实验一 凝集反应（ABO血型的鉴定）
[实验目的]
1．掌握凝集反应的原理，玻片法和试管法凝集实验的实验方法和结果分析。
2．了解凝集反应基本类型及血型鉴定的各种方法包括正、反定型，血型板鉴定法和血型卡鉴定法。
[实验原理]
在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。
[实验器材]
1． 器材：光学学显微镜，消毒缸
2． 材料：消毒干棉球，一次性采血针，载玻片，玻璃试管，一次性带刻度朔料吸管，医用黄色垃圾袋
3． 试剂：75%医用酒精，0.9%NaCl注射液，抗血清试剂抗A、抗B
[内容与方法]
(一)玻片法凝集实验
1.用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。滴1至2滴血液于含有1ml生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。用干棉球止血。
2．取洁净载玻片1块，在中间用蜡笔画一条竖线，将抗A、B分型试剂分别加1滴于载玻片两端。
3. 用毛细吸管吸取血球悬液，在白瓷板的两个圆孔内各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。
4.肉眼观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。若肉眼观察不明显，可在显微镜下观察是否存在微小凝集
5.记录凝集情况，判定受检者的血型。
（二）试管法凝集实验
1．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。滴1至2滴血液于含有生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。用干棉球止血。
2．取洁净试管2支，分别标记上A、B字样，将抗A、B分型试剂分别加1滴于相应标记的试管中
3．用一次性吸管吸取血球悬液，在2支标记试管中各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。
4．观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。若肉眼观察不明显，可在显微镜下观察是否存在微小凝集
5．记录凝集情况，判定受检者的血型。
（三）演示实验（包括反定型鉴定法、板式和卡式法的结果判读）
1．实验老师准备0.5%标准红细胞：A型、B型、O型，已分离血浆的抗凝血
2．取洁净试管3支，分别标记上A、B、O字样，将受检者血浆加入已标注A、B、O字样的试管中各1滴。
3．用一次性吸管吸取0.5%标准红细胞血球悬液A、B、O 型，分别加于相应标记的试管内，并充分混匀，放置5－10分钟，（离心后观察结果）。
4． 观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分
散。若肉眼观察不明显，可在显微镜下观察是否存在微小凝集
5．记录凝集情况，判定受检者的血型。
6．实验老师准备已使用的血型板和血型卡各20份，分发给学生，让学生判读正确的血型，
[作业与思考]
1． 简述直接法鉴定血型的原理。
2． 用表格的方式绘制出正反定型血型结果判读的标准?
3． 思考：反定型血型鉴定实验的原理
4． 思考：在各凝集试验中都设有相应对照，有何意义？若对照出现异常如何分析及解决？
5． 思考：直接凝集试验与间接凝集试验有何不同？
第二篇：凝集素对细胞的凝集反应
华南师范大学实验报告
学生姓名 戴琼 学 号 20082503014
专 业 生物科学 年级、班级 20##级、6班
课程名称 细胞生物学 实验项目凝集素对细胞的凝集反应
实验类型 验证 设计 综合 实验时间 2010 年 10 月 14 日
实验指导老师 尤蓉 黄群声 实验评分
一、实验项目
凝集素对细胞的凝集反应
二、实验目的
1、了解细胞膜的表面结构
2、了解细胞发生凝集反应的原因
3、观察细胞凝集的现象
三、实验原理
细胞膜的基本成份是膜脂和膜蛋白质，膜脂和膜蛋白又可被糖基化成糖脂和糖蛋白，分枝状的糖基主要位于质膜外侧构成细胞表面的糖外被。
凝集素是一类含糖，可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞膜外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。一种凝集素具有对某一种特异性糖基专一性结合的能力。
四、实验材料
兔血红细胞 马铃薯去皮块茎
五、实验过程
1、2%兔血红细胞制备
取兔全血(加肝素抗凝剂)1 ml至10mL离心管+ 4mL生理盐水；3000rpm离心3min，离心洗涤3次；最后的沉淀放至1.5mlEP管，3000rpm离心3min；按压积红细胞体积加生理盐水配成2%兔血细胞液。
2、马铃薯凝集素提取
马铃薯去皮块茎2g +少许磷酸缓冲液，研磨+ 加到15ml磷酸缓冲液，浸泡0.5～1h。
3、细胞凝集反应观察
马铃薯凝集素粗提液1滴至玻片+ 2%兔血细胞液1滴，混匀，加盖玻片,静置片刻，观察。
用1滴磷酸缓冲液和1滴2%兔血细胞液混合作为对照观察。
六、实验结果
图1 土豆凝集素对兔血红细胞的凝集（10*10）
图2 未滴加土豆凝集素的2%兔血细胞液（10*10）
通过加了马铃薯凝集素粗提液的2%兔血细胞液，与未加马铃薯凝集素粗提液的2%兔血细胞液的现象作对比，可以得出加了马铃薯凝集素粗提液的2%兔血细胞液有凝集现象，马铃薯凝集素粗提液对2%兔血细胞液有凝集作用。原因是马铃薯粗提取中含有凝集素，能与兔红细胞细胞膜外被的寡糖链特异性相连接，使细胞发生凝集。
七、分析与讨论
1、凝集素的活性的影响因素：pH，温度，糖抑制作用等。
2、与受体的特异性结合表现在： (1)一种凝集素只与含有一种糖分子的受体结合; (2)各类凝集素对与其结合的受体糖分子中各个碳原子上的羟基,受体中糖链上与凝集素结合的糖分子的位置以及糖苷链的类型都有专一性; (3)凝集素的糖结合位点大小、形状、糖决定族在糖链中的位置、配体糖的构象等都影响着凝集素与糖分子的结合[1]
3、凝集素可用于恶性肿瘤疾病的诊断和治疗，肿瘤是生物体内一些正常细胞生长失去控制，出现异常分化的细胞群。肿瘤细胞伴有细胞膜的改变，细胞膜上的糖基也会产生相应的变化。可以用凝集素来检测肿瘤细胞膜上糖基的变化。
参考文献:
[1] 朱 月. 凝集素的作用与应用[J]. 水产科学, 2005（12）,48-49.