无菌操作技术及注意事项
1、玻璃器皿的消毒和清洁
⑴新购玻璃器皿的处理
新购玻璃器皿应用热肥皂水洗刷，流水冲洗，再用1％～2%盐酸溶液浸泡，以除去游离碱，再用水冲洗。对容量较大的器皿如试剂瓶、烧瓶或量具等，经清水洗净后应注入浓盐酸少许，慢慢转动，使盐酸布满容器内壁数分钟后倾出盐酸，再用水冲洗。
⑵污染玻璃器皿的处理
①一般试管或容器可用3％煤酚皂溶液或5％石炭酸浸泡，再煮沸30分钟，或在3％～5％漂白粉澄清液内4小时，有的亦可用肥皂或合成洗涤剂洗刷使尽量产生泡沫，然后用清水冲洗至无肥皂为止。最后用少量蒸馏水冲洗。
②细菌培养用的试管和培养皿可先行集中，用1kg/cm2高压灭菌15～30分钟，再用热水洗涤后，用肥皂洗刷，流水冲洗。
③吸管使用后应集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小时，逐支用流水反复冲洗，再用蒸馏水冲洗。
④油蜡沾污的器皿，应单独灭菌洗涤，先将沾有油污的物质弃去，倒置于吸水纸上，100℃烘干半小时，再用碱水煮沸，肥皂洗涤，流水冲洗。必要时可用二甲苯或汽油去油污。
⑤染料沾污的器皿，可先用水冲洗，后用清洁或稀盐酸洗脱染料，再用清水冲洗。一般染色剂呈碱性，所以不宜用肥皂的碱水洗涤。
⑥玻片可置于3％煤酚皂溶液中浸泡，取出后流水冲洗，再用肥皂或弱碱性煮沸，自然冷却后，流水冲洗。被结核杆菌污染或不易洗净的玻片，可置于清洁液内浸泡后再冲洗。
2、无菌器材和液体的准备
将玻璃器具中的培养皿、培养瓶、试管、吸管等按上述方法洗净烘干后，用一洁净纸包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花，装入干净的铝盒或铁盒中，于120℃的干燥箱中干燥灭菌２小时，取出备用。
对于手术器械 、瓶塞、工作服以及新配制的PBS洗液，则采用高压蒸气灭菌法，即在15磅的条件下，加热20分钟。而对于MEM培养液、小牛血清和消化液等需用G5或G6滤器负压抽滤后使用。
3、无菌操作过程
在无菌操作过程中，最重要的是要保持工作区的无菌、清洁。因此，在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，并认真洗手和消毒。在操作时，严禁喧哗，严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的止血钳、镊子等。培养瓶应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。对于吸管应先用手拿后1/3处，戴上胶皮乳头，并用酒精灯烧烤之后再吸液体。
4、常用清洁液的配制法
⑴重铬酸钾清洁液：
无菌操作基本技术
1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %
ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每
次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间
污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间
隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可
以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦
拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操
作。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打
开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，
尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒
感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程
中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐
针头之伤害等。
5. 定期检测下列项目：
5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力
5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。
5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300
小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水
第二篇：无菌操作技术规范
无菌操作技术规范
无菌技术是在医疗护理操作过程中，保持无菌物品、无菌区域不被污染、防止病原微生物 侵入人体的一系列操作技术。无菌技术作为预防医院感染的一项重要而基础的技术，医护人员必须正确熟练地掌握，在技术操作中严守操作规程，以确保病人安全，防止医源性感染的发生。
一、无菌技术的操作原则：
1、进行无菌操作的环境应清洁、宽敞。操作前半小时须停止扫地、更换床单等工作，空气清新，无尘埃。
2、无菌操作前，操作人员要穿戴整洁，帽子须遮盖全部头发，口罩须盖住口鼻，并认真彻底洗手（七步洗手法）
洗手方法：1）手掌对手掌；
2）手背对手掌； 
←3）两手指缝相对互擦；
4）双手并扣互擦指背；↓
5）拇指在掌心旋转擦洗；↓
；
←6）指尖对手掌擦洗。
（7）摩擦手腕，然后彻底流水冲净。
认真揉搓双手至少15s，范围为双手、手腕及腕上10cm，注意指尖、指缝、拇指、指关节等处清洗干净。
3、实施无菌技术操作必须使用无菌物品。一次性使用的无菌医疗器械、用品不得重复使用。
4、无菌物品与非无菌物品应分柜放置，并有明显标志。无菌包需标明物品名称、灭菌日期，按失效期先后顺序摆放。无菌包的有效期按7天计算， 过期或受潮应重新灭菌。无菌柜应定期整理、清洁。
5、在无菌技术操作时，必须明确无菌区和非无菌区。
6、使用无菌物品前必须认真检查无菌包包装完整性、标识有效性、即无菌包的名称、灭菌时间或失效期、签名等，检查包内外化学指示胶带变色情况等。
湿包或有明显水渍，密封容器的筛孔被打开，灭菌包掉落在地或误放不洁之处，包装破损或发霉，外包装指示带或包内指示卡变色没有达到标准或有疑问等情况，应视为污染，不能再使用。不得使用过期无菌物品。
7、进行无菌操作时，操作者应面向无菌区域并与无
菌区保持一定距离；手臂应保持在腰部或操作台面以上，操作过程中不可跨越无菌区，手不可触及无菌物。操作时不可面对无菌区谈笑、咳嗽、打喷嚏。
8、无菌物品必须一人一用一灭菌。取用无菌物品时应用无菌持物钳 / 镊近距离夹取。无菌持物镊 / 钳可用消毒液浸泡或干性保持。湿式无菌持物钳、筒及筒内消毒液每周更换一次，干式无菌持物筒和钳每4h更换一次，一旦污染随时更换。
9、无菌物品取出后不可放回无菌容器内。应用无菌巾包（盖）好，超过4h不得使用。开启的无菌药液须注明时间。开启的无菌溶液须在4h内使用，其他溶液不得 > 24h。注射治疗时，应用无菌盘，抽出的药液不得 > 2h。
10、用于无菌技术操作的棉球、棉签、纱布。根据一次用量的标准，独立包装。用无菌容器盛放的无菌物品，一经打开，使用时间最长不得>24 h。
11、消毒皮肤用的碘伏、酒清应密闭保存。病区盛放消毒溶液的容器每周灭菌2次。
二、无菌技术的操作流程
医务人员在执行无菌技术操作前，首先戴好帽子，帽子要求遮盖全部头发，然后按七步洗手法洗手后戴口罩，环境要求宽敞、清洁。
（一）戴无菌手套
1、查看无菌手套：展开无菌手套包，一手掀起手套袋开口处查看袋中手套的摆放，将手套反褶部分移到近身处。
2、提取手套：两手同时掀起手套开口处，分别捏住两只手套的反褶部分（手套内面）向前向上一次性取出两只手套。
3、戴手套：一只手提取两只手套的反褶部分（手套内面），另一只手五指并拢，伸入至手套指根部，再张开五指对准手套五指戴上。再用带好手套的手四指并拢插入另一手套的反褶内面（手套外面），分别用食、小指支撑手套反褶内面挠、尺两侧顶端，未戴手套的手对准手套的手指插入手套内；将手套的反折部翻上套在工作服袖口或手术衣袖口上。
（二）铺无菌治疗盘：
1、取无菌治疗巾
（1）用清洁小毛巾抹拭治疗盘
（2）按无菌技术操作原则第6条对无菌治疗巾包、无菌持物钳进行核实，备用。
（3）将无菌治疗巾包平放在清洁、干燥的操作台上，解开系带，卷放于包布下，按原折顺序由远到近逐层打开无菌包。
2、铺无菌治疗盘
（1）用双手分别捏无菌巾的一边左右两上角外面轻轻抖开，双折铺于治疗盘上，将上层折成扇形，边缘向外，治疗巾内面构成无菌面。
（2）按需夹取无菌物品有序摆放于无菌盘内，用两手捏着治疗巾的外面，拉开扇形折叠层遮盖于物品上。
（3）治疗巾上下边边缘向下折一次，保持无菌面相对密闭性。
（4）准备好的无菌盘若不马上使用，需注明铺盘的日期、时间、有效期4 h 。
（三）无菌持物钳使用
1、按无菌技术操作原则第6条的要求核对、检查无菌包。
2、解开系带，卷放于包布下，按原折顺序逐层打开无菌包，取出无菌持物钳筒，取出无菌持物钳放于无菌持物钳筒内备用，干燥保存有效期4 h ，用灭菌剂保存时有效期7天。
3、取物时打开筒盖，操作者用手持钳的上 1 / 3 以上处，闭合钳端取出持物钳，避免接触容器边缘而被污染，用2%戌二醛保存的无菌持物钳使用时钳端向下，防止浸泡液倒流而污染钳端。
4、到远外取物时，要连同无菌持钳筒一起移动持物钳。
5、取物后，把钳端闭合垂直放回无菌持物钳筒内，并盖好盖。
（四）取无菌溶液
1、首先清洁无菌溶液瓶外的灰尘。
2、核对无菌溶液名称、浓度、有效期、检查溶液有无沉淀、混浊、变色，检查瓶盖有无松动，瓶身有无裂缝。
3、用启瓶盖器开启瓶盖，然后用拇指与食指或双手拇指将瓶塞边缘向上翻起。
4、用一食指和拇指夹住瓶塞将其拉出。
5、用一手拿溶液瓶签朝向掌心，先倒出少许以冲洗瓶口，再由原处倒出溶液至无菌溶器中。
6、倒毕塞进瓶塞，消毒瓶塞、瓶盖，然后盖好，未用完者需注明开启日期、时间。
（五）无菌容器的使用
1、检查无菌容器名称、灭菌日期。
2、取物时，打开无菌容器盖，内面向下，用持物钳夹取无菌物品，若是在口杯类无菌容器内取物时，一手打开容器盖，一手用持物钳夹取无菌物品。
3、取物后，立即将盖盖严。
4、手持无菌容器时应托住容器底部，不能触及容器边缘及内面。