RDB和HC2的介绍
反向斑点杂交(RDB)工作原理,利用生物素等标记的探针和特意性扩增PCR产物(靶DNA序列)杂交。但是不同于一般的斑点杂交。一般的点印迹杂交是靶DNA固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上,标记的探针和靶DNA杂交显色。这种方法每次杂交反映只能判断待测DNA是否含有某一种探针的同源序列,对于某些基因座位可能含有十几至几十个等位基因(如HLADRB位点或地中海贫血突变基因等),用这种点杂交方法就会很繁杂,甚至可能做不到。而RDB正是解决了这一难题。RDB是先将待用的探针分别点到硝酸纤维素膜或尼龙膜上,每个探针一个点并编上号,再将待测的DNA样本(一般是经PCR特意性扩增的产物,在PCR引物5’端预先进行生物素标记,使扩增产物相应标记有生物素)与之杂交,这样待检样本就会与具有同源序列的探针结合,经洗涤去除未结合的DNA样本,由于待测的DNA样本具有生物素类的标记物,结合了待测DNA的探针点上就带有生物素类的标记物,再经相应的显色反应就能显出杂交信号。这样一次就可以判断某一基因座位的大部分或全部等位基因,因此利用这样的工作原理还可以用于基因分型、病原体检测、肿瘤研究等。
杂交捕获法(HC2),先用试剂中的RNA与标本中的HPV病毒DNA杂交。RNA的稳定性是很难保证的。再用微孔板中的包被抗体捕获RNA-DNA杂交体,通过化学发光进行检测。由于所检测对象为13种病毒中的一种或几种,RNA-DNA杂交体的抗原性是很难保证的。由于没有扩增放大,该检测灵敏度低,且无法进行HPV分型。HC2是唯一获美国FDA认证可用于临床的HPV DNA检测技术,已获欧洲CE及中国SDA认证。
有研究表明HC2检测法能定量地检测到HPV病毒的DNA,具有灵敏度高、特异性好、重复性和客观性强的等优点,无需严格的实验室环境及复杂的实验室技能,无需基因扩增,免除了交叉污染的后顾之忧。但是HC2是进口试剂,成本高,目前在我国不能用于全面普及筛查。
RDB检测具有快速、简便、高灵敏性、特异性强的特点,尤其是在基因分型和病原体检测方面有其独特的优势。另一突出优势是成本较HC2检测低。
以下是集中HPV检测方法的比较
第二篇:RDB
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注释
最小原始值最大原始值
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寄存器名称数据类型
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报警组优先级
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高高报警文本越限死区报警延时变化率%变化率单位目标值小偏差大偏差偏差死区否无
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线性表名称最小累计值最大累计值是否允许DDE报警组优先级低低限值低低报警文本低限值线性表名称最小累计值最大累计值是否允许DDE报警组优先级低低限值低低报警文本低限值开到关报警文关到开报警文扩展域1扩展域2历史记录方式记录间隔(分是否生成操作安全区注释
扩展域1扩展域2历史记录方式历史记录变化记录间隔(分是否生成操作安全区
不记录否无
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不记录否无
不记录否无注释轿厢一级加速延时时间一级制动时间二级制动时间
低报警文本高限值
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是否生成操作安全区
是否生成操作安全区注释注释