第二篇：动物组织基因组DNA小量提取试剂盒

动物组织基因组DNA小量提取试剂盒

一、产品简介

本试剂盒采用独特的组织和细胞裂解液，配合蛋白酶K 裂解细胞释放基因组DNA，释放的基因组DNA 被选

择性吸附到硅胶膜上。

适合从≤25mg 动物组织中提取多至20 μg 基因组DNA。纯化的基因组DNA 长度可达20-30 kb，适合用于酶

切、PCR、Southern 杂交、RAPD、RFLD 等分子生物学实验。

二、试剂盒组成和储存

组成内容 DBI-2003 (50次) DBI-2004 (200次)

Proteinase K＊ 1 ml 4×1 ml

Buffer TG-A 15 ml 60 ml

Buffer TG-B 15 ml 60 ml

Buffer WA§ 19 ml 75 ml

Buffer WB§ 16 ml 65 ml

DNA 吸附柱-C 50 套200 套

1.5 ml 离心管50 个200 个

TE※ 15 ml 30 ml

说明书1 份1 份

＊Proteinase K: 20 mg/ml, -20℃长期保存；频繁使用可置于4℃保存。

§Buffer WA和Buffer WB，使用前按试剂瓶所示体积加入无水乙醇或者95%乙醇，混合均匀。 ※TE：10 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, pH 8.0(25°C)。

除Proteinase K外，其他组成成分于室温储存。

三、注意事项

1. Buffer TG-A、Buffer TG-B 和Buffer WA 含刺激性化合物，避免沾染皮肤、眼睛和衣服、谨防吸入口鼻。若沾

染皮肤、眼睛，立即使用大量水或生理盐水冲洗沾染处，必要时寻求医疗咨询。

2. 使用后应及时盖紧试剂瓶盖子，以免影响下次使用效果。

3. 操作步骤1，切碎组织块可减少水浴消化时间，并且提高DNA 产量。组织切碎后应立即进行下一个操作步骤，

以免基因组DNA 被内源DNA 酶降解。

4. 操作步骤4，转移离心上清时勿将沉淀转移到干净的离心管，否则会堵塞DNA 吸附柱-C 中的吸附膜，大大降

低DNA 结合和洗脱效率，并且影响DNA 纯度。

5. 操作步骤6，室温放置1-2 min，有助于提高DNA 吸附效率，从而提高产量。

6. 操作步骤11，室温放置1-2 min，有助于提高DNA 洗脱效率，从而提高产量。

四、操作步骤

实验准备：56℃和70℃水浴，2 个干净的1.5ml 离心管，无水乙醇或者95%乙醇，将Proteinase K 恢复至室温。

1. 将动物组织尽可能切碎，称取≤25mg 切碎的动物组织放入干净的1.5 ml 离心管中。 ▲切碎动物组织可以减少操作步骤2 的水浴时间。肌肉和内脏等组织可以切为肉泥状，鼠尾可以剪切为薄片。

2. 加入20 μl Proteinase K，加入250 μl Buffer TG-A，Vortex 10 秒或者剧烈摇晃20 次

混合均匀，置于56℃水

浴，间断混合，直至组织块完全被消化（毛发和骨组织等不能被完全消化，不影响后续实验）。 ▲加入Buffer TG-A 混合均匀后溶液为混浊状，每4-5 min 剧烈震荡或者摇晃有助于分散组织块，加快消化组织的速度；

一般水浴10-20 min 后溶液为透亮状，每20-30 min 剧烈震荡或者摇晃一次即可。

▲水浴时间因动物组织类型和组织块大小而异，一般的动物组织（比如小鼠尾）1-3 小时即可消化完全。也可以过夜消化，

不影响实验效果；如果选择过夜消化组织，无需在水浴期间间断混合。

▲RNA 残留可能会影响酶切但不影响PCR。如需去除RNA，可在水浴结束后加入8 μl RNase A1（50 mg/ml）溶液（客

户自备），混合均匀，室温放置2 min。

3. 加入250 μl Buffer TG-B，Vortex 震荡10 秒或者剧烈摇晃20 次混合均匀，置于70℃水浴10 min。

4. 室温12,000×g 离心2 min，将离心上清倒入或者用移液器转入另一个干净的1.5 ml 离心管。

▲离心沉淀为毛发和骨组织等不能被消化的组织。勿将沉淀转移到干净的离心管，否则会堵塞DNA 吸附柱-C 中的吸附膜，

大大降低DNA 结合和洗脱效率，并且影响DNA 纯度。

5. 加入250 μl 无水乙醇或者95%乙醇(此时可能会出现絮状凝集物，不影响实验效果)，温和翻转离心管10 次混

合均匀，避免产生大量泡沫，简短离心(离心速度达到3,000×g 后立即停止)去除离心管盖上的液体。

▲ 切勿长时间高速离心，防止絮状凝集物沉淀到离心管底

DNA 结合

6. 将溶液和絮状凝集物一起倒入或者用移液器转入DNA 吸附柱-C 中，室温放置2 min。

7. 室温12,000×g 离心2 min，弃废液，将DNA 吸附柱-C 放回2 ml 离心管中。 洗涤

实验准备：第一次使用前，按试剂瓶所示体积在Buffer WA 和Buffer WB 中加入无水乙醇或者95%乙醇。

8. 在DNA 吸附柱-C 中加入500 μl Buffer WA，室温12,000×g 离心1 min，弃废液，将DNA 吸附柱-C 放回2ml

离心管中。

9. 在DNA 吸附柱-C 中加入500 μl Buffer WB，室温12,000×g 离心1 min，弃废液，将DNA 吸附柱-C 放回2 ml

离心管中。重复此步骤。

10. 室温12,000×g 离心2 min。

洗脱

实验准备（可选）：65℃预热TE 或者去离子水。

11. 将DNA 吸附柱-C 转入试剂盒携带的1.5 ml 离心管中，向DNA 吸附膜的中央加50-200 μl TE 或者去离子水，

室温放置1-2min，室温12,000×g 离心1 min。

▲65℃预热TE 或者去离子水，可以提高洗脱效率。

▲离心结束后将1.5 ml 离心管中的洗脱液加到吸附膜的中央，重复此步骤，可以提高洗脱效率。

附录1. 从乙醇或者福尔马林等固定液浸泡的组织中提取基因组DNA

一般从乙醇或者福尔马林等固定液浸泡的组织中提取的基因组DNA 为降解的小片段(<650 bp)，长度因固定

液质量和保存时间而异。

实验准备：56℃和70℃水浴，PBS，2 个干净的1.5ml 离心管，无水乙醇或者95%乙醇， 将Proteinase K 恢复至室温。

1. 将组织从固定液中取出，用PBS 洗涤2 次。

2. 去除PBS，继续四、操作步骤1。

附录2. 从石蜡包埋的组织中提取基因组DNA

一般从石蜡包埋的组织中提取的基因组DNA 为降解的小片段(<650 bp)，长度因石蜡的质量和保存时间而异。

实验准备：56℃和70℃水浴，二甲苯，2 个干净的1.5ml 离心管，无水乙醇或者95%乙醇， 将Proteinase K 恢复至室温。

1. 称取≤25mg 石蜡包埋的组织切片。

2. 加入1.2 ml 二甲苯，Vortex 震荡10 秒或者剧烈摇晃20 次混合均匀；室温12,000×g 离心5 min；用Tips 仔

细吸除离心上清(勿吸除沉淀)。

3. 加入1.2 ml 无水乙醇或者95%乙醇，Vortex 震荡10 秒或者剧烈摇晃20 次混合均匀；室温12,000×g 离心5

min；用Tips 仔细吸除离心上清(勿吸除沉淀)。

4. 重复步骤3。

5. 打开离心管盖，室温放置20-30 min 或者37°C 放置10–15 min，彻底挥发乙醇。

6. 继续四、操作步骤2。