一、实验设计
二、实验报告
第二篇：果胶酶活性的测定方法
○谷化检测○
果胶酶活性的测定方法
□孙越
果胶是以原果胶、果胶和果胶酸三种不同形态存在果实组织中。未成熟的果实中的果胶物质大部分以原果胶的形式存在,不溶于水,与纤维素等将细胞与细胞紧紧地结合在一起,果实显得坚实脆硬。随着果实的成熟,原果胶在原果胶酶的作用下,分解成为果胶。果胶能溶于水;它与纤维素分解,进入果实细胞汁中。因此,细胞之间的结合松散,果实便显得松软,当果实进一步成熟时,果胶继续分解成为果胶酸和甲醇,胶酶的作用,果胶酸没有粘性,,影响着贮藏效果,。
称,。
11果胶聚半乳糖醛酸酶(PG)能分解半乳糖醛酸中Α-1,4键,其又可按作用方式不同分为:
(1)内聚半乳糖醛酸酶(endoPG)从分子内部无规则地截断Α-1,4键,可使果胶或果胶酸的粘度迅速下降;
(2)外聚半乳糖醛酸酶(exoPG)从分子末端逐个
式中:T0——含果胶的柠檬酸盐缓冲液流出粘度
汁小球时间(秒);
TΑ——柠檬酸盐缓冲液流出粘度计小球时间(秒);
T—,(秒)。
,,50%时对应酶作用时间
(T)50%的酶量
为10个活力单位,即活力单位=(3600)T50%?
此法用来测定果胶甲酯水解酶,聚甲基半乳糖醛
酸酶和半乳糖醛酸酶的复合酶活性,比较准确,但设备要求高,且较昂贵,操作也比较复杂。
(二)纳尔逊——索模吉法 这是NoLso.N,1994
年提出的方法
其试剂由硫酸铜、碳酸钠和砷钼酸等组成。葡萄糖在碱性条件下能使二价铜离子还原成低价的红色氧化亚铜,再以砷钼酸溶解并形成蓝色化合物,蓝色深浅与糖浓度有线性关系,所以可以用比色定量测定。
Cu2++C6H12O6
OH-加热
切断Α-1,4键,生成半乳糖醛酸,粘度下降不明显。
2聚用甲基半乳糖醛酶(PMG),能水解甲基半乳糖醛酸基中的Α-1,4键,其又可分为:
(1)内聚甲基半乳糖醛酸酶(eudoPMG)
(2)外聚甲基半乳糖醛酸酶(exoPMG)
31果胶甲酯水解酶(PE),可使果胶中的甲酯水解
6H12O7+Cu2O↓(红)
Cu2O+砷钼酸→蓝色化合物
此法用于测定果胶酶中外聚半乳糖醛酸酶的活性,有一定的局限性,常和粘度法一同使测果胶酶活力。
(三)脱胶作用时间法 这是19xx年詹高越首先
生成果胶酸。
41原果胶酶,使不溶性原果胶生成可溶性果胶。
提出来的。
在100ml三角瓶中加入含1%果胶10ml溶液,
PH412柠檬酸缓冲液9ml。30℃水浴中保温2分钟,加
贮藏过程中起作用的果胶酶主要是PG,所多用
PG的活力表示果胶酶的活力。现就果胶酶活性的测定
方法谈一谈。
(一)粘度法
取5ml含1%果胶的011mol?lPH为412的柠檬酸盐缓冲液于乌贝路粘度计中,在30℃恒温水浴中保温10分钟加入1ml酶液,继续保温,在不同时间测其流出小球的时间,按下式计算粘度下降百分数:
粘度下降(?)=
×100
T0-TΑ
入酶液1ml。计时反应5分钟后取反应液1ml于试管中,立即加入碘液二滴摇匀,并随即加入约2ml95%的异丙醇,转动试管两分钟,然后将反应液倾入白瓷碟中,观察脱胶作用结果,依次取样观察。
以30℃和PH412条件下,30分钟使1毫克苹果果胶脱胶作用结束所需酶量为一个酶活单位。
酶活单位?毫升=?100?f
X
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x——待测酶液脱胶作用结束的时间(分);100——10毫升1%果胶溶液所含100毫克果胶;f——酶液稀释倍数
011M硼酸缓冲液(PH=910)中止反应。再加入012ml1%的Α-氰基乙酰胺,在沸水中煮沸10分钟,冷
却到室温在276nm下比色。
PG的活力计算:
此法测定果胶酶活力较客观,准确且简单易行。其不足之处主要是随酶活力的提高,酶活单位在1分钟乃至30秒范围内即有较大的变化,按公式计算的结果,酶活差即在数倍以上,因而在系统测定时间和酶样较多的情况下常会产生误差。
(四)滴定法
由半乳糖醛酸标准曲线得y=ax+b
y——半乳糖醛酸浓度(mol?ml) X——消光值
(t×E)(mol?PG活力=(A-B)×b×s?ml?h)A——样品消光值;B——对照消光值;b——回归方程斜率;S——加入果胶毫升数;t——酶反应时间;
利用酶液与果胶的反应液加入1ml1MNa2CO3再加入011MI2-KI,摇匀,静止20分钟,加入2mlH2SO4,用015NNa2S2O3滴定至棕黄色,再加入少量015%淀粉溶液再用Na2S2O3滴定至蓝色刚好消失变成无色。
(E×t×PG活力=(B-A)×N×S×510?M)
(),使用的仪器01l5ml移液管),恒温水浴达不(℃),试验重复次数少等原因,未能得到,只是消光值稍有差别。可以说明此方法可以测果胶酶活力。
(六)DNS比色法
PG分解果胶产生带有还原性醛基的半乳糖醛酸。3,5——二硝基水杨酸可以同其产生显色反应,可用分
N——Na2S2O3的克当量浓度; A——样品消耗Na2S2O3毫升数; B——对照消耗Na2S2O3 S—; ; t;
M——滴定时所取反应液的毫升数此方法比较快速,且简便易行,较常用。
(五)Α-氰基乙酰胺比色法
-氰基乙酰胺能同PG分解果胶产生的还原性半Α
光光度法测PG活力。
其显色反应用DNS试剂,520nm下比色,其活力
计算同方法(五)。
目前,果胶酶活性的测定方法较多,各有其优点,可根据果品品种、实验条件等选择最佳的测定方法。
(参考文献:略)
(作者单位:北京市营养源研究所 100054)
乳糖醛产生颜色反应,利用分光光度法测PG活力。
笔者曾以京白梨为材料,利用此法做了初步试验。
011ml酶液,加入018ml5%果胶、01375ml3715mM的醋酸钠,在30℃水浴3个小时,再利用
○国外信息○
开发利用玉米纤维取得成果
玉米纤维是湿磨玉米的副产品,经济价值较低。若对其开发利用,可提高几倍的经济价值。目前,美国农业部东区研究中心弗城试验室对开发利用玉米纤维,已经取得令人高兴的成果。
玉米纤维的组成为:35～40%的半纤维素,20～
25%的淀粉,10～12%的纤维素,10～15%的木质素和
于水,其水溶液粘度极低,可用于做粘胶剂和乳化剂。所制的纤维素是疏松的,其开放式结构可与任何化合物相结合。弗城实验室还开发出从玉米纤维中提取油脂的新方法。所提取的油脂,与一般玉米油的化学组成不同,具有可降低血清胆固醇的作用。玉米纤维油与米糠油虽同样含有一种被认为是活性化合物的硫胺醇,但米糖油仅含有1～2%,而玉米纤维油含量高达6～
7%,可用作食品的增补剂。
灰分,2～4%的油脂。弗城试验室主要是开发利用玉米纤维中的半纤维纱、纤维素和油脂。
弗城试验室成功地开发出一种从玉米纤维中提取半纤维素和纤维素的新方法,并去除了玉米特有的气味和味道。所制得的半纤维素呈乳白色粉末状,极易溶
美国每年湿磨玉米约产生400万吨的玉米纤维,每吨价格在400美元以下,通过开发利用,可产生惊人的经济效益。
(成茹)
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