检验科开展聚合酶链反应技术(简称PCR技术)
人乳头瘤病毒(HPV)检测
一、病毒简介:
宫颈癌是可以预防的,关键在于早发现、早治疗。人乳头瘤病毒(HPV)是引起宫颈癌的主要“元凶”,通过HPV检测可以帮助了解是否存在HPV感染、是否有发生宫颈癌的风险。HPV病毒是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属,是球形DNA病毒,能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖.目前已分离出130多种,该病毒只侵犯人类,对其它动物无致病性,人体一旦感染会终生携带。生物学活性:HPV抵抗力强,能耐受干燥并长期保存,加热或经福尔马林处理可灭活,所以高温消毒和2%戊二醛消毒可灭活。不同的型别引起不同的临床表现,根据侵犯的组织部位不同可分为:
1、黏膜低危型如HPV-6、11、13、32、34、40、42、43、44、53、54等与感染生殖器、肛门、口咽部、食道黏膜;
2、黏膜高危型HPV-16、18、30、31、33、35、39与宫颈癌、直肠癌、口腔癌、扁桃体癌等。
二、HPV感染途径
1、性传播途径;
2、密切接触;
3、间接接触:通过接触感染者的衣物、生活用品、用具等;
4、医源性感染:医务人员在治疗护理时防护不好,造成自身感染或通过医务人员传给患者;
5、母婴传播:是由婴儿通过孕妇产道的密切接触。
三、HPV基因分型检测的临床意义:
1、不同基因型的HPV具有不同的致病危险性。
2、对个体HPV基因分型检测的意义:宫颈病变风险提示,明确受检者是相同亚型的持续感染还是不同亚型的反复感染,有利于了解感染者的免疫情况和持续感染原因,从而给予正确的防治处理意见。
3、 由于在接种疫苗前进行HPV基因分型检测,可避免疫苗无效接种。
4、 给大规模人群HPV分型普查的流行病学研究提供依据;通过普查了解掌握不同型
别HPV感染区域性分布特征。
四、宫颈癌筛查对象:
21岁以上有性生活史或有三年以上性生活史的任何妇女。
五、样本采集:
1、尿道分泌物:在无菌条件下,用棉拭子伸入尿道内,旋转数周并停留片刻后取出;
2、宫颈脱落细胞:在无菌条件下,用宫颈刷伸入宫颈管内2cm,旋转数周并停留片刻后取出;
六、常见型别
1、:与子宫颈良性乳头瘤样病变及尖锐湿疣有关;常见型别:6,11型等;
2、高危型HPV:多见于宫颈癌中;常见型别:16,18,33,52,58型等;
七、收费:320元/次
第二篇:人乳头瘤病毒感染是宫颈癌的主要致病原因之一多数宫颈...
检验科开展HPV分型(21个型)检测
人乳头瘤病毒感染是宫颈癌的主要致病原因之一。多数宫颈癌标本中可检测到HPV病毒
基因组或基因片段。迄今,已发现110余种HPV,其中20余种与人类的宫颈癌相关,并至少有7个基因型在临床上很重要,即6、11、18、31、33、35型。其中,6、11型主要与尖锐湿疣有关,称为低危型;31、33、35与介于良性病变及恶性病变之间的损伤有关,称为中间型;16、18型与宫颈癌有关,称为高危型。HPV感染宿主细胞后,可以两种形式存在于宿主细胞中:即细胞染色体的整合状态和染色体的游离状态。宫颈癌细胞中的16、18型DNA绝大部分呈整合状态,在浸润性宫颈癌中,则以整合和游离状态共存。
在生殖道病灶中的人乳头瘤病毒(HPV-DNA),对宿主、组织和细胞有高度的特异性。他
们引起生殖道的良性和恶性增生性疾病。它们属于早期转录基因组区域,具有重要的调控作用。其中HPV-16型常引起宫颈鳞癌,HPV-18常引起宫颈腺癌。
PCR技术用于人乳头瘤病毒DNA 的检测,是目前HPV-DNA主要的检测方法,灵敏度较高,
本院检验科PCR室于20xx年9月1日获得了卫生部颁发的临床基因检测许可证。利用凯普导流杂交技术进行HPV分型检测,对宫颈肿瘤的初筛、轻微异常和不确定宫颈涂片(如ASCUS)的筛选分流、判断宫颈病变可否治愈、是否退出筛查、宫颈上皮内高度病变和癌症治疗后的监测有很大价值。
标本采集:
(1)宫颈标本:病人仰卧于检查床上,由医生以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈,然后使
用专用的HPV采样刷置于宫颈口采集标本;(最好在取样前先用棉签擦去宫颈分泌物),将专用宫颈刷置于宫颈口,轻轻搓动宫颈刷使其顺时针旋转5圈;慢慢取出宫颈刷,将其放入标有病人编号的取样管中,取样管内已加有专用细胞保存液,折断其刷头入管中,拧紧瓶盖。样本一经采集,则应尽可能快的送至检测实验室;如若不能马上送检样本,于4℃保存,在2个星期之内进行检测。
(2)疣体样本 :使用专用手术剪刀,剪下疣体组织放入0.5ML细胞保存液(或无菌生
理盐水)中。或者使用棉拭子反复摩擦疣体直至疣体出血,然后将棉拭子放入0.5ML细胞保存液中,密闭送检。
(3)男性尿道样本:使用细小的尿道拭子,插入男性尿道2-4CM,然后捻动尿道拭子,
最后将尿道拭子放入0.5ML的细胞保存液中,密闭送检。
(4)女性尿道样本:首先使用无菌生理盐水棉球洗净尿道口,再用棉拭子插入尿道约
2CM,然后捻动拭子,最后将拭子放入0.5ML的细胞保存液中,密闭送检。采集尿道样本时,受检者必须在采集前2个小时禁止小便。
项目信息:HPV分型检测,代码250403003-27,收费320元/次。
相关背景资料:
子宫颈癌是妇科恶性肿瘤之一,发病率在女性恶性肿瘤中居第二位,仅次于乳腺癌,严重
威胁女性生命。据统计,我国每年有10万新发病例,每年约2万人死于宫颈癌。近年来,子宫
颈癌病因学有了突破性进展,种种资料显示,子宫颈癌的致癌原因是感染人乳头瘤病毒(HPV)。
HPV是一组双股DNA病毒,目前确定的HPV类型有110余种。有关宫颈癌的病因学研究
表明,100%的子宫颈癌患者的高危型HPV感染为阳性。
宫颈癌是目前人类所有癌症中唯一病因明确,可以预防、可以治疗、治愈的癌症。要控制
和减少宫颈癌的发生,关键是预防和消除HPV感染。当前筛查是主要手段。筛查对象为有三年以上性行为,或21岁以上有性行为的妇女。起始年龄:经济发达地区为25~30岁,经济欠发达地区为35~40岁,高危人群的起始年龄应相应提前,65岁以上危险性极低。
宫颈癌筛查方法有多种:1、肉眼观察法(VIA),此法对筛查绝经后的妇女很少有效,灵
敏度和特异度均较低,VIA筛出的病例大部分是浸润性癌和早期癌而非癌前病变。2、传统巴氏细胞学涂片,此法为降低宫颈癌危害作出了巨大贡献,但受取材方法、涂片制作、染色技 1
检验科开展HPV分型(21个型)检测
巧、阅片水平等因素影响,准确度较低,结果不能重复。3、阴道镜检查法,阴道镜可发现肉眼看不见的亚临床病变,并在可疑病变处定位活检,可以做到早期诊断。但阴道镜的敏感度和特异度均较低,尤其是特异度,不宜作为筛查的方法。4、薄层液基细胞学技术,液基细胞学检查改变了原有的取材方法,提高了样本的收集率并使细胞均匀、单层分布在玻片上,异常细胞容易被发现,明显提高了发现低度(CINⅠ级)和高度病变(CINⅡ--Ⅲ级和原位癌)的敏感度,从而提高阳性率和诊断的准确率。5、HPV分型检测,检测方法有斑点印迹法,荧光原位杂交法,Southern杂交法,多聚合酶链反应(PCR)法,和杂交捕获法等。
国家卫生部委托中国癌症研究学会,组织全国20余位妇科、肿瘤和病理专家,于20xx年制定了三套宫颈癌筛查方案,在中国不同条件地区使用,其中首选方案是“高危HPV检测+液基细胞学检查”。薄层液基细胞学检测和HPV分型检测均为阴性者,阴性预测值可达99—100%,可将筛查间隔延长到8-10年,HPV-DNA检测+薄层液基细胞学检查是宫颈癌最可靠和最有效的筛查方法。
大量研究结果显示人乳头瘤病毒(HPV)是宫颈癌的主要病因,研究发现99%以上的宫颈癌存在HPV感染。HPV DNA检测能大大改进目前进行的宫颈癌和宫颈上皮内瘤变中细胞学筛查的有效性。目前被鉴定出的HPV类型已有100种以上,依其致病性不同将其分为高危和低危两大类,高危型HPV如HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等,与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的发生相关;低危型HPV如HPV6、11、42、43、44等,常引起生殖道湿疣等良性病变。人们已把目光聚焦在高危型HPV DNA 的检测上,并用于对宫颈上皮内瘤变筛查。
高危型HPV DNA检测可有效地、极大地减少细胞学检查的假阴性结果。传统的宫颈巴氏涂片检查存在一定比例的假阴性结果,通常达10%~20%甚至更高,以致于造成对CIN Ⅲ及宫颈癌的漏诊。杂交捕获法对高危型HPV检测的阴性预测值达99.7%,可减低或消除由于巴氏涂片假阴性所造成的漏诊。当HPV检测阳性而细胞学涂片正常的妇女,不能被认为是假阳性,再次阅片时可发现5%~7%有细胞学涂片异常。荷兰的资料显示,从这组人群中有10%在4年内发展为CINⅢ,HPV检测可预测CIN 发病风险。
作为对细胞学检查提示不典型鳞状细胞(ASCUS)和低度鳞状上皮内病变(LSIL) 的随访分流,减少阴道镜检查及病理活检率。在宫颈细胞学检查中存在不确定结果,如ASCUS,大量的研究结果显示ASCUS可能是反应性变化,也可能隐藏着CIN,对ASCUS 患者应4~6月后重复细胞学检查,连续3次正常后改为每年定期复查,若细胞学结果阳性立即阴道镜和病理活检。这其中大约只有10%~20%转变成CINⅢ,大部分妇女在复查等待中承受着严重的焦虑及精神压力。美国一项涉及3488例ASCUS的多中心随机试验结果显示,对于ASCUS 的妇女,杂交捕获试验是一种很好的选择,与单纯重复细胞学检查方法比较,对于发现CINⅢ或宫颈癌有更高的敏感度和特异性,其检出CIN Ⅲ的敏感度比单纯巴氏涂片复查法要高10%~15%,且特异性没有降低,这将大大减少复查巴氏涂片和阴道镜检查的数量。
HPV DNA检测与细胞学检查联合进行宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的筛查,其筛查效率高于单独使用细胞学检查。研究结果提示联合两种方法的检测率几乎可达100 % ,且可延长筛查间隔,因为从HPV感染发展为CIN或宫颈癌需经历约5~10年。20xx年卫生部疾病控制司委托中国癌症研究基金会组织有关专家制定的《宫颈癌筛查及早诊早治指南》建议,有3年以上性行为或21岁以上有性行为的妇女应每年做1次细胞学检查,连续两次细胞学正常可改至3年后复查;连续2次HPV检测和细胞学正常可延至5~8年后复查。
作为宫颈病变治疗后的随访指标。由于HPV是CIN的主要病因,利用HPV DNA监测治疗效果、评价不同治疗方法是可行的。研究表明子宫颈锥切后应用HPV DNA检测可预测残余CIN,并具有很高的灵敏度和阴性预测值,术后6月的HPV阳性率比细胞学异常结果更具预测价值。
检 验 科
2008.3.1
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