误差理论与测量平差
综合性实验报告
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年 月 日
实验报告
第二篇：南财大学应用化学系本科化学实验报告
南财大学应用化学系本科化学实验报告
课程名称 综合化学实验 成绩评定
实验项目名称索氏法从胡萝卜中提取类胡萝卜素索氏法 指导教师 刘晓庚
实验项目类型综合化学实验 实验地点食工楼6楼 633室 实验组第 1组
班级0901 实验者明艳，王锋，金立峰 学号 04、28、18
实验时间2012年5月9日温度 28℃湿度 65~80 %
一、实验目的
1.了解并掌握从胡萝卜中提取类胡萝卜素的提取方法；
2.掌握类胡萝卜素的定性(薄层层析法)和定量测定方法(紫外可见分光光度法)；
3.了解并掌握索氏提取法；
4.熟练掌握紫外分光光度计的使用。
5.了解类胡萝卜素的理化性质测定。
二、实验原理
类胡萝卜素(carotenoids)是自然界广泛存在的天然色素,包括一类碳氢化合物(Carotenes)及它们的氧化衍生物(Xanthophylls)，它们由8个类异戊二烯单位组成。对天然类胡萝卜素进行分离纯化和结构鉴定是十分重要的基础研究工作之一。紫外可见吸收光谱(Uv-Vis)主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁，它是研究分子吸收190~750 nm波长范围内的吸收光谱，它不仅在有机化合物的结构鉴定中发挥重要作用，而且依此原理建立的紫外可见分光光度法是应用最广泛的定量分析方法之一。
三、仪器与试剂
仪器：BS224S电子分析天平 (北京赛多利斯仪器系统有限公司)；
UV8000A紫外可见分光光度计 (上海元析仪器有限公司)；
RE52CS旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂)；
红外光谱仪；偏光仪器
试剂：胡萝卜干粉或新鲜胡萝卜；α-和β-胡萝卜素标准品、(95%和无水)乙醇、石油醚(沸程30℃ ~60℃、60℃~90℃)、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、抗坏血酸、BHT、环己醇。
实验装置：
图1
四．实验步骤
1. 试剂的配制
β-胡萝卜素标准溶液：准确称β-胡萝卜素标准物质25.0 mg于小烧杯中，加入10 mg抗坏血酸 + 10 mg BHT于小烧杯中，再先加入少量氯仿溶解后，再用石油醚定容至50 mL摇匀，即配成浓度为500 μg/mL β-胡萝卜素标准溶液的使用溶液，转移至棕色试剂瓶中贮存备用。
2. 吸收曲线和标准曲线的测绘
按表1的比例要求移取不同体积的500 μg/mL β-胡萝卜素使用液，用石油醚(沸程要与提取胡萝卜素用的石油醚相同)稀释配制成体积为5.00mL(或10.00mL)的一系列不同浓度的标准溶液。取中间浓度的标准溶液，以含有相同浓度抗坏血酸+BHT的石油醚(沸程要与提取胡萝卜素用的石油醚相同)溶液为参比溶液，用1 cm比色杯，于紫外可见分光光度计在200~800 nm波段进行波长扫描，根据扫描结果从而可绘得β-胡萝卜素的吸收曲线。也可以用同样的方法绘制从胡萝卜中提取得到的胡萝卜的吸收曲线，并比较和分析两吸收曲线的异同。根据测得的吸收曲线可以找到β-胡萝卜素的最大吸收波长λmax = nm，并以此波长为工作波长λw。
用1 cm比色杯，在λmax = nm下，以含有相同浓度的抗坏血酸+BHT的石油醚(沸程要与提取胡萝卜素用的石油醚相同)溶液为参比溶液，测定按表1配制好的一系列标准溶液的吸光度值?Aλmax，然后用Excel软件绘制出该标准工作曲线。
表1 β-胡萝卜素标准曲线数据
3. 类胡萝卜素的提取
索氏提取法提取胡萝卜中类胡萝卜素
称取10 g (准确至0.01g)胡萝卜干粉于烧瓶中，加入100 mg抗坏血酸+ 100 mg BHT于当中，再加入混合提取液(V石油醚∶V丙酮= 4∶1)150 mL于索氏器中，在50~55℃(如果使用的是沸程为60~90℃的石油醚则是75~80℃)左右水浴锅中抽提至抽屉管中抽提液为无色(即回流约2h，观察提取筒中提取液的颜色为无色时即止，一般回流为6次以上。注意：索氏提取要按表2要求测定每次回流后烧瓶中提取液的吸光度(吸取0.20mL稀释至5.00mL后进行测定)，还要观测记录整个提取过程中提取液的量是否有减少(最好能测定其体积或质量))。
提取液收集方法：提取后分出提取液，并准确测定提取液的体积V= mL(准确至0.01mL)，再将于提取液与后面其它方法相同溶剂提取得到的提取液合并装于试剂瓶中，待到一定体积后再进行浓缩和纯化。
测定方法：取0.20 mL(注意取样要迅速，否则会使液体从枪中溢出)稀释至5.00mL后进行测定用1.0 cm比色杯，以含有相同浓度的抗坏血酸+BHT的石油醚(沸程要与提取胡萝卜素用的石油醚相同)溶液为参比溶液，于波长λmax处测样品的吸光度值?Aλmax。并根据标准曲线和样品所测得的吸光度值，求得各回流阶段样品液中胡萝卜素的浓度，并据此最后一次取样测得的吸光度和提取液的体积来求算出胡萝卜中类胡萝卜素的含量。
类胡萝卜素含量(以β-胡萝卜素计) (%) = 
表2 回流阶段回流样品液中胡萝卜素的浓度和质量
4. 类胡萝卜素提取物的精制
将上述得到的同一种溶剂提取的胡萝卜素样液合并到一起，取一定量提取液于分液漏斗中，用纯净水或蒸馏水洗涤6次，将收集的上层石油醚层液用旋转蒸发仪进行减压浓缩制成膏状体，得粗产品，然后冷冻干燥制成粉末状类胡萝卜素产品(测定精产品的纯度)。也可以将膏状体用环己烷和乙醇的混合液等试剂对粗产品进行结晶提纯的方法制备成高纯度的结晶状类胡萝卜素产品。用合适大小的棕色试剂瓶装好产品，并密封贴上标签后于-2℃左右贮藏备用。
5.红外光谱测定：在压片机上将KBr体颗粒压成小圆片，取少量类胡萝卜素纯化液
在小片上，放入红外光谱仪中进行扫描，得类胡萝卜素定性分析谱图。KBr压片法(标准品IR图谱)、液膜法(标准品IR图谱和试样IR图谱)和衰减全反射(ATR)法(标准品IR图谱和试样IR图谱)。
6.偏光光谱测定：将类胡萝卜素纯化品或标准品制成一定浓度的溶液涂在小载玻片上，放入偏光显微镜下进行观测，得类胡萝卜素定性分析用偏光显微谱图。
五、实验数据记录及处理
原料的质量：8.02 g
提取液体积：53.98ml
提取液中类胡萝卜素质量：1.4×10-3 g
类胡萝卜素含量为：0.02%
样品和标准品 均在960cm-1有强吸收说明样品有S-反式双键；
样品和标准品 在1740~1720cm-1有吸收说明样品有羰基 ；
只有样品在2400有吸收，则样品不纯有杂质。
该物质有偏光性
六、注意事项
1.取样要迅速，否则液体从移液枪中溢出，迅速盖上盖子以防溶剂挥发；
2.升温时要慢慢升温，否则溶剂在较短时间内容易蒸干。
七、参考文献：
[1] 刘晓庚 编著 南京财经大学化学综合实验指导及实验报告