气相色谱仪原理及应用实验指导书
贵州大学精细化工研究开发中心（绿色农药与生物工程重点实验室）
1. 实验类型：设计型实验（研究性实验）
2. 课时安排：6课时。并运用其数据资料的能力以及归纳总结的能力等。
3. 实验目的和意义
通过学习气相色谱仪的构成和使用方法，及其在定性、定量分析中的应用，培养学生严谨的科学态度、细致的工作作风、实事求是的数据报告和良好的实验习惯（准备充分、操作规范，记录简明，台面整洁、实验有序，良好的环保和公德意识）。培养培养学生的动手能力、理论联系实际的能力、统筹思维能力、创新能力、独立分析解决实际问题的能力、查阅手册资料并运用其数据资料的能力以及归纳总结的能力等。
4. 实验原理
气相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的气相和固定相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出）由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。
5. 实验设备
气相色谱仪、色谱柱、容量瓶、分析实验室常用玻璃仪器、氮气、农药标准品。
6. 实验内容
了解并初步掌握气相色谱仪的基本原理与构造；了解气相色谱仪常用的几种检测器工作原理和使用范围；学习气相色谱法分离化合物和检测化合物的含量的方法；通过测定对样品的定性、定量测定，初步掌握获得气相色谱谱图和数据的一般操作程序与技术；学习样品制备的方法；了解影响分析测定的重要因素，学会优化分析条件；学习谱图和数据的处理方法；结合实验室项目，完成一个分析检测项目。
1) 样品制备
样品制备过程中，要同时考虑将被分析的样品中，可能干扰欲测组分定量的物质尽可能的分离出去。当欲测组分含量很低时，还要考虑通过样品制备使欲测组分在试验样品中的含量得以提高，便于进行色谱分析。
2) 定性、定量方法
保留时间定性；峰高、峰面积定量（归一法、外标法、内标法、标准加入法）。
3) 方法可行性的验证
联用技术进一步定性；准确度（添加回收率实验）、精密度实验。
3) 数据处理
实验中所有测量数据都要随时记在专用的记录本上，不可记在其他任何地方，记录的数据不得随意进行涂改；其平行实验数据之间的相对标准偏差（RSD）一般不应大于5%；实验结果的误差应不超过±2%。
4) 仪器操作
a. 准备与开机
b. 编辑GC分析方法
c. 样品分析与采集数据
d. 报告输出
e. 关机
7. 注意事项
1) 实验之前必须交预习报告，实验完后每人写一份实验报告。
2) 严格遵守实验室规章制度。
3) 做好实验记录工作。
8. 思考题
1) 常用的气相色谱检测器有哪几种，简述其使用原理及应用范围。
2) 样品测定前要为何要确定检测器的线性范围，如何确定？
3) 影响气相分离的因素有哪些？
附：参考实验项目
蔬菜或水果中农药残留量的测定
一、目的要求
1、 了解气相色谱仪及相关检测器的使用范围；
2、 了解电子捕获检测器（ECD）的检测原理和使用方法。
3、 掌握农药残留量的测定方法。
二、基本原理
ECD是一种选择性检测器，对含X、S、P、N、O电负性强的物质，影响很大，而对非电负性物质，则影响很小。放射源（3H或63Ni）产生的B射线将载气N2电离成正离子和电子，这些离子和电子在电场作用下形成“基流”。当电负性样品进入检测器后，便捕获自由电子，形成的负离子和载气的正离子结合为中性分子，以使基流下降，产生对应的负信号——倒峰。在一定范围内，检测器的响应信号和样品组分的浓度成正比。
六六六、DDT目前虽然已经禁用，但其化学性质稳定，半衰期长，施用后残留在大气、土壤、水体、植物中不易讲解，严重危害人体健康。
本法利用己烷提取样品，采用石英毛细管气相色谱柱进行分离，ECD检测器，外标法定量。
三、仪器与试剂
仪器：气相色谱仪（配ECD检测器）；HP-5石英毛细管色谱柱；离心机；布氏漏斗；0.5*22cm玻璃层析柱；500mL分液漏斗2只
试剂：无水硫酸钠、硫酸钠、正己烷、丙酮、浓硫酸(均为AR)；α-666、β-666、γ-666、δ-666、p, p- DDE、o, p-DDT、p, p＇-DDD，p, p＇-DDT。
四、实验步骤
1、 试样的提取和净化：
将水果或蔬菜样品置于多用食品加工机中搅碎，称取20.0 g于250 mL分液漏斗中，加入100 mL丙酮一正己烷混合液(1:1)，振摇数分钟，中间放气。再振荡40 min，转移，抽滤，残渣用50mL丙酮－正己烷混合液(1:1)洗涤，洗涤液过滤，并于另一分液漏斗中，以50 mL 20 g/L硫酸钠溶液洗涤2次，以除去丙酮。正己烷相过无水硫酸钠漏斗脱水并滤入梨形瓶中，用少量正己烷洗涤分液漏斗及无水硫酸钠漏斗，洗脱液合并于梨形瓶中，在旋转蒸发器中浓缩
至约5 mL。2、色谱条件：
色谱柱，HP-5弹性石英毛细管柱(30 m×0.32 mm i.d., 0.25 μm)；色谱柱升温程序，初温80?C保持1 min，升温速率50 ?C /min，升温至160?C，再以0.5?C/min升温至165?C，保持1min，再以20?C /min升温至220?C，保持20 min；气化室温度，220?C检测器；温度，300℃ ；载气、尾吹气均为氮气，纯度为99.999%；载气流速为5 mL/min，尾吹气流速为60 mL/min；柱头压，138 kPa；进样方式，不分流进样；进样量，1μL。
3、标准溶液配制：
用己烷配制α-666、β-666、γ-666、δ-666、p, p- DDE、o, p-DDT、p, p＇-DDD，p, p＇-DDT各为l00ppm的贮备液，操作溶液浓度与样品浓度相近。
4、色谱测定：
(1) 用各种浓度的六六六、DDT标准溶液注入色谱仪，确定ECD的线性范围；
(2) 进样品溶液，根据样品的峰高，用标准贮备液配制浓度相近的操作溶液；
(3) 在相同色谱条件下，依次进样品和标样，记录tR和色谱图。
五、数据处理
根据色谱图测量蜂高，按下式计算蔬菜、水果中的六六六、DDT的含量。
ci (mg/kg)=hi*cs*Ws / hs*Wi*K
式中， ci ——样品中农药的浓度；
hi ——扣除试剂空白后的峰高；
Ws —一标准溶液进样量；
Wi ——样品溶液进样量；
hs——标准溶液峰高；
cs——标准溶液的浓度(mg/kg )；
K——浓缩系数
六、结果与讨论
第二篇：色谱分析实验指导书
12应化《仪器分析实验》（色谱分析部分）安排表
注：1.流芳校区上车地点：化学实验中心一号实验楼前。
2.武昌校区上车地点：武昌校区东配楼前（武昌校区乘车点）。 3.准时发车，过时不候。
实验要求：
1、实验课成绩：提问20%+实验操作30%+实验报告40%+实验纪律及实验室卫生10% 2、由于仪器分析实验智能化程度较高，实验数据结果均为现场打印，请前预习实验内容及实验相关知识点！！！
3、实验报告在实验完成后统一交到武昌校区实验楼617室
影响FID灵敏度的几个主要因素、FID敏感度的测定、色谱柱的柱效的测定
一、实验目的
1. 理解氢焰检测器的操作条件中气体流量对灵敏度的影响；
2. 学会测定氢焰检测器的敏感度；
3. 学会测定色谱柱效的方法。
二、实验原理
色谱法是一种特别适用于分离多组分试样的分离技术。在色谱法中，一相为色谱柱内固定不动的固定相，另一相为携带混合物的流动相，此两相的相对运动使得混合物中的不同组分按在固定相的滞留时间的不同先后流出色谱柱，从而进行分离分析。色谱法是各种分离技术中效率最高和应用最广的一种方法。人们在评价一根色谱柱柱效时，常常将色谱柱比作精馏塔，塔板n数越多，柱效越高，n与色谱峰半峰宽及峰底宽的关系式为：
n?5.54?(tR2t)?16?(R)2 （1） Y1/2Y
式（1）中，tR为待测组分的保留时间，Y1/2为待测组分的色谱峰半峰宽，Y为待测组分的色谱峰峰底宽，tR 、Y1/2及Y应为相同的单位（或同为时间单位，或同为距离单位）。
气相色谱检测器的作用是将色谱柱分离后的各组分按其特性及含量转化为相应的电信号，它是气相色谱仪中的主要组成部件。
常用的有两类检测器，一类是浓度型的检测器如热导池检测器（Thermal Conductivity Detector, 简称TCD）和电子捕获检测器（Electron Capture Detector, 简称ECD），这类检测器所测量的是载气中某组分浓度瞬间的变化，检测器的响应值与组分的浓度成正比，其中TCD灵敏度适宜，稳定性好，对所有物质都有响应，是一种通用型的检测器；另一种类型的检测器是质量型的检测器如氢火焰离子化检测器（Flame Ionization Detector, 简称FID）和火焰光度检测器（Flame Photometric Detector, 简称FPD）等，这类检测器测量的是载气中某组分进入检测器的速度变化，即检测器的响应值和单位时间内进入检测器某组分的质量成正比。FID仅限于检测含碳有机物，测定灵敏度较TCD高几个数量级。
灵敏度和检测限是衡量检测器质量的两个重要指标。
灵敏度（S）是检测器的响应信号（△R）对进样量（△Q）的变化率，即：
S??R （2） ?Q
C1C2F0A （3） m对于浓度型的检测器，其计算公式为： Sc?
式（3）中，C1（单位为mV·cm-1）为记录仪的灵敏度，C2（单位为min·cm-1）为记录仪纸速的倒数，F0为载气的流速，A（单位为cm2）为色谱流出曲线的峰面积。如果试样为液体，则灵敏度Sc的单位为mV·mL·mg-1；如果试样为气体，则灵敏度Sc的单位为mV·mL·mL-1。
对于质量型的检测器，其计算公式为：
Sm?
灵敏度Sm的单位为mV·s·g-1。
检出限也称称敏感度，，是指检测器恰能产生和噪声相鉴别的信号时，在单位体积或时间需向检测器进入的物质质量（单位为g），通常认为，恰恰相反能鉴别的响应信号至少等于检测器噪声的3倍。
以D表示敏感度或检出限，N表示噪声，S表示检测器的灵敏度，则： 60C1C2A （4） m
D?3N （5） S
气体流量对FID的灵敏度有很大的影响，一般来讲，选用FID时用N2作载气，氢气和氮
气流量之比为1:1~1:1.5，空气为助燃气，空气流量较小时，灵敏度较低，当高于某一值时如400 mL·min-1，几乎对响应值没有影响，一般氢气与空气流量之比为1:10。
三、实验仪器与试剂
1. 气相色谱仿真软件。
2. 色谱柱：SE-30.5%不锈钢柱，长2m，内径3mm。 3. 检测器：FID。
4. 载气：N2，流量：50mL/min。
5. 样品：正庚烷、苯、正戊醇，甲醇为溶剂。
四、操作步骤及数据记录与处理
1．开机并设置实验条件
①打开色谱仿真软件，开启电源及载气，设置氮气流量到50 mL/min，柱温到70℃，进样口、检测器温度到150℃。
②点击“升温”按钮开始升温。
③设置空气流量为500 mL/min，氢气流量到75 mL /min以上，点击“点火”按钮，若点火成功，会听到一声清脆的爆鸣声，并会看到点火成功的提示。如果氢气的流量和空气流量太小，则点火可能不会成功，需重新设置空气及氢气的流量后再点火。
④当柱温及进样口温度达到设定温度后，“Ready”显示亮。注意观察状态栏的提示，待基线基本稳定后，请按“调零”按钮，将当前的基线电压调到零点。
2．氢气氮气流量比对检测器灵敏度的影响
将氮气流量固定到到50 mL /min，改变氢气流量。 ①选择样品为正庚烷,浓度为10mg·L-1,进样量为1 μL, 范围为1(101),记录灵敏度为8mv/满刻度。
②将氢气流量分别调到15、30、40、50、60、70 mL/min（氢气流量不能太小，太小了会熄火），分别进样，进样的同时按“开始记录”按钮，记录色谱图，色谱峰流出完后，按“停止记录”按钮，计算机会在屏幕上打印出组分的保留时间和峰面积，注意氢气流量的改变对
3．空气流量对检测器灵敏度的影响
将氢气流量调到刚才摸索出的最佳氢气流量，空气流量调到40、80、160、320、400、500、600 mL/min（空气流量不能太小，太小了会熄火）分别进样，记录色谱图，观察空气
空气流量改变引起峰面积的较明显改变才能说峰面积的改变是空气流量的改变引起的，如果峰面积改变不明显，这种改变可能是随机的，本仿真机也仿真了随机结果，这样才符合实际。
根据最佳条件的分析结果，按公式Sm=0.001·A·range /m计算氢焰检测器的灵敏度（正庚烷的比重=0.6837）。
4．测敏感度
设置空气流量到500 mL/min，设置氢气流量到刚才摸索到的最佳流量，记录仪灵敏度为
1mv/min，选择范围为0(10)。按“开始记录”按钮，记录基线，记录一段时间后，按“停止记录”按钮，测量基线噪音（基线噪音的测量方法见气相色谱仿真软件本实验附录一），按公
式D=3N/S计算氢焰检测器的敏感度。
5．测色谱柱的柱效
根据正庚烷的色谱图，测得正庚烷的保留时间tR，正庚烷色谱峰的半峰宽（半峰宽的测量方法见本实验附录）
五、思考题
1．举例说明常用检测器的种类。
2．以FID作检测器时，应如何选择气体流量？
3．根据柱效的计算公式，说明什么样的色谱峰更为理想？
附录： 噪音及色谱峰的半峰宽的测量方法
目前，色谱工作站都有如下功能，在屏幕上记录色谱图后，将鼠标移动到色谱图显示屏的任何地方，屏幕上都会显示鼠标移动到的地方的时间和信号电压坐标，本模拟实验也模拟了此功能，有此功能测噪音和色谱峰的半峰宽就非常容易。
测量基线的噪音：将鼠标指向一小段基线的最高点，读出这一小段基线的最高点的电压，再用鼠标指向一小段基线的最低点，读出这一小段基线的最底点的电压，最高电压与最低电压的差值即为基线的噪音电压。
测量色谱峰的半峰宽：将鼠标指向色谱峰的峰顶，读出并记下信号电压，将鼠标指向基线，读出并记下信号电压，将两者的差值除以2，得到峰高一半处的信号电压，将鼠标先后指向色谱峰峰高一半处的右左两个点，这两个点时间坐标的差值即为色谱峰的半峰宽。 技巧：选择较小的满刻度时间，可显示较宽的色谱峰，从而可减小测量误差。
实验二 烷系物的气相色谱分析
一、实验目的
1. 掌握色谱分析基本操作和苯系物的分析
2. 了解如何利用色谱图计算分离度
3. 学习用归一化法计算各组分的含量。
二、实验原理
烷系物系指正庚烷、正辛烷、正壬烷等，在工业产品石油中常存在这些组分，需用色谱法进行分析。
毛细管固定相有大的相比和比渗透性，分析速度快，总柱效高，本实验选用毛细管气相色谱仪进行苯系物的分析。使用非极性毛细管色谱柱，用氢火焰检测器，在适当条件下，各组分可完全分离（见图）。所得的庚烷、辛烷、壬烷的色谱峰均尖锐对称，且全部出峰，可用归一化法计算苯系物各组分含量。
500庚烷
辛烷
壬烷 400pressure / mV300200
100
1.01.52.02.53.0
Time / min
图1-8 苯系物的分离
一根色谱柱柱效越高，并不能说明其分离效能就越好。因为一个混合物能否被色谱柱所分离，取决于固定相与混合物中各组分分子间的相互作用的大小是否有区别。因此判断相邻两组分在色谱柱中的分离情况，应用分离度R来作为色谱柱的分离效能指标。分离度指的是相邻两组分色谱峰保留值之差与这两个组分色谱峰峰底宽度总和的一半的比值：
R?tR(2)?tR(1) （1） 1(Y1?Y2)2
式（1）中，tR(2)和tR(1)分别为两组分的调整保留时间，Y1和Y2为相应组分的峰底宽度。R越大，两组分分离得越好，当R=1.5时，可认为两组分完全分离。
三、仪器与试剂
1. 气相色谱仪（毛细管柱）。
2. 氢气钢瓶、氮气钢瓶、空气钢瓶或气体发生器。
3. 微量进样器。
4. 烷系物均为分析纯。
5. 混合未知样品。
四、实验步骤
1. 气相色谱仪器的使用
（1）开启气体钢瓶。
① 打开气体钢瓶主开关，确保减压阀处于关闭状态。
② 减压阀逆时针为关闭，顺时针旋转调节压力。
③ 主阀逆时针为开启，顺时针为关闭。
（2）关闭气体钢瓶
① 在实验结束后要关闭气体钢瓶，可适当延长载气的通气时间。
② 关闭气体钢瓶前应先关闭减压阀，在关闭总阀的情况下，打开/关闭减压阀直至压力
为零。
（3）开启气体发生器
① 先打开“空气”电源开关
② 在空气压力指示至0.4MP时，打开氢气，氧气开关。
③ 在各气体压力指示至0.4MP后，进行色谱仪的操作。
④ 气体净化器失效后要及时更换
（4）GC色谱仪的开启及色谱条件的设置。
① 开通载气N2后，打开色谱仪的电源开关及加热开关。
② 依次设置“柱箱”、“进样器”、“检测器”、“辅助”、“载气流量”等条件，升温至所设
温度。
③ 开通氢气、空气，调节至所需条件，点火。
④ 点火条件：可适当调低空气流量（0.02MP），适当调高氢气流量（0.25MP）
2. 按仪器操作规程调试色谱条件
（1）柱温：125℃。
（2）气化室温度、检测器温度、辅助Ⅰ:120℃+室温。
3. 进样：将各单组分庚烷、辛烷、壬烷等烷系物分别进样（进样量0.4μL），记录实验
条件下各组分的保留时间。
4. 未知样品测定：将混合未知样品进样（进样量0.6μL），记录色谱流出曲线。
五、结果处理
1. 根据混合未知样品的色谱流出曲线和各单组分的保留时间，对未知样品进行定性分析。
2.
:
3.
六、思考题
1．简述色谱分析中的归一化法和内标法。
2．简述色谱分析中的定性分析方法。
3．用什么判断色谱柱的分离效能？
实验三 醇系物的气相色谱分析（程序升温气相色谱法）
一、实验目的
1．了解气相色谱仪的构造及应用特点；
2．掌握程序升温气相色谱法的原理及基本特点。
二、方法原理
用气相色谱法分析样品时，各组分都有一个最佳柱温。对于沸程较宽、组分较多的复杂样品，柱温可选在各组分的平均沸点左右，显然这是一种折中的办法，其结果是：低沸点组分因柱温太高很快流出，色谱峰尖而挤甚至重叠，而高沸点组分因柱温太低，滞留过长，色谱峰扩张严重，甚至在一次分析中不出峰。程序升温气相色谱法（PTGC）是色谱柱按预定程序连续地或分阶段地进行升温的气相色谱法。采用程序升温技术，可使各组分在最佳的柱温流出色谱柱，以改善复杂样品的分离，缩短分析时间。
三、仪器设备与试剂材料
1．带有程序升温的气相色谱仪。
2．色谱柱：SE-30 石英柱。
3．1μL微量注射器。
4．甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、异丁醇、异戊醇、环已醇均为色谱纯，按大致1:1的体积比混合制成样品。
四、实验步骤
1．操作条件
柱温：初始温度40℃，保持1min，以7℃?min-1的速度升温至160℃，保持1min。气化室温度：190℃；检测器温度：200℃。进样量：0.5μL。
载气（N2）压力：0.04Mpa；氢气压力：0.1Mpa；空气压力：400mL?min-1。
2．通载气、启动仪器、设定以上温度参数，在初始温度下，点燃FID，调节气体流量。待基线走直后进样并启动升温程序，记录每一组分的保留温度。升温程序结束，待柱温降至初始温度方可进行下
一轮操作。作为对照，在其它条件不变的情况下，恒定柱温175℃，得到醇系物在恒定柱温条件下的色谱图。
1．与恒温色谱法比较，程序升温气相色谱法具有哪些优点？
2．在PTGC中可采用峰高(h)定量，为什么？
（1）醇系物程序升温气相色谱图 （2）醇系物恒温气相色谱图
1－甲醇；2－乙醇；3－正丙醇；4－异丁醇；5－正丁醇；6－异戊醇；7－正已醇；8－环已
醇；9－正辛醇；10－正十二烷醇
实验四 芳烃衍生物的高效液相色谱分析
一、实验目的
1. 学习高效液相色谱(HPLC)的分离和测定原理。
2. 学习HPLC的基本操作。
3. 了解反相HPLC分离和测定有机化合物的方法。
二、实验原理
高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置、进样器、色谱柱、检测器、
恒温器、记录仪等主要部件。贮液器中贮存的载液经过脱气、过滤后由高压泵输送到色谱柱
入口。当采用梯度洗提时一般需要用双泵或二元及多元泵系统来完成输送。试样有进样器注入载液系统，而后送到色谱柱进行分离。分离后的组分有检测器检测，输出信号供给记录仪或数据处理装置。如果需要收集馏分作进一步分析，则在色谱柱一侧出口将样品馏分收集起来。
高效液相色谱仪的主要部件有：
（1）高压输液泵： 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。
为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液体的流动相高速通过时，将产
生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。
高压输液泵应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性。
（2）梯度淋洗装置：梯度淋洗装置又可分为
外梯度：利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，
混合后进入色谱柱。
内梯度：一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。
（3）进样装置：流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置。
（4）高效分离柱：柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
（5）液相色谱检测器：常用检测器有如下几种。
a.紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。具有灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱等特点。
b.光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图。
c.示差折光检测器 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比；通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）； 灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；有偏转式、反射式和干涉型三种类型。
d.荧光检测器 高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应。
根据高效液相色谱法的分离原理不同，有液-液分配色谱、液-固吸附色谱、离子交换色谱、空间排阻色谱、离子对色谱、离子色谱等方法。
HPLC具有分离效率好，灵敏度高，分析速度快等特点。凡能进入液相的很多有机化合物都可以用这种方法来进行分离和测定，本实验采用反相HPLC来测定苯基衍生物。固定相为极性较弱的十八烷基酸性硅胶，在这类固定相微粒上，上述物质具有适中的吸附力，当用极性溶剂淋洗时，能得到较好的分离。苯环上烷基取代链越长，相对来说，洗脱较为困难，因而保留时间tR就较长，样品被分离后，用紫外光度检测器检测，用色谱工作站对数据进行处理。
三、仪器与试剂
1. Waters高效液相色谱仪
2. 紫外光度检测器：可变波长190-700nm。
3. 高压六通进样阀。
4. HPLC数据工作站。
5. 色谱柱C18，4.6mm×250mm。
6. 微量进样器，20?L。
7. 流动相：甲醇：水(80/20，V/V)；流动相流速：1.0mL/min
8. 甲醇，苯，甲苯，乙苯。甲醇为色谱纯。水为二次重蒸馏水。
四、实验步骤
1. 打开电源，待电源升到220V并稳定后，打开高压泵检测器及色谱数据工作站，至工作状态，流动相流速调至1.0mL/min。
2. 调整检测器工作状态，使测定波长?=254nm，灵敏度取适当值，并使基线自动校零。
3. 根据实验条件，将仪器调至进样状态，待仪器液路与电路系统达到平衡，记录基线平直时，即可进样。
4. 用注射器注入适量样品，开始淋洗，得色谱图，重复进样两次。
五、结果处理
1. 采用标准比较法计算分析结果。
2. 利用色谱工作站求得各组分含量及分离度。
六、问题与讨论
1. 在HPLC中，为什么可利用保留值定性？这种定性方法你认为可靠吗？
2. 本实验为什么采用反相液相色谱，试说明理由。
3. HPLC分析中流动相为何要脱气，不脱气对实验有何影响?