实验一 单晶劳埃照相法、德拜照相法、

衍射仪结构介绍及衍射花样分析

一、实验目的

通过实验, 加深单晶(劳埃照相法)、多晶(德拜照相法、衍射仪法)衍射花样的形成原理的理解;了解单晶劳埃照相机、德拜照相机、衍射仪的结构；掌握德拜照相法线条位置的误差以及粉末相的初步处理等基本问题的理解； 掌握单相立方系物质粉末相的计算。

二、衍射花样形成原理

1、 劳埃照相法

1）实验方法：

连续X射线照射固定不动的单晶体.平底片记录衍射花样.分为透射、背射法.

注:单晶固定不动,入射方向一定,即晶体内各晶面与入射线夹角固定, 则各晶面都有自己特定波长2dHKLsin???满足衍射,而在连续线中有一波长与之对应.

2)衍射花样：

底片一斑点表示晶体一组平行晶面产生的衍射线.

透射: 同一晶带晶面的衍射斑点分布在过底片中心的椭圆上.

背射: 同一晶带晶面的衍射斑点分布在一双曲线上

3）用途:单晶体取向测定及晶体对称性研究.测定未知晶体形状.

2.（粉末）德拜照相法

1） 实验方法

方法: 单色(特征) X射线照射固定不动的粉末多晶体.

2） 衍射花样的形成

多晶由取向混乱的单晶构成,每一单晶都有一相同的晶面(HKL),在空间占有不同方位,能

参与衍射的(HKL)所在位置为满足衍射的(HKL)绕入射方向旋转一周所处的瞬时位置.产生的衍射线为顶角4?的圆锥表面。

3） 德拜照相机

实验中应者重了解德拜相机的构造、试样的制备、底片的安装及摄照规程的选择。

（1）德拜相机的构造

德拜相机为圆筒形暗盒，直径一般为57.3mm或114.6mm。下图为相机的构造示意图。入射线从光阑中心线进入，照射到试样后的透射线进入承光管。从承光管底部可以看到X射线光点和试样的暗影

（2）底片的安装

底片安装可采用正装法（X射线从底边接口入射）、倒装法（X射线从底边中心点入射）、偏装法（X射线从底边其他点入射），所得到的衍射花样如下图所示。

（3）试样的制备

粉末试样粒度在微米级，过0.045mm的筛孔，与树脂混匀后粘在0.05~0.08mm直径的玻璃片上或装入胶管中，试样直径0.2~1mm，长10~15mm。

（4）摄照规程的选择

粉末相通过在Ｘ射线晶体分析仪上摄照。该仪器包括Ｘ射线管、高压发生器及控制线路等几部分。启

动分析仪的一般程序为：打开冷却水，接触电源，按低压钮，预热3min后按高压钮，根据Ｘ射线管的种类、功率以及摄照的要求，调节管电压和管电流到预设数值。分析仪的关闭过程与启动相反，一般在切断高压后10min关闭冷却水。

4）、德拜相的分析及应用

利用德拜相可对测试材料进行晶体结构分析、物相鉴定。可以分为以下几个步骤。

1) 对弧标号

2) 测量有效周长C0?A?B

3) 测量并计算弧间距，并2L0=2L外缘—2? (?圆柱试样半径)

2L01802L0?00???.90,,,当2??90?4R?C0?4) 计算θ。? ''???2L0180?2L0.900,,??900??,,当2??900

?4R?C0?

5）根据sin2?1:sin?2:sin?3:…………………… 22

??1:2:3:4:5:6:8:9....,简单立方

???1:2:3:4:5:6:7:8....,体心立方?整数比,立方晶系??=??3:4:8:11.....,面心立方

??2:3:4:8:9:10:11.....,底心立方??

??非整数比,非立方晶系

6）计算d

7）估计各条线的相对强度

8）查卡片，确定物相。

9）标注衍射线指数

10）计算点阵参数

3.衍射仪

1）. 衍射仪的构造

由X射线管、测角仪、辐射探测器、计数测量系统、自动控制系统、记录输出单元等.其中测角仪是核心部分

2）测角仪构造

（1）构造

利用X射线发出的发散线束,照射轴中心的平板试样,试样可绕垂直于图面的轴O旋转.接收狭缝与计数管相连,安装在可绕O轴旋转的支架上,试样绕O旋转?角,计数管旋转2?.这样,当一定发散的X射线照射试样,试样旋转到某一角度时,其内一晶面满足布拉格条件,产生衍射线聚焦于测角仪圆周上, , 被同时旋转2?的接收狭缝F接收计数.试样由低角度向高角度以一定速度旋转时,可探测各衍射面的衍射强度,绘制2??I曲线,即衍射谱(图).

（2）衍射几何

衍射几何

① 满足布拉格方程: 试样置于测角仪中心,绕中心轴连续转动,使瞬时dHKL、?、?三者满

足布拉格关系, (HKL)产生衍射线.试样由低角度到高角度(理论上: 2??0??180)转动,使所有能参与衍射的晶面衍射.

注: 多晶体中晶粒取向混乱,在入射线照射到试样表面的大量晶粒时,只有那些平行于试样表面、满足布拉格方程的?HKL00?晶面产生衍射线,而且反射是瞬时的.而其它?HKL?晶面虽满足布拉格方程,但与试样表面不平行,产生的衍射线不能会聚于狭缝光阑而接收.可见衍射仪接收的衍射线强度小于德拜法.

②??2?连动: 试样表面处在入射线和衍射线的反射位置上,确保狭缝光阑、探测器处于衍射方向,接收相应晶面的衍射线.

③聚集圆: 入射线管焦斑S、被照射的试样表面MON、反射线的会聚点F(狭缝光阑)位于同一聚集圆上,确保反射线在F点聚焦接收.

（3）.试样

根据聚集圆原理,试样应为与圆相吻的弧面,实际上为制造方便,采用平板试样.将粉末试样放在20mm×15mm×2mm的样品框中,填平、压紧、刮平.粉末颗粒大小适中,过粗难压紧成型,且照射的颗粒少,衍射强度不稳定.过细使衍射线宽化,并妨碍弱线的出现。

(4).光学布置

K发散狭缝、L防散射狭缝、F接收狭缝的作用是限制射线的水平发散度.L另一作用是排斥不来自试样的辐射.S1、S2为梭拉狭缝,由一组(间距0.43mm)平行的金属片构成.其作用是限制垂直方向的发散度.

(5)探测器----闪烁计数器

利用X射线激发磷光体发射可见光.一个光子照射到铊活化的碘化钠单晶体,产生一闪光,闪光碰撞光敏阴极材料,产生很多电子,其中每一电子经光电倍增管的10联极(每个联极递增100V正电压),产生106—107个电子,结果在联极的末端 图1－10闪烁计数管

产生一脉冲电流,经外电路转化为电压脉冲。

（6）计数测量

功能是对电压脉冲信号进行甄别、计数

1) 定标器(间歇式):

①定时计数法:设定时间内,接收电压脉冲数,求出单位时间光子数(CPS)

②定数计时法:设定脉冲数,测定计数时间,求出单位时间光子数(CPS).

2）计数率仪(连续式)

直接、连续地测量单位时间内平均脉冲数,即计数计时同时进行

（7）衍射仪谱线

图4－12 连续扫描衍射花样

（8）应用

物相分析、晶体结构分析、点阵常数精确测定、宏观应力、晶粒大小 、织构分析等。

为使每个学生有机会独立练习测量计算，实验室可将粉末相印成照片，每人一张。用迷尺测量，精度稍差，但已可以满足一般物相分析要求。为初步联系物相鉴定，实验室需准备二三十张为一套的卡片（其中含有待鉴定的物质），学生只是通过简单的对照鉴别（借助索引进行物相检索的方法将在实验二练习）。学生事先要复习有关章节，实验中要认真细致测量弧对的距离、有效周长估计Ｉ系列，鉴定物相，对衍射线进行指标化（亦只是对照卡片标定），并计算物质的点阵参数。 三、实验内容与安排 1， 实验内容

1）教师介绍单晶(劳埃照相法)、多晶(德拜照相法、衍射仪法)衍射花样的形成原理；单晶劳埃照相机、德拜照相机、衍射仪的结构概貌。

2）教师介绍德拜粉末试样的制备、相机的构造、试样及底片的安装。

3）教师示范德拜照相机操作，组织学生讨论摄照某种物质粉末相时应选用的Ｘ射线管阳极、滤片、管电压、管电流及曝光参数。

4） 单相物质X射线粉末相计算及分析。

已有采用FeKα照射一单相物质，圆柱试样直径2ρ=0.8mm,用不对称底片安装法，Mn滤片，管电压30kv,管电流12mA,相机直径57.3mm.测得的相机圆筒有效周长C0=A+B=178mm.

测出的德拜相圆弧对外缘间距，目测衍射线强度数据如下：

目的：利用上述数据，确定物相。

五、对实验报告的要求 １） 实验目的 ２） 实验原理

简述单晶(劳埃照相法)、多晶(德拜照相法、衍射仪法)衍射花样的形成原理。 ３） 实验方法及步骤

简述劳埃照相机、德拜照相机、衍射仪的构造。实验方法、步骤及用途。 ４） 实验数据分析

根据德拜照相法，得到的某一单相物质的衍射数据，列出计算过程，确定物相。。 ５） 实验体会与疑问。

第二篇：食品化学与分实验报告资料(分析部分)

实验一单宁含量的测定

单宁又称鞣质（Tannins），是一类有机酚类复杂化合物的总称，广泛存在于植物组织中。在蔬菜中含量较少，但在果实中普遍存在。

用途：在工业上除用作鞣革外，还可制造墨水、颜料、显影剂等。在医疗上广泛用作止血药，也是治疗烫伤的良好药物。由于单宁的水溶液可与蛋白质、生物碱、重金属盐生成水不溶性沉淀，因此可用作生物碱及重金属中毒的解毒剂。

性质：易溶于水

具有收敛性涩味，对果蔬及其制品的风味起重要作用，有强化酸味的作用。

与白明胶等蛋白质类物质作用，生成沉淀或浑浊液，可在0.01%的溶液中检出单

宁，可用来澄清果汁

遇某些金属即发生颜色反应，如遇铁变黑，与锡长时间加热呈玫瑰红色，遇碱则变蓝。

方法一    比色法

一、实验原理

样品中的单宁在碱性溶液中将磷钨钼酸还原，生成深蓝色化合物，比色测定

二、试剂和器材

标准单宁酸溶液（0.5mg/mL)：准确称取标准单宁酸50mg，溶解后用水稀释至100 mL,用时现配。

F-D(Folin-Donis)试剂：称取钨酸钠50g，磷钼酸10g，置于500 mL锥形瓶中，加375mL水溶解，再加磷酸25mL，连接冷凝管，在沸水浴上加热回流2h，冷却后用水稀释至500mL。

60g/L偏磷酸溶液

1mol/L碳酸钠溶液：称取无水碳酸钠53g，加水溶解并稀释至500mL。

95%和75%的乙醇溶液

组织捣碎机或研钵，分光光度计

三、实验步骤

1、  标准曲线的绘制

准确吸取标准单宁酸溶液0、0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL于50 mL容量瓶中，各加入75%乙醇1.7 mL、60g/L偏磷酸溶液0.1 mL、水25 mL、F-D试剂2.5 mL、1mol/L碳酸钠溶液10 mL，剧烈振摇，以水稀释至刻度，充分混合。于30℃恒温箱中放置1.5h，用分光光光度计在波长680nm处测定吸光度，并绘制标准曲线。

2、  样品测定

果实去皮切碎后，迅速称取50g（如分析罐头食品则称取100g），加入95%乙醇50 mL、60g/L偏磷酸溶液50 mL、水50mL，置于高速组织捣碎机中打浆1min(或在研钵中研磨成浆状)。称取匀浆液20g于100 mL容量瓶中，加入乙醇（75%）40 mL，在沸水浴中加热20min，冷却后用乙醇（75%）稀释至刻度。充分混合，以慢速定量滤纸过滤，弃去初滤液。

吸取上述滤液2 mL，置于已盛有25 mL水、2.5 mL F-D试剂的50 mL容量瓶中，然后加入1mol/L碳酸钠溶液10 mL，剧烈振摇，以水稀释至刻度，充分摇匀（此时溶液的蓝色逐渐产生）。同时做空白实验。

于30℃恒温箱中放置1.5h后，用分光光光度计在波长680nm处，乙试剂空白调零，测定吸光度。

3、  结果计算

X=（C×10^-6）/( m×K)×100%

式中X——样品中单宁的质量分数，%；

C——比色用样品溶液中单宁的含量（由标准曲线查得），μg；

m——样品质量，g；

K——稀释倍数，如按上述方法取样50g时K=（20/200）×（2/200）=1/500

四、注意事项

1、样品处理时要尽快进行，以免单宁氧化而造成误差

2、维生素C也能与F-D试剂作用产生蓝色，因此当样品中含有维生素C时需进行校正，1mg维生素C相当于0.8mg单宁酸。

方法二    EDTA络合滴定法

一、实验原理

根据单宁可与重金属离子形成络合物沉淀的性质，在样品提取液中加入过量的标准Zn(Ac)₂溶液，待反应完全后，再用EDTA标准溶液滴定剩余的Zn(Ac)₂，根据EDTA标准溶液的消耗量，可计算出样品中单宁的含量。

二、试剂和器材

1.000mol/L醋酸锌标准溶液：准确称取Zn(Ac)₂·2H₂O 21.95g，用水溶解后定容至100 mL。

0.0500mol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA）标准溶液：准确称取EDTA9.306g，溶解于水，用水稀释至500 mL。必要时进行标定。

pH=10的NH₃-NH₄Cl缓冲溶液：称取54gNH₄Cl，加水溶解后加入浓氨水350 mL，用水定容至1000 mL。

铬黑T指示剂：称取0.5g铬黑T，溶于10 mL pH=10的NH₃-NH₄Cl缓冲溶液中，用乙醇（95%）定容至100 mL。

三、实验步骤

1、  样品处理：称取切碎混匀的样品5~10g,置于研钵中，加入少许石英砂研磨成浆状（干样品经磨碎过筛后，准确称取1~2g），转入150 mL锥形瓶中，用50 mL水分多次洗净研钵，洗液一并转入锥形瓶中，振动提取10~15min。

2、  络合沉淀：在100 mL容量瓶中，准确加入醋酸锌标准溶液5 mL浓氨水3.5mL，摇匀（开始有白色沉淀产生，摇动使沉淀溶解）。慢慢将提取物转入容量瓶中，不断振摇，在35℃水浴中保温20~30min。冷却，用水定容至100 mL，充分混匀，静置，过滤（初滤液弃去）。

3、  滴定：准确吸取滤液10 mL，置于150 mL锥形瓶中。加水40 mL、NH₃-NH₄Cl缓冲溶液12.5 mL、铬黑T指示剂10滴，混匀。用0.0500mol/L的EDTA标准溶液滴定，溶液由酒红色变为纯蓝色即为终点。

4、  结果计算

X=(C₁V₁－10C₂V₂)×0.1556/m×100

式中 X——样品中单宁的质量分数，%；

C₁——醋酸锌标准溶液浓度，mol/L；

V₁——吸取醋酸锌标准溶液的体积，mL；

C₂——EDTA标准溶液浓度，mol/L；

V₂——滴定时消耗EDTA标准溶液的体积，mL；

0.1556——由实验得出的比例常数，g/mmol

M——样品质量，g；

10——分取倍数，即样品络合沉淀后定容至100mL，吸取其中的1/10进行滴定。

四、注意事项

1、单宁遇Fe³⁺会发生颜色反应，因此处理样品时不能与铁器接触，切碎样品应采用不锈钢刀

2、单宁容易被氧化，样品处理后应立即进行测定。同时要注意加热温度，加热过程中要间歇摇动数次，以使反应完全。

方法三    高锰酸钾滴定法

一、实验原理

单宁为一强还原性物质，极易被氧化；本实验以高锰酸钾为氧化剂，根据单宁被活性炭吸附前后的氧化值之差计算单宁物质的含量。靛红能被高锰酸钾氧化从蓝变黄从而指示终点。

二、试剂和器材

柿子、香蕉、苹果等；水浴锅、电子天平、量筒、容量瓶（1000 mL）、移液管（10 mL、5 mL）、研钵、漏斗、滤纸、烧杯。

粉状活性炭

0.01 mol/L高锰酸钾溶液：将1.58 g高锰酸钾溶入沸水中，移入1000 mL容量瓶，冷却后定容至刻度。用草酸标定后，求出高锰酸钾的摩尔浓度。

0.1%靛红溶液：称取靛红1 g，溶入50 mL浓硫酸中，如难溶，可在水浴中加热到60℃，保持4 h。然后稀释至1000 mL。

三、实验步骤

取样品5~10 g放于研钵中磨成匀浆，用水稀释定容到100 mL过滤，吸取滤液5 mL放于10mL三角瓶，准确加入靛红5 mL，蒸馏水10 mL，用高锰酸钾滴定至金黄色

另取样液5 mL加入活性炭2~3 g置水浴上加热搅拌10 min，趁热过滤，并用热水洗数次，于滤液中准确加入靛红5 mL，蒸馏水10 mL，用高锰酸钾滴定至金黄色

按下式计算

单宁%= N×（V₁－V₂）×0.0416/m×100

式中 N——高锰酸钾摩尔浓度

V₁——滴定样品所消耗高锰酸钾溶液的毫升数

V₂——样品吸收单宁后所消耗高锰酸钾溶液的毫升数

m——5 mL样液相当于样品的质量

0.0416——单宁的毫摩尔

实验二淀粉糊化度的测定

一、实验原理

对于淀粉性食品，糊化度的高低是衡量其生熟程度的指标，而糊化度的高低可用淀粉的α-化程度来表示。淀粉在糖化酶的作用下可转化为葡萄糖，且其糊化度越大，α-化程度越高，转化生成的葡萄糖的量就越多。用碘量法测定转化葡萄糖的含量，根据滴定结果计算α-化程度。

C₆H₁₂O₆＋I₂+NaOH→ C₆H₁₂O₇ ＋NaI+H₂O

I₂(过量部分) +2NaOH = NaOI＋NaI+H₂O

NaOI＋NaI+2HCl =NaCl+ I₂+H₂O

I₂+Na₂S₂O₃ = NaI+ Na₂S₄O₆

二、实验材料与试剂

膨化食品或方便米饭、方便面条等

糖化酶:11-12波美度的生麦芽汁30-40ml 稀释至100ml；或用β－淀粉酶

0.1M的硫代硫酸钠标准溶液

0.1M的碘标准溶液：1.28克碘和3克碘化钾溶解后移入100毫升棕色容量瓶中，定容至刻度，置于避光处待用

10％硫酸溶液

1M盐酸溶液

0.1M氢氧化钠溶液

三、实验步骤

1、样品处理：取样品20g，加入200ml99%的乙醇，混匀，使之迅速脱水，1min后抽滤，生成的沉淀用加入200ml99%的乙醇反复洗涤，脱水干燥后放在通风橱中吹干，用研钵将其粉碎，然后放在索氏抽提器中脱脂，之后干燥。

2、取3个碘量瓶A,B,C,分别称取脱脂粉碎后经60目筛的样品1.00克两份，置于A,B瓶中，以C瓶做空白对照。

3、分别加入50ml水，并将A瓶放在电炉上微沸20min，然后冷却至室温。

4、向各瓶加入稀释的糖化酶液2ml，摇匀后一起置于50℃恒温水浴中保温1h。

5、取出，立即向每瓶中加入1M盐酸溶液2ml，终止糖化。

6、将各三角瓶内反应物移入容量瓶定容至100ml后过滤。

7、分别取滤液10 ml置于250 ml碘量瓶中，准确加入0.1M的碘标准溶液5ml及0.1M氢氧化钠溶液18ml，盖严放置15min。

8、打开瓶塞，迅速加入10％硫酸溶液2 ml，以0.1M的硫代硫酸钠标准溶液滴定至无色，记录所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的毫升数。

四、计算：

α-化程度=(V₀－V₂)/(V₀－V₁)×100%

    V₀---滴定空白溶液所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的毫升数

    V₁---滴定糊化样品所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的毫升数

    V₂---滴定未糊化样品所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的毫升数

五、注意事项：

1、加酶糖化时的条件，如加酶量、糖化温度与时间等对测定结果均有影响，操作时应适当控制。

2、一般膨化食品的α-化程度为98％-99％，方便面为86％，速溶代乳粉为90％～92％，生淀粉为15％。

六、试剂配制

1、0.1M硫代硫酸钠标准溶液（500毫升）：26克五水硫代硫酸钠或16克无水硫代硫酸钠溶于1000毫升纯水中，煮沸、冷却，一周后过滤、标定即可使用。

2、0.1M碘标准溶液（600毫升）：先将3克碘化钾溶解于约5毫升水中，然后一边搅拌一边加入1.28克碘，全部溶解后移入100毫升容量瓶中定容至刻度，棕色瓶盛装，避光保存。

3、糖化酶液（300毫升）：取啤酒麦芽，粉碎，按料水比1：3加水在常温下浸提25分钟，用脱脂棉过滤。或者称取试剂酶5g，用100毫升蒸馏水溶解制得5%的淀粉酶。

4、10％的硫酸（300毫升）：将浓硫酸10ml缓缓注入蒸馏水至100ml,冷却，摇匀。

5、1M盐酸（500毫升）：45毫升浓盐酸注入500毫升纯水中，溶解混匀。

6、0.1M氢氧化钠：取4克氢氧化钠溶解于1000毫升水中。

7、1%淀粉溶液：取10g可溶性淀粉，加少许水调成糊，边搅拌边注入1000ml沸水，微沸2min，静置，取上层溶液使用。

实验三  氨基酸总量(氨态氮)的测定

——双指示剂甲醛滴定法：

一、目的

了解掌握双指示剂甲醛滴定法测氨基酸总量的方法与原理：

二、原理：

氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH基显示酸性，又含有-NH₂基显示碱性。由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时，-NH₂与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基。

三、试剂：

(1)40％中性甲醛溶液，以百里酚酞为指示剂，用1N NaOH溶液中和。

(2)0.1％百里酚酞乙醇溶液。

(3)0.1 N氢氧化钠标准溶液。

(4)0.1％中性红(50％乙醇溶液)

四、操作步骤：

取10ml样品加4~5g活性炭电炉加热10min直至样品接近无色，过滤。用热蒸馏水冲洗滤液定容至100ml，混匀。

取上述滤液25ml两份，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入百里酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100N NaOH标准溶液滴定至淡蓝色。

五、计算：

N(V₂-V₁)×0.014

氨基酸态氮(％)=-------------------×100

W

式中：

V₂：用百里酚酞为指示剂时标准碱液消耗量(毫升)

V₁：用中性红作指示剂时碱液的消耗量(m1)。

N：标准碱液当量浓度。

W：样品的重量(克)。．

0.014：氮的毫克当量。

六、注意事项：

测定时样品的颜色较深，应加活性炭脱色之后再滴定．

实验四   还原糖的测定

一 实验内容

      利用直接滴定法测定还原糖的含量，

二 实验目的

1．领会直接滴定法测定还原糖的基本原理

2．掌握直接滴定法测定还原糖的方法

三 实验原理

?    样品经除去蛋白质等杂质后，在加热条件下用样液直接滴定—定量的碱性铜盐溶液，样液中的还原糖将二价铜还原为氧化亚铜。以次甲基蓝为指示剂，在滴定终点时稍过量的还原糖将次甲基蓝氧化为无色，根据样液消耗体积可计算出还原糖含量。

四 仪器及试剂

1  仪器

  (1)恒温水浴

  (2)粗天平

  (3)碱式滴定管

  (4)250mL锥形瓶

  (5)250mL容量瓶，1 00mL容量瓶，

2  试剂

  ⑴ 碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜(CuSO₄·5H₂O)及0.05g次甲基蓝溶于水中并稀释到1000 mL。

  ⑵ 碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后用水稀释到1000mL。

  ⑶ 乙酸锌溶液：称取2l.9g乙酸锌〔Zn(CH₃COO)₂·2H₂O〕入加3mL冰醋酸加水溶解并稀释至100mL。

  ⑷ 10.6％亚铁氰化钾溶液。

⑸ 0.1%葡萄糖标准溶液

       称取置105℃烘干至恒重的纯蒸糖1.9000g，用蒸馏水溶解移入1000mL容量瓶中，定容后混匀，取此蔗糖溶液50mL于100mL容量瓶中，加6mol/LHCl 15mL，在68～70℃水浴中加热15分钟  取出于流动水下迅速冷却，加甲基红指示剂2滴，用20％NaOH中和至中性，加水至刻度，摇匀。此溶液每mL含转化糖1mg。（称取置105℃烘干至恒重的葡萄糖1.0g，用蒸馏水溶解移入1000mL容量瓶中，定容后混匀，此溶液每mL含葡萄糖1mg。）

五 测定方法

1  样品处理

    把样品用组织捣碎并混合均匀用小烧杯称取适量样品，用适量蒸馏水转移到250mL容量瓶中，摇匀后慢慢加入5mL乙酸锌和5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀。静置30分钟，用干燥滤纸过滤  弃去初滤液  收集滤液备用。

2 水解

    吸取50mL上述滤液于100mL容量瓶中，加6mol/L  HCl 5mL在68～70℃水浴中加热15分钟冷却后加2滴甲基红指示剂用20％氢氧化钠中和至中性，加水至刻度，混匀。

3  碱性酒石酸铜溶液标定

    把0.1%葡萄糖标准溶液装满滴定管准确吸取酒石酸铜甲、乙液各5mL于250mL锥形瓶中加水10mL，加玻璃珠3粒。从滴定管放出约9mL标准转化糖溶液于锥形瓶中，加热锥形瓶使其在2分钟内沸腾，趁热以每2秒1滴的速度滴加转化糖液  直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗转化糖的总体积，平行操作三份，取其平均值计算出每10mL碱性酒石酸铜溶液相当于转化糖的质量(mg)。按下式计算碱性酒石酸铜溶液当量：

m₂=m₁×v                        （1）

式中：m₁ 一一1mL标准转化糖溶液含转化糖质量(mg)；

      m₂一一10mL碱性酒石酸铜溶液相当的转化糖质量(mg)；

       V ——消耗转化糖标准溶液的体积(ml)。

4  样品溶液预测

   　　 分别吸取碱性酒石酸铜溶液甲、乙液各5mL置于250mL锥形瓶中，加水10mL加玻璃珠3粒，加热锥形瓶使其在2分钟内沸腾。趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样液，须始终保持溶液的沸腾状态；待溶液篮色变浅时以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样品溶液消耗体积。

  5  样品溶液的测定

    　　吸取碱性酒石酸铜溶液甲乙液各5mL，置于250mL锥形瓶中加玻璃珠3粒  从滴定管中放出比预测时样液消耗总体积少1mL的样液，加热使其在2分钟内沸腾趁热以每2秒1滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点。记录样液消耗总体积．平形测定三次3次  取其平均值计算。

六 结果计算

 

式中：

     m ——样品重量g；

     m ₂——10mL碱性酒石酸铜溶液相当转化糖质量 m g

     V₁——滴定时消耗样品水解液的体积mL。

七  说明

  1  测定中滴定速度、加热时间、热源强度、锥形瓶规格等对测定结果影响较大，故测定条件应力求—致，平行实验样品液消耗量差别应不超过0.1mL。

  2  整个滴定过程应保持溶液沸腾，继滴时消耗样液量必须控制在在0.5～l.0mL，否则影响结果准确性。

  3  滴定到终点时指示剂被还原蓝色消失,稍放置后因接触空气中氧，指示剂又被氧化，重新变成蓝色。此时不应再滴定。

八     思考题

１试说明碱性酒石酸铜溶液中各组分的作用。

２分析哪些操作因素会造成测定误差。

实验五  总类胡萝卜素的测定

1．目的要求

了解类胡萝卜素的性质及测定原理，掌握类胡萝卜素的测定方法

2．方法原理

样品经过石油醚-丙酮（1∶0.5）混合溶液萃取，使之与非类胡萝卜素成分分离，在450nm波长下测定萃取溶液的吸光度，由阿侬公式可计算出总类胡萝卜素的含量。

3．主要实验仪器及材料

红辣椒粉；电子天平、分光光度计、分液漏斗、滤纸；石油醚、丙酮

4．实验步骤

取红辣椒粉2g置于带塞100mL锥形瓶，加入石油醚8mL，丙酮4mL，摇匀1min，静置15min，用滤纸将提取液滤入100mL三角瓶。按上述容量加入石油醚和丙酮提取15min，过滤同上，这样重复3~4次，滤入上述三角瓶中，将提取液一并移入分液漏斗，用水洗涤石油醚层，弃去水相，重复2~3次，将石油醚层定量转移50mL容量瓶中，以石油醚定容摇匀，置暗处供比色用。

测定：用1cm比色皿以石油醚作空白，在450nm下测吸光值（OD₄₅₀）

5．计算：

OD₄₅₀×V×f×1000

类胡萝卜素（mg/100g）=

w×2500×100

OD₄₅₀——样品在450nm波长下的吸光值

V——提取液体积（mL）

f——提取液在测定吸光值时的稀释倍数

2500——1%胡萝卜素在450nm下的消光系数

w——样品质量（g）

实验六  SO2残留量的测定

——盐酸副玫瑰苯胺比色法

一、实验原理

亚硫酸盐或二氧化硫，与四氯汞钠反应生成稳定的络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色物质，其色泽深浅与亚硫酸含量成正比，可比色测定。

二、实验试剂

1、      四氯汞钠吸收液：称取27.2g氯化高汞及11.9g氯化钠，定容至1000ml，过滤后备用。

2、   1.2%氨基磺酸铵溶液

3、      0.2%甲醛溶液：吸取0.55ml无聚合沉淀的36%甲醛溶液，加水定容至100ml

4、   淀粉指示剂

5、      盐酸副玫瑰苯胺溶液：称取0.1g盐酸副玫瑰苯胺于研钵中，加少量水研磨使溶解，定容至100ml。取出20ml，置于100ml容量瓶中，加6mol/L盐酸，充分摇匀后使溶液由红变黄。如不变黄再加上少量盐酸至出现黄色，用水定容至100ml。

6、   0.05%mol/L碘溶液：称取6.4g碘和17.5g碘化钾，加少量蒸馏水研磨，转入棕色小口瓶中，稀释至1000ml，存于暗处。

7、   0.1000mol/L Na₂S₂O₃标准溶液：称取50g硫代硫酸钠（Na₂S₂O₃·5H₂O），配制成2000ml，储存于棕色瓶中。

8、   SO₂标准溶液：称取0.5g亚硫酸氢钠，溶于200ml四氯汞钠吸收液中，放置过夜，上清液用定量滤纸过滤备用

标定：吸取10.0ml亚硫酸氢钠-四氯汞钠溶液于250ml碘量瓶中，加100ml水，准确加入20.00ml0.05mol/L碘溶液，5ml冰醋酸，摇匀，置暗处2min后，迅速以0.1000mol/L Na₂S₂O₃标准溶液滴定至淡黄色，加0.5ml淀粉指示剂呈蓝色，继续滴定至无色。另取100ml碘量瓶，准确加入20.0ml0.05mol/L碘溶液，5ml冰醋酸，按同一方法做试剂空白试验。

三、操作步骤

1、      样品处理：吸取5~10ml果蔬汁，移入100ml容量瓶中，以少量水稀释然后再加入四氯汞钠吸收液20ml，用水定容，必要时可过滤备用。

2、      标准曲线绘制：吸取二氧化硫标准使用液0.00ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml，分别加入25ml带塞的比色管中，加入四氯汞钠溶液体积达到10ml，然后各加入1ml1.2%氨基磺酸铵溶液，1ml0.2%甲醛溶液，1ml0.1%盐酸副玫瑰苯胺溶液，摇匀，静置20min，用1cm比色皿，以零号管作为空白，在波长550nm处测定吸光度，以SO₂含量为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

3、      样液的测定：吸取样品处理液0~5.00ml置于25ml带塞的比色管中，按照绘制标准曲线操作进行，并测出吸光度，从标准曲线上查得样品处理液的SO₂含量。

4、   计算          X＝(c×1000)/[m×(V/100）×1000×1000]

X——二氧化硫含量，g/kg；

c——测定时样品处理液SO₂含量，μg；

m——样品质量，g；

V——测定用样液体积，ml。