实验一 邻二氮菲分光光度法测定微量铁
一．实验目的和要求
1、掌握紫外可见分光光度计的基本操作；
2、掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理和方法；
3、掌握吸收曲线绘制及最大吸收波长选择；
4、掌握标准曲线绘制及应用。
二．实验原理
邻二氮菲（1,10—邻二氮杂菲）是一种有机配位剂，可与Fe2+形成红色配位离子
在pH=3~9范围内，该反应能够迅速完成，生成的红色配位离子在510nm波长附近有一吸收峰，摩尔吸收系数为1.1×104，反应十分灵敏，Fe2+ 浓度与吸光度符合光吸收定律，适合于微量铁的测定。
实验中，采用pH=4.5-5的缓冲溶液保持标准系列溶液及样品溶液的酸度；采用盐酸羟胺还原标准储备液及样品溶液中的Fe3+并防止测定过程中Fe2+被空气氧化。
三．实验仪器与试剂
1. 752型分光光度计
2. 标准铁储备溶液（1.00×10-3mol/L）
3. 邻二氮菲溶液（0.15%，新鲜配制）
4. 盐酸羟胺溶液（10%，新鲜配制）
5. 醋酸盐缓冲溶液
6. 50ml容量瓶7个
7. 5ml移液管4只
8．1cm玻璃比色皿2个
9. 铁样品溶液
四．实验步骤：
1、 标准系列溶液及样品溶液配制
按照下表配制铁标准系列溶液及样品溶液
2、 吸收曲线绘制
用1cm比色皿，以1号溶液作为参比溶液，测定4号溶液在各个波长处的吸光度，在坐标纸上以测定的吸光度为纵坐标，波长为横坐标，绘制吸收曲线，并从吸光曲线上找出最大吸收波长。
绘图如下：
3、 标准曲线制作
在选定最大吸收波长处，用1cm比色皿，以1号溶液作为参比溶液，分别测定2至7号溶液的吸光度，在坐标纸上以吸光度平均值为纵坐标，系列标准溶液的浓度为横坐标制图，绘制标准曲线。
绘图如下：
实验数据处理：
1. 样品溶液中铁含量计算
C读取值=（0.573-0.0159）/11.257=0.04952
Cx=C读取值×50.00/2.50=0.49×20=0.99(mol/ml)=0.99x10-3(mol/L)
2.摩尔吸光系数计算
ε=(A2－A1)/(c2－c1)=(0.466—0.242)/(0.04×10-3—0.02×10-3)=11.275mL/(mol·cm) =1.1275x104 L/(mol.cm)
实验讨论：
在本次实验中，比色皿在换装不同浓度的溶液时，必须用待测的溶液润洗至少三次，装入四分之三或五分之四左右，放入分光光度计样品室前，必须用吸收纸将表面擦拭干净，每更换一次比色皿要及时调零，等示数稳定后，再读取数据。我们组绘制吸收曲线时，最开始选择的吸收波长是502nm，但是经过我们重新实验，发现第二次数据和第一次数据完全不同，吸收波长也由502nm变为了508nm,可能是由于第一次实验操作不规范，再加上仪器的不稳定造成的。
第二篇：实验十 邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验十 邻二氮菲分光光度法测定微量铁
一、实验目的
1．掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理
2．熟悉绘制吸收曲线的方法，正确选择测定波长
3．学会制作标准曲线的方法
4．通过邻二氮菲分光光度法测定微量铁，掌握721型分光光度计的正确使用方法，并了解此仪器的主要构造。
二、实验原理
邻二氮菲（1，10—二氮杂菲），也称邻菲罗啉是测定微量铁的一个很好的显色剂。在pH2—9范围内（一般控制在5—6间）Fe2+与试剂生成稳定的橙红色配合物Fe（Phen）32+lgK=21.3，在510nm下，其摩尔吸光系数为1.1104L/moL.cm, ）Fe3+与邻二氮菲作用生成兰色配合物，稳定性较差，因此在实际应用中常加入还原剂盐酸羟胺使Fe2+还原为Fe3+：
2 Fe3++2NH2OHHCl=2 Fe2++N2+4H++2H2O+2Cl-
本方法的选择性很高。相当于含铁量40倍的Sn、AI、Ca、Mg、Zn、Si,20倍的Cr、Mn、V、P和5倍的Co、Ni、Cu不干扰测定。
三、试剂与仪器
仪器：
1．721型分光光度计
2．50mL容量瓶8个（4人/组）,100mL1个,500mL1个
3．移液管：2 mL1支，10 mL1支
4．刻度吸管：10mL、5mL、1mL各1支
试剂：
1．铁标准储备溶液100ug/mL：500 mL（实际用100mL）。准确称取0.4317g铁盐NH4Fe（SO4）212H2O置于烧杯中，加入6moL/LHCI20mL和少量水，然后加水稀释至刻度，摇匀。
2．铁标准使用液10ug/mL：用移液管移取上述铁标准储备液10.00 mL，置于100 mL容量瓶中，加入6moL/LHCI2.0mL和少量水，然后加水稀释至刻度，摇匀。
3．HCI6moL/L：100mL（实际用30mL）
4．盐酸羟胺10%（新鲜配制）：100mL（实际80mL）
5．邻二氮菲溶液0.1%（新鲜配制）：200mL（实际160mL）
6．HAc—NaAc缓冲溶液（pH=5）500 mL（实际400mL）：称取136gNaAc，加水使之溶解，再加入120 mL冰醋酸，加水稀释至500 mL
7． 水样配制（0.4ug/mL）：取2mL100ug/mL铁标准储备溶液加水稀释至500mL
四、实验步骤
1．绘制吸收曲线：用吸量管吸取铁标准溶液（10ug/mL）0.0、2.0、4.0 mL分别放入50 mL容量瓶中，加入1 mL10%盐酸羟胺溶液、2.0 mL0.1%邻二氮菲溶液和5 mL HAc—NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀，放置5分钟，用3cm比色皿，以试剂溶液为参比液，于721型分光光度计中，在440—560nm波长范围内分别测定其吸光度A值。当临近最大吸收波长附近时应间隔波长5—10nm测A值，其他各处可间隔波长20—40nm测定。然后以波长为横坐标，所测A值为纵坐标，绘制吸收曲线，并找出最大吸收峰的波长。
2．标准曲线的绘制：用吸量管分别移取铁标准溶液（10ug/mL）0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL依次放入7只50mL容量瓶中，分别加入10%盐酸羟胺溶液1 mL，稍摇动，再加入0.1%邻二氮菲溶液2.0 mL及5 mL HAc—NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀，放置5分钟，用3cm比色皿，以不加铁标准溶液的试液为参比液，选择最大测定波长为测定波长，依次测A值。以铁的质量浓度为横坐标，A值为纵坐标，绘制标准曲线。
3．水样分析：分别加入5.00mL（或10.00mL，铁含量以在标准曲线范围内为宜）未知试样溶液，按实验步骤2的方法显色后，在最大测定波长处，用3cm比色皿，以不加铁标准溶液的试液为参比液，平行测A值。求其平均值，在标准曲线上查出铁的质量，计算水样中铁的质量浓度。
五、思考与讨论
1．邻二氮菲分光光度法测定微量铁时为什么要加入盐酸羟胺溶液？
2．吸收曲线与标准曲线有何区别？在实际应用中有何意义？