实验九  电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量

一、实验原理

根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极（或复合电极）插入被测液中构成电池，用碱液滴定，根据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点。

二、仪器与试剂

1、仪器  酸度计  磁力搅拌器   烧杯（250mL）  微量滴定管

2、试剂  pH=6.18标准缓冲溶液；20%中性甲醛溶液；0.05mol/L左右的NaOH标准溶液

三、实验操作方法

（1）样品处理

先根据实验四测出待测酱油的比重，然后吸取酱油5.00mL于100mL容量瓶中,加水定容。吸取定容液20.00mL于250mL烧杯中,加水60mL，放入磁力转子，开动磁力搅拌器使转速适当。用pH6.18的标准缓冲液校正好酸度计，然后将电极清洗干净，再插入到上述酱油液中，用NaOH标准溶液滴定至酸度计指示pH8.2,记下消耗的NaOH溶液体积。

（2）氨基酸的滴定

在上述滴定至pH8.2的溶液中加入10.00mL的中性甲醛溶液，再用NaOH标准溶液滴定至pH9.2,记下消耗的NaOH溶液体积。

（3）空白滴定

吸取80mL蒸馏水于250mL的烧杯中，用NaOH标准溶液滴定至pH8.2,然后加入10.00mL中性甲醛溶液，再用NaOH标准溶液滴定至pH9.2,记下加入甲醛后消耗的NaOH溶液体积。

四、 实验计算

式中：

V₁——酱油稀释液在加入甲醛后滴定至pH9.2所用NaOH标准溶液的体积mL；

V₂——空白滴定在加入甲醛后滴定至pH9.2所用NaOH标准溶液的体积mL

C ——NaOH标准溶液的浓度mol/L

M——吸取的酱油的质量g

0.014——氮的毫摩尔质量g/m mol

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实验九 电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量

一、实验原理

根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极（或复合电极）插入被测液中构成电池，用碱液滴定，根据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点。

二、仪器与试剂

1、仪器：电位电动滴定仪 烧杯（250mL） 20ml移液管

2、试剂： pH=6.18标准缓冲溶液，pH=4.00标准缓冲溶液 ，20%中性甲醛溶液；0.1mol/L左右的NaOH标准溶液

三、实验操作方法

（1）清洗和润洗管路

开机，按“F3”清洗键，用蒸馏水清洗3次滴定管路，随后用滴定剂清洗3次滴定管路，使溶液充满整个滴定管道。

（2）PH标定

选择合适的缓冲溶液进行两点标定。

（3）滴定模式选择和参数设置

选择预控滴定模式，设置第一滴定终点为PH8.2，第二滴定终点为PH9.2。

（4）酱油中总酸测定

吸取酱油稀释液10.00ml（酱油稀释5倍） 于250mL烧杯中,加水30mL，放入磁力转子，开动磁力搅拌器使转速适当。选择预控滴定模式，滴定至PH8.2，记录消耗的NaOH体积V1，计算酱油中总酸含量。

（5）氨基酸的滴定

在上述滴定至pH8.2的溶液中加入10.00mL的中性甲醛溶液，再用NaOH标准溶液滴定至pH9.2,记下消耗的NaOH溶液体积V2,计算氨基酸态氮含量。

（6）空白滴定

吸取80mL蒸馏水于250mL的烧杯中，选择空白滴定模式，用NaOH标准溶液滴定至pH8.2,然后加入10.00mL中性甲醛溶液，再用NaOH标准溶液滴定至pH9.2,记下加入甲醛后消耗的NaOH溶液体积V空白。

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结果表示

酱油中总酸含量以mol/L表示

酱油中氨基酸总量以氨基酸态氮含量表示(g/100g）

对比： 酱油中氨基酸态氮含量的测定-双指示剂甲醛法 实验步骤

1、 移取1份10ml酱油稀释液分别加入250ml锥形瓶中，加入30ml

蒸馏水，其中1份加入3滴中性红指示剂，用NaOH标液滴定至溶液由红色变为琥珀色为终点，记录体积为V1，用于计算酱油中总酸含量。

2、 移取1份10ml酱油稀释液分别加入250ml锥形瓶中，加入30ml

蒸馏水，加入3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛溶液10ml，摇匀，静置1min，用NaOH标液滴定至淡蓝色为终点，记录体积为V2，用于计算酱油中氨基酸态氮含量 。

3、 移取10ml蒸馏水加入250ml锥形瓶中，加入30ml蒸馏水，加入

3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛溶液10ml，摇匀，静置1min，用NaOH标液滴定至淡蓝色为终点，记录体积为V空白.

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