xxxx疾病预防控制中心
关于报送20##年病媒生物防控工作监测
方案的报告
xxx：
病媒生物监测是疾病预防控制中一项重要的系统性基础工作。为确保监测工作的科学、规范、统一,监测数据的真实、可信,根据全国爱卫办制订的《四害密度监测实施方案》的要求,结合我县实际，现将中心20##年病媒生物防控工作监测方案呈报，请审阅！
xx疾病预防控制中心
xx年xx月xx日
xx疾控中心办公室 xx年xx月xx日印发
20##年病媒生物防控工作
监测方案
病媒生物监测是疾病预防控制中一项重要的系统性基础工作。为确保监测工作的科学、规范、统一，监测数据的真实、可信，根据全国爱卫办制订的《四害密度监测实施方案》的要求，结合我县实际，特制定此监测方案。
一、背景
鼠、蚊、苍蝇、蟑螂等病媒生物不仅可以直接通过叮咬和污染食物，影响或危害人类的正常生活，更可以通过多种途径传播一系列的重要传染病。病媒生物性传染病是人类共同面临的严峻挑战之一。
二、监测目的
(一) 掌握病媒生物的种类、数量、分布及季节变化，为预测预 报和处理应急事件积累基础数据。
(二) 为制定科学合理的病媒生物防制方案提供依据。
(三) 分析病媒生物的长期变化和当地传染性疾病的相关性，为 病媒生物性传染病的预防控制提供技术支撑。
三、监测内容和方法
(一) 鼠密度监测
1.各街道监测场所及数量（县城区设3个监测点）
（1）外环境：建筑工地（拆迁工地）、公共绿地、单位、居民院内、湖河两岸100米延长线，共计500延长线，如街道辖区内无建筑拆迁工地或湖河，则将监测数量加至其他场所类型中。
（2）室内餐馆2个、宾馆饭店（或招待所）1个，单位（机关、企业、学校等）食堂1个，农贸市场1个，食品制售或商场1个。
监测场所不固定，每次在辖区内选择不同场所类型按要求数量进行监测。
2、监测时间：每年4月、9月各监测1次，全年共监测2次。
3、监测方法
(1）外环境：采用目测鼠迹法，记录外环境500米延长线范围内所观察到的鼠洞、鼠粪等鼠迹数。密度单位为：鼠迹数/100米
(2）室内;采用粉块法，将粉块布置于室内鼠类经常活动或易于栖息的场所，记录放置12小时后的鼠迹数，密度单位为“阳性数/块”。
(3)统计和计算:鼠密度（%）==阳性数/粉块总数
4、监测器材：
（1）、布粉块板：20×20㎝的方木块60个。
（2）、滑石粉：60袋，规格：1.0㎏/袋。
（3）、医用纱布：规格30X60㎝，40张。
（4）、木棍：规格（25×￠2），30根。
（5）、表格：现场监测记录表，汇总表。
5、布粉块方法：
（1）将纱布折成双层，中央放滑石粉300--400g，用细线捆扎，做成粉包。
（2）在调查场所，从墙角基将粉板开口对着墙沿，用木棍轻打粉包，做成20×20㎝大小，厚1--2㎜的薄粉块。注意布粉块时厚薄必须均匀，靠墙、角或柱必须布粉块，与墙不能留缝隙。
室内：室内≤7平方米房间1块，7—15平方米房间2块，房间面积超过80平方米顺墙基每10米墙根布一块。
室外：顺墙根每间隔5米布一粉块。
（3）于下午6:00---8:00布粉块,次日晨6:00—8:00检查。
检查鼠迹方法:用电筒光斜照射粉块,观察鼠脚印,鼠前腿为四趾,后腿为五趾，鼠痕迹、鼠粪等。
（4）检查时发现以下情况视为无效粉块：撒粉后扣盆遮盖 、擦去脚印、有意撒水、扫去粉块。
注意事项：室内布点应先通知对方，维护监测现场，早晨定时开门，监测前做好宣传告知，防止误伤儿童和宠物。监测中使用鼠布袋并用麻醉剂处理，防止死鼠的体外寄生虫游离而叮咬监测人。
(二) 蚊密度监测
1. 各街道监测场所及数量（城区设3个调查点）
县城区按地理位置分设xx、xx、xx3个调查点，监测时从3个点中随机抽取1-2个进行监测。每监测点选择有代表性的居民住户1户，每户选择卧室1-2间，单位1个，检查1-2个房间，检查外环境。
2、监测时间:每年的6---9月各监测1次，全年共监测4次。
3、监测方法:
(1）诱蚊灯法,每处使用诱蚊灯1只，监测从7:00后开始，连续诱集2小时以上。将集蚊盒取出，鉴定种类、性别并计数。
(2）在居民区和单位，检查各类有水容器，坑洼积水中有无蚊虫幼虫（或蛹），密度单位为：有蚊虫幼虫（或蛹）的积水处数/有积水处数
(3）对池塘和河流，用500ml长柄勺取水，检查有无蚊虫幼虫（或蛹），每隔5m取水1勺，不少于20勺。密度单位：有蚊虫幼虫（或蛹）的勺数/总勺数
4. 统计和计算
(三) 蝇密度监测
1. 各街道监测场所及数量（城区设3个调查点）
县城区按地理位置分设xx、xx、xx3个调查点，每个调查点每次选监测点3个，其中：垃圾中转站1个，餐馆（饭店、酒楼）1个，副食店1个、单位食堂1个、居民区1个、农贸市场1个随机监测。
监测场所不固定，每次在调查点内选择不同场所类型按要求数量进行监测。
2. 监测时间：每年5月—9月进行监测，全年共监测5次
3. 监测方法
（1）室外：采用目测法，记录公厕和垃圾中转站内外环境以及居民一楼楼道中视野范围内存在的成蝇数，密度单位为：“成蝇数/视野”
（2）室内：采用粘蝇条法，将粘蝇条悬挂于苍蝇出没和停留点，粘蝇条数量按每20平方米一条计挂，检查记录24小时后粘捕到的蝇数。密度单位为“粘捕蝇数/条”。
（3）统计和计算
蝇密度（成蝇数/视野）=目测的成蝇总数/目测的视野数
蝇密度（粘捕蝇数/条）=捕获成蝇总数（只）/粘蝇条总数
（四) 蟑螂密度监测
1. 各街道监测场所及数量（城区设1个监测点）
监测餐馆2个，宾馆饭店（或招待所）1个，医院1个，单位食堂1个，食品制售或商场（店）1个。监测场所不固定，每次在辖区内选择不同场所类型按要求数量进行监测。
2. 监测时间;每年8月进行监测，全年共监测1次。
3. 监测方法:采用粘蟑纸法,将粘蟑纸放置于蟑螂经常活动或藏匿的部位，检查记录放置24小时后粘捕到的蟑螂数，密度单位为“粘捕只数/张”。每个餐馆布放3张粘蟑纸，每个宾馆饭店（或招待所）、医院、单位食堂、食品制售或商场（店）各布放6张粘蝇蟑纸，每次监测共在5类场所布放30张粘蟑纸。布放的场所统一用粘蟑纸调查。用甜鲜面包为诱饵(2克/片)，餐饮和宾馆布放在操作间和餐厅，医院布放在病房。
4. 统计和计算
蟑螂密度（粘捕个数/张）==粘捕蟑螂只数/粘捕纸总数
四、数据收集、分析、反馈
每次监测结束后，做好登记汇总，并在年度监测全部结束后，进行全县病媒生物监测结果统计、分析，写出综合报告。
附表：1.鼠密度监测记录表（外环境）
2.鼠密度监测记录表（室内外）
3.蚊密度监测记录表（居民区、单位）
4.蚊密度监测记录表（池塘、河流）
5.苍蝇密度监测记录表（粘蝇条法）
6.苍蝇密度监测记录表（目测法）
7.蟑螂密度监测记录表
表1
xx疾控中心
病媒生物监测——鼠密度监测记录表（外环境）
监测时间： 年 月 日 监测范围___________________
监测方法： 气温： ℃
监测人：_____________________________ 审核人：_____________________________
表2
xx疾控中心
病媒生物监测——鼠密度监测记录表（室内外）
监测时间： 年 月 日 监测范围___________________
监测方法： 气温： ℃
监测人：_________________________ 审核人：_____________________________
表3
xx疾控中心
病媒生物监测——蚊密度监测记录表（居民区、单位）
监测时间： 年 月 日
监测方法： 气温： ℃
监测人：_________________________ 审核人：_____________________________
表4
xx疾控中心
病媒生物监测——蚊密度监测记录表（排水沟、河流）
监测时间： 年 月 日
监测方法： 气温： ℃
监测人：_________________________ 审核人：_____________________________
表5
xx疾控中心
病媒生物监测——苍蝇监测记录表（室内）
监测时间： 年 月 日
监测方法： 粘蝇条法 气温： ℃ 风力 级 晴□ 多云□ 阴□
监测人：_________________________ 审核人：_____________________________
表6
xx疾控中心
病媒生物监测——苍蝇监测记录表(室外）
监测时间： 年 月 日
监测方法： 目测法 气温： ℃ 风力 级 晴□ 多云□ 阴□
监测人：_________________________ 审核人：_____________________________
表7
xx疾控中心
病媒生物监测——蟑螂监测记录表
监测时间： 年 月 日
监测方法： 气温： ℃ 风力 级 晴□ 多云□ 阴□
监测人______________________ 审核人：________________________
第二篇：全国病媒生物抗药性监测方案(试行)4
全国重要病媒生物抗药性监测（试行）方案
1 背景... 2
1.1 抗药性监测在疾病预防控制中的重要性... 2
1.2 抗药性概况... 2
1.3 抗药性监测的基础条件... 3
1.3.1 疫情控制的需要... 3
1.3.2 人民生活和社会与经济的需要... 3
1.3.3 已有的工作基础... 4
1.4 当前抗药性监测中存在的问题... 4
1.4.1 专业技术人员缺乏... 4
1.4.2 测定方法不统一... 4
1.4.3 抗药性监测结果的利用率低... 4
2 监测目的... 5
2.1 掌握抗药性水平，指导防制... 5
2.2 制定控制预案，提高疾控能力... 5
3 监测的组织、分工和职责... 5
3.1 监测网络... 5
3.2 分工和职责... 5
3.2.1 中国疾病预防控制中心传染病所... 5
3.2.1 省(自治区，直辖市)疾病预防控制部门... 5
4 监测内容和方法... 5
4.1 蚊虫抗药性监测... 5
4.1.1 靶标蚊虫及监测点的选择... 5
4.1.2 监测时间... 6
4.1.3 试虫采集... 6
4.1.4 监测药剂... 6
4.1.5 设施和器材... 6
4.1.6 监测方法... 6
4.1.6.1 幼虫浸渍法... 6
4.1.6.2 成蚊监测法... 7
4.1.7 统计与计算... 7
4.2 家蝇抗药性监测... 7
4.2.1 监测点的选择... 7
4.2.2 试虫采集... 7
4.2.3 监测药剂... 7
4.2.3 设施和器材... 8
4.2.4 监测方法... 8
4.2.5 数据统计... 8
附录1淡色库蚊对化学药剂的抗药性测定原始记录表... 9
附录2 白纹伊蚊对化学药剂的抗药性测定原始记录表... 10
附录3中华按蚊对化学药剂的抗药性测定原始记录表... 11
附录4 家蝇对化学药剂的抗药性测定原始记录表... 12
附录5 中华按蚊测试基本情况记录... 13
附录6 测试杀虫剂的推荐使用浓度... 13
附录7 推荐使用敏感基线... 13
附录8 成蚊测定用药纸的计算... 13
附录9 关于化学杀虫剂对昆虫的毒力回归线统计问题... 14
1. 使用国际通用的统计软件POLO－PC. 14
2. 使用具有我国知识产权的DPS数据处理系统... 15
附录10 关于敏感基线的现状和设想... 16
1 建立敏感性基线的重要性... 16
2 昆虫产生敏感性差异的原因... 16
3 如何建立敏感基线... 17
根据卫生部《20##年卫生应急工作要点》中“提高卫生应急能力”的精神，和卫生部发布的20##年卫生工作要点中“大力开展爱国卫生运动”的要求，落实中国疾病预防控制中心的关于重要病媒生物年度工作计划，特制定本方案。方案的实施能够指导和推进“十一五”期间我国重要病媒生物控制水平、提升突发公共卫生事件中病媒生物控制技术支撑水平、规范我国重要病媒生物抗药性监测方法。
抗药性是影响全球公共卫生、农业、林业、畜牧业等领域中有害生物控制的重要问题，是影响媒介生物性传染病疾病预防控制的关键因素。抗药性的产生和发展与药剂的使用有非常密切的关系。开展和加强重要病媒生物抗药性监测，可以指导化学药剂的科学合理使用，提高控制效果，延缓抗药性发展速度，减少人畜中毒事件的发生，保护有益生物，维持生态平衡。
1 背景
1.1 抗药性监测在疾病预防控制中的重要性
目前，我国登革热、疟疾、鼠疫、肾综合征出血热、肠道传染病（如霍乱、细菌性痢疾）等疫区处理中，化学控制是其媒介生物控制的主要措施。通过对常用化学药剂的敏感性调查和抗药性动态监测，可以选择并储备适宜的控制药剂，针对疫情种类、疫区的病媒生物种类、疫情的发生季节和生境等背景材料制定“病媒生物应急控制预案”，提高我国在传染病预防控制中病媒生物控制能力。
1.2 抗药性概况
据统计，全球几乎所有病媒生物（如蚊类、蝇类、鼠类、蚤类等）都有产生抗药性的报道。据统计，全世界已经有90种蚊虫对一种或几种杀虫剂产生抗性，其中按蚊51种、库蚊20种、伊蚊19种。51种按蚊中，对DDT产生抗性的有49种，有机磷抗性24种，氨基甲酸酯14种，拟除虫菊酯10种。产生抗性的库蚊有20种。家蝇的抗药性问题在我国十分突出，对DDT、六六六等有机氯类，对敌百虫、敌敌畏、马拉硫磷、毒死蜱等有机磷类，对残杀威等有机磷类，对二氯苯醚菊酯、胺菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯等拟除虫菊酯类药剂，都已经产生了不同程度的抗药性。
1978年，全国蚊虫抗性调查显示：淡色库蚊对有机氯类杀虫剂产生抗性，且无明显的区域性差异；淡色库蚊对有机磷类杀虫剂抗性在我国的东部高于西部。中华按蚊对DDT的抗性现象发生普遍。在1984-1986年的调查显示，淡色库蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂普遍产生抗性。在二十世纪90年代，淡色库蚊对溴氰菊酯的抗药性趋势显示，东南沿海高于华北和东北，城市高于农村。目前，淡色库蚊、白纹伊蚊、家蝇、中华按蚊、三带喙库蚊在我国多数地区已经产生了不同程度的抗药性，印鼠客蚤在广东省、云南省产生抗药性，褐家鼠、黄胸鼠、小家鼠在我国的多数分布区也对抗凝血剂产生抗性。鉴于目前媒介生物性传染病发生的严峻形势，必须加强我国主要病媒生物抗药性监测工作。
1.3 抗药性监测的基础条件
1.3.1 疫情控制的需要
媒介生物性传染病占我国法定传染病的1/3，控制病媒是控制这类疾病的有效措施之一，化学药剂是快速降低媒介密度的必须手段，其依据是控制预案。了解当地病媒对常用化学药剂的敏感程度、掌握有效药剂种类及其使用技术、制定针对性的控制预案，以应对可能出现的疫情。
1.3.2 人民生活和社会与经济的需要
随着社会和经济的发展，人们的健康意识增强。控制能够影响人类健康和生活的病媒生物，倍受各界人士的关注。无论在大型活动（如奥运会、亚运会、世博会等）、大型工程（如三峡工程、南水北调、青藏铁路等），还是在市民群众的出游和日常生活中，对公共卫生要求更高，对环境保护的意识更强，这些都要求我们既要控制有害生物，又要绿色环保，抗药性调查可以使我们科学用药、少用药。
1.3.3 已有的工作基础
由于病媒生物控制在我国疾病预防控制中的重要作用，国家对此非常重视，全国爱国卫生委员会是我国的病媒生物控制的积极推动者，在此平台上开展了一系列工作，如于二十世纪70年代末进行的全国蚊、蝇、鼠的抗药性监测，在全国范围广泛进行，基本摸清了当时的抗药性现状和发展动态，奠定了抗药性监测的理论基础和本底资料，同时也培养了大量的专业技术人员。
针对重要媒介生物性传染病和具有严重骚扰性的媒介，进行抗药性调查。调查以WHO的测定方法为基础，统一检测方法，成果与信息共享。与此同时，也进行抗性机制、抗性遗传规律、抗药性治理策略等的研究，对我国疾病预防控制和环境卫生的改善起到积极作用。
另外，在全国重要病媒生物监测正在运行，在该平台的支持下，使对抗药性的监测网络化成为可能，可以利用已有的人才、物资和系统资源，丰富各级疾控系统的病媒生物预防控制工作，为了实现病媒生物可持续控制，提高疾控能力。
1.4 当前抗药性监测中存在的问题
1.4.1 专业技术人员缺乏
二十世纪90年代，由于工作经费紧张和工作重心的转移，全国抗药性协作中断，使一些从事抗药性监测的专业技术人员离开原工作岗位，使病媒生物控制的发展受到极大损失。
1.4.2 测定方法不统一
抗药性的检测和研究，主要集中在各级疾控机构、研究所、大学等领域，通过对近20多年发表的文献统计，出现试验方法不一致，即使相同的方法，试验条件不同、试虫不统一、供试药剂各异、死亡率判断标准不一致、数据统计方法各异等现象，致使获得资料间可比性差，不能实现资料的共享。
1.4.3 抗药性监测结果的利用率低
对病媒生物的监测是为了指导用药，科学合理用药，进而制定抗性治理方案、疫情控制预案，最终为疾病预防控制提供理论依据。由于抗药性的发生有区域性，不同的病媒生物、不同的药剂类型其抗性机制不同，只有充分利用抗药性监测和研究的结果，实现成果共享，才能提供资料的利用率，更好地为疾控服务。
2 监测目的
2.1 掌握抗药性水平，指导防制
掌握我国重要病媒生物对主要化学药剂的抗性水平，了解抗性动态和发展规律。
2.2 制定控制预案，提高疾控能力
为病媒生物控制中药剂的选择和使用提供科学依据；针对不同疫情、不同地区、不同病媒生物制定药剂的储备和使用预案。
3 监测的组织、分工和职责
3.1 监测网络
以中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室为依托，以各省(自治区，直辖市)为监测试点单位，监测点由监测试点设立。
3.2 分工和职责
3.2.1 中国疾病预防控制中心传染病所
负责《全国重要病媒生物抗药性监测方案》（以下简称《方案》）的制定、组织、协调和督导；承担抗药性监测的技术指导和培训，提供监测药剂的标准样品，负责监测信息的收集、整理、分析、总结和反馈；并进行监测工作的督查和质量控制。
3.2.1 省(自治区，直辖市)疾病预防控制部门
按照《方案》要求，落实开展辖区内监测工作；确定一名主管领导负责协调，督促检查监测方案落实；按时上报、分析监测结果。
4 监测内容和方法
4.1 蚊虫抗药性监测
4.1.1 靶标蚊虫及监测点的选择
淡色库蚊/致倦库蚊（幼虫）、中华按蚊（成虫）、白纹伊蚊（幼虫）为监测对象。
各监测试点选择依据：（1）当地媒介生物性传染病的发生情况；（2）相关疾病媒介生物的种类和发生强度；（3）病媒生物对人的骚扰程度等选择。监测点要考虑地理分布（经纬度、生境），每省选两个监测点进行。监测点要相对固定。
4.1.2 监测时间
在当地的发生高峰期，每年进行一次，年度间的测定时间相对固定。
4.1.3 试虫采集
淡色库蚊：雌成蚊100头以上，或幼虫300头以上，或淡色库蚊卵块50个以上，以居民区为主（依据：自然情况下，昆虫抗药性的等位基因频率为10－6～10－8，抗性个体百分率为10－1。）。
白纹伊蚊：幼虫采集在150头以上，成蚊诱集在30头以上（伊蚊捕获成蚊的难度较大）。
中华按蚊：在牲口棚内采集成蚊100头以上、或在稻田、积水等处采集300头以上幼虫。
抗药性监测，在采集试虫的当代或室内饲养的1～2代进行。
4.1.4 监测药剂
拟除虫菊酯类 溴氰菊酯、氯氰菊酯、氯菊酯；有机磷类 敌敌畏、毒死蜱、倍硫磷；氨基甲酸酯类 残杀威。根据当地用药情况进行药剂的选择。（需要好好讨论）
4.1.5 设施和器材
配备抗性监测实验室，有测试室或光照培养箱（可以调解温湿度和光周期），蚊虫饲养室，有通风橱、烘箱、防蚊驱避剂、防蚊罩等防护用品，诱蚊灯、吸蚊器、采集勺等蚊虫的采集器具。
有电子天平（感量为0.1毫克），200微升、1000微升移液器，200ml烧杯等。
有计算机、数据处理软件。
4.1.6 监测方法
4.1.6.1 幼虫浸渍法
以4龄初幼虫为测试对象，以丙酮将原药稀释，将待测药剂配置5～7个系列浓度，即在200ml的烧杯中加入99ml脱氯水和1ml相应的药液（最后一次稀释用水为溶剂），加入30头试虫，以200ml脱氯水为对照。试虫在25℃、相对湿度为80±10％的条件下放置24小时，调查并记录各处理的死亡数。死亡判断标准，用锐器触动不能逃逸的幼虫为死亡。试验重复3次。对照死亡率超过20％，试验无效。
4.1.6.2 成蚊监测法
药纸的制备 将白油和乙醚(AR)按1∶2比例混合作为溶剂。杀虫剂按需要量溶解其中，配成一定浓度（附录4），吸取2.14毫升均匀滴于16厘米×12.5厘米的新华1号滤纸或其他质量相近的滤纸上。2小时后待乙醚完全挥发即可应用。
药纸制备后应在6小时内使用，如需要可以把l0－20张药纸用大小相同的玻璃板夹紧，用橡皮膏把间缝封实，再装入黑纸袋中，在较低温下大约可以存放一个月，但一经开启即不能储存，必须在两三天内用完，如果已经装入接触筒，就只能用一次。
先把恢复筒接装在放隔板的一面，用吸蚊器吸取1～2只雌蚊吹入筒内，然后关闭隔板，在隔板另一面装上已衬贴药纸的接触筒，把隔板抽开，将恢复筒内蚊虫轻吹入接触筒，迅速关上隔板，将筒平放，即开始计算接触时间，完毕后再抽开隔板将蚊虫再吹入恢复筒，关上隔板，将筒直放，用浸有5％葡萄糖水的棉花团置于尼龙网上。室温27±1℃，无论测定时间的长短，皆从接触完毕后24小时计算死亡率。为了便于蚊虫在恢复筒内停留，可用白纸衬贴在筒内上端l／2或2／3，空出下端，以便于观察死亡掉下的蚊虫。每剂量应至少测40只蚊，实验重复3次。
4.1.7 统计与计算
用POLO软件或DPS软件进行数据统计，获得致死中浓度（LC50）值及其95％置信限，LC90及其95％置信限，毒力回归线的斜率b值。
4.2 家蝇抗药性监测
4.2.1 监测点的选择
监测点要考虑地理分布（经纬度、生境），每省选两个监测点进行。监测点要相对固定。
4.2.2 试虫采集
成蝇100头以上、幼虫300条以上，以居民区为主。
4.2.3 监测药剂
拟除虫菊酯类 溴氰菊酯、氯氰菊酯、氯菊酯；
有机磷类 敌敌畏、辛硫磷、毒死蜱；
氨基甲酸酯类 残杀威。
4.2.3 设施和器材
有抗性测试室或光照培养箱，有能够控制温湿度的家蝇饲养室。
电子天平（感量0.1毫克），200微升、1000微升移液器，0.05～0.1µL微量点滴器；500mL烧杯；饲养缸；养蝇笼。
在温度为25±1℃，相对湿度70～80%的条件下饲养，成蝇羽化后供给奶粉和白糖（比例为1:1）。
4.2.4 监测方法
用丙酮（分析纯）将原药配成5～7个系列浓度。取3～5日龄，体重为18～20mg的家蝇成虫。把含有乙醚（分析纯）的棉球将指形管口堵塞、轻度麻醉后，选健康雌虫，每处理30只置于平皿中，用点滴器（类型）将药液按浓度由低到高的顺序，点滴于中胸背板上，放入加有少量奶粉的500 mL洁净的烧杯中，以5mL烧杯内放置海绵供水，在温度为25±1℃，相对湿度60%～70%的条件下饲养24 h。记录各处理的死亡虫数。对照以丙酮处理，死亡率超过20％时需要重新进行。试验重复3次。死亡判断标准：凡腹部上翻，六足抽搐，用探针触之不能翻身爬行者判为死亡。
4.2.5 数据统计
用POLO软件或DPS软件进行数据统计，获得致死中浓度（LC50）值及其95％置信限，LC90及其95％置信限，毒力回归线的斜率b值。
附录1淡色库蚊对化学药剂的抗药性测定原始记录表
附录2 白纹伊蚊对化学药剂的抗药性测定原始记录表
附录3中华按蚊对化学药剂的抗药性测定原始记录表
附录4 家蝇对化学药剂的抗药性测定原始记录表
附录5 中华按蚊测试基本情况记录
1. 测定人 ，单位： 。
测定日期： 年 月 日。
2. 试虫来源： 省（市、自治区）、 区（县）、 街道（村）、生境 。试虫名称（中文） ，（拉丁文） , 性别 ,龄期 ,生理状态:吸血□、未吸血□、半怀孕□、怀孕□。
测试杀虫剂：药剂来源 ，有效期 年 月 日，药剂的储存条件 。
3. 背景资料
杀虫剂使用: 处理蚊帐□；室内滞留喷洒□；使用灭幼剂□；农田用药□.
试虫的采集方式：幼虫□，F1后代□，人诱法诱捕□，动物诱法诱捕□，室内捕获□，灯诱法□、其它□。如果采集幼虫注明：稻田□、雨水坑□、河边□、生活污水□、其它□。
附录6 测试杀虫剂的推荐使用浓度
附录7 推荐使用敏感基线
附录8 成蚊测定用药纸的计算
WH0对纸上的剂量标准系以杀虫剂在白油中的浓度计算。如混合液的l％实际为0.3 3％。按照这种方法，每平方米滤纸滴混合液应为107.1毫升，乙醚全部挥发后仅残留白油3 5.7毫升，如含药量1％，即为0.357克。滤纸的面积定为16×12.5=200平方厘米，为1平方米的1／50。WH0多年来皆以杀虫剂在溶剂中的百分率为剂量标准，如溴氰菊酯的标准剂量为0.025％，实际每平方米药量0.00 8 9克。WH 0专家委员会认为百分率与墙面药量无直接联系，建议今后使用“克／平方米’’的计量单位。
附录9 关于化学杀虫剂对昆虫的毒力回归线统计问题
建议使用对大家所公认的统计软件，这样可以大大提高计算速度，减少出错的机会。基本具有快速、简便、准确的特点。常用的统计软件有POLO－PC，SAS，BA，DPS等多种。
1. 使用国际通用的统计软件POLO－PC
LeOra Software POLO-PC, Berkeley, Calif
Russel R, Robertson J L, Savin N E. POLO: a new computer program for probit analysis. Bull Entomol Soc Am. 1977;23:202–213.
目前我们一直使用其它单位给的软件，其中有一些参数不能得到，我们正在连续一些国际有人，争取尽快由正规渠道购买正版软件。
例 1
=F1
*deltamethrin
0 130 3
0.02 60 60
0.01 60 51
0.005 120 90
0.01125 60 60
0.0075 60 59
0.003 60 42
0.002 60 18
0.0056 30 19
0.00375 30 14
0.0025 30 11
0.0017 30 4
0.001 30 1
Index of significance for potency estimation:
g(.90)=.08179 g(.95)=.12361 g(.99)=.25008
Effective Doses
dose limits 0.90 0.95 0.99
LD10 deltamet .00122 lower .00073 .00061 .00034
upper .00166 .00175 .00196
LD50 deltamet .00309 lower .00248 .00232 .00191
upper .00367 .00382 .00417
LD90 deltamet .00782 lower .00632 .00607 .00557
upper .01088 .01213 .01701
F1
deltamet subjects 630 controls 130
log(L)=-282.4 slope=3.178+-.250 nat.resp.=.021+-.012
heterogeneity=4.01 g=.124
LD10=.001 limits: .001 to .002
LD50=.003 limits: .002 to .004
LD90=.008 limits: .006 to .012
2. 使用具有我国知识产权的DPS数据处理系统
统计结果和POLO的结果相近，经过我们对试验数据核实没有显著差异，即计算的LC50及其95％置信限基本重叠。
例 2
唐启义，冯明光著。实用统计分析及其PDS数据处理系统。科学出版社，2002。
附录10 关于敏感基线的现状和设想
1 建立敏感性基线的重要性
基线是衡量抗药性强弱的尺度，基线不统一就不能在全国范围内进行比较、分析。根据现有文献，很难找到一个统一的标准。以淡色库蚊对溴氰菊酯的使用的敏感基线为例：
程璟侠等使用淡色库蚊德敏感品系其LC50为0.24 μg/mL（程璟侠等，1998）；本实验室长期保存的敏感品系LC50为0.987μg/mL，天津卫生防疫站使用的淡色库蚊德敏感品系其LC50为2.7μg/mL；中国科学院上海昆虫所淡色库蚊敏感品系的LC50值为0.1μg/mL。南京医科大学朱昌亮实验室，引入中国科学院上海昆虫研究所后已在室内传70余代，检测对溴氰菊酯的半数致死浓度(LC50)为0.8μg/L。
问题：1、溶剂对试验结果的影响。2、温度、湿度、光周期对试验结果的影响。3、试虫龄期不同。
敏感基线是相对的，如何建立一系列有代表性的敏感基线，将是我们急待解决的问题。研究目的不同可以基线的表现不同。如抗药性机制研究中使用的敏感基线，一般使用未选育的相同种群的毒力回归线为基线，再使用一个大家公认的敏感基线，尽量使其遗传背景一致。为了进行质量控制，全国性的抗药性监测，敏感基线要有统一标准。
2 昆虫产生敏感性差异的原因
抗药性的主要特点是分布上的区域性、抗性机制和及其遗传机制的多样性。其主要原因有：
（1）抗药性遗传多样性丰富。即使在没有接触任何药剂的情况下，也会对同种杀虫剂表现出约十倍抗药性差异。（例1）。
（2）药剂使用历史和交互抗性的影响。
由于用药背景不同，各地蚊虫对淡色库蚊表现出不同的敏感性水平，如河北省冀州市对溴氰菊酯的敏感性资源保留较好，白淑萍等1999年发表的文章显示，其敏感性比实验室的敏感品系还要敏感，其LC50为0.02μg/mL。
药剂的使用背景可以影响一个种群对杀虫剂的抗药性水平。如DDT与拟除虫菊酯类杀虫剂有交互抗性，二十实际80年代出的测定表明，在很多没有使用过拟除虫菊酯的地区也有抗药性发生。
（3）杀虫剂的作用机制多样，昆虫对药剂的敏感性程度由其行为习性、生理生化和遗传物质的不同所综合决定的。即使是核酸水平的差异不大，还有细胞质水平的差异（例2）。
3 如何建立敏感基线
理论上，敏感基线是没有使用某种杀虫剂，或未使用具有类似作用机制杀虫剂的前提下，采集靶标生物进行敏感性测定的结果。除了对新开发的药物以外，尽量寻找受药剂污染少的区域，获得敏感品系。在我国的不同区域，包括各实验室种群和野外种群，用统一的方法测定，获得敏感品系。
利用已经报道的相对敏感的毒力回归线为基线，但是到1998年以前WHO推荐使用区分计量法来测定抗性的强弱，由于该方法是单剂量处理试虫，试验结果不稳定，适用于抗性发生的早期。随着拟除虫菊酯的大量广泛推广应用，浓度对数与死亡率几率值回归方程——毒力回归线法是国内外的首选方法。
例1 ：Geographic Variation in Susceptibility of Chilo suppressalis (Lepidoptera: Pyralidae) to Bacillus thuringiensis Toxins in China
Fengxia Meng1, 2, Kongming Wu 1, 3, Xiwu Gao2, YUFA PENG1, and Yuyuan Guo1
Table 1. Sampling dates, host crops and development stages of C. suppressalis
Table 2. The response to Cry1Ac in Chilo suppressalis from different locations in China
例2
Tj天津品系经过4代敏感性选育所得LC50与原种群没有显著差异。