择计算（面积百分比，外标法，内标法等）；

2)在目标栏，选打印机打印，或屏幕打印；

3)点击确定退出。

6 由主菜单上的报告进入打印报告，打印报告；

四、关机

1 关机前，用95%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，流量0.5—1ml/min，再用100%有机溶剂冲0.5小时，然后关泵，（适于反相色谱柱）。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]

2 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shut down关）。 3关闭Agilent 1200各模块电源开关。

五、Agilent 1200 高效液相色谱仪维护保养：

1 氘灯是易耗品，应最后开灯，不分析样品即关灯；

2 开机时，打开排气阀，100%水，泵流量5ml/min，若此时显示压力 >10bar，则应更换排气阀内玻璃料。

3流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。 4流动相使用前必须进行脱气处理，可用超声波振荡10- 15min。

5配制90%水+10%异丙醇，以每分2—3滴的速度虹吸排出，进行seal-wash，溶剂不能干涸。

6当使用缓冲溶液时，要用水冲洗手动进样器进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。

7色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（乙睛/甲醇适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。