HPV检测及临床应用

人乳头瘤病毒概述

人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)属于乳头多瘤空泡病毒科（papovaviridae）乳头瘤病毒属，是一种可引起人类黏膜组织良性及恶性肿瘤的病毒。它于19xx年由Strauss在电镜下发现，是由DNA核心和蛋白衣壳组成的无包膜双链环状DNA病毒，其核心是由7800～7900个碱基对以共价键组成，含有遗传信息的密环状双链DNA，外为72个壳粒包绕，构成对称型的20面体。病毒无包膜，直径为55nm，分子量为54000道尔顿。其感染主要是上皮组织，具有高度的宿主特异性，对人体特异部位的上皮细胞具有亲和力。HPV在人体的温润条件中最易生长增殖，性接触为主要的传染途径，病期在3个月左右者传染性最强。少数情况下，有可能通过接触污染物品感染，如内裤、浴盆、毛巾等传播。分娩过程中，胎儿经过母亲HPV的感染产道或出生后与患母密切接触均可感染。

HPV在人群中极易传播扩散，可通过直接或间接接触交叉传染，其感染部位隐蔽，发病隐匿，不易早期发现，可致多种增生性病变，在女性生殖系统所引起的最常见的恶性肿瘤为宫颈癌。全世界每年约有50万妇女宫颈癌新发病例，其中亚洲约占38万；每年约有23万女性死于子宫颈癌。在不同地区、不同经济状况的国家宫颈癌的发病率和死亡率有着显著的差别，其中80%的病例发生在发展中国家。我国每年约有15万宫颈癌新发病例，每年约有8万人死于子宫颈癌，其死亡率居妇科肿瘤的第二位。近年来，宫颈癌病人数目在逐渐上升，并呈年轻化的趋势。

对宫颈癌的病因学研究可知，HPV感染是子宫颈癌的主要致病因素，99.7%宫颈癌患者存在HPV感染。目前，宫颈癌是人类所有癌症中唯一原因明确、早发现可治疗的癌症，其早期治疗的5年生存率接近100%，晚期治疗5年生存率为20-50%。筛查是目前预防和早期诊断宫颈癌的主要手段。世界各国的妇产科学会均推荐将HPV检测用于宫颈癌的早期筛查，以浓缩高风险人群，便于进行有效的监控、早期发现宫颈癌。

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HPV基因分型检测项目

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TCT与高危型HPVDNA感染在女性宫颈病变中的相关性调查 周丽杰 蒋国英 余苗苗 金辉

作者单位：124010 盘锦，辽河油田第二职工医院检验科

【摘要】目的 评价两种检验方法在女性宫颈病变中存在的相关性，并进行分析验证，为临床的预防和确诊提供依据。【方法】]收集20xx年1月3日-20xx年5月30日来我院就医的同时检测TCT和HR-HPV的患者700例，二者的检测采用美国ThinPrep 、Cervista检测技术。【结果】根据TCT新柏式TBS分级系统报告方案将其划分为未见上皮内病变或恶性病变（NILM）、意义不明的非典型鳞状上皮细胞增生（ASCUS）、非典型鳞状细胞不排除高度鳞状上皮细胞增生（ASCH）、鳞状上皮细胞低度病变（LSIL）、鳞状上皮细胞高度病变（HSIL）、宫颈鳞癌（SCC）将其分为六组，各组间与高危型HPVDNA的关系:601人NILM中有18例高危型HPVDNA阳性、阳性率3%，60人ASCUS中有13例阳性、阳性率21%，10人ASCH中有4例阳性、阳性率40%，17人LSIL有14例阳性、阳性率82%，11人HSIL有10例阳性，阳性率90%，1人SCC中有1例高危HPVDNA阳性，阳性率100%。采用x2检验或Fisher 精确概率法进行各组间比较，NILM组高危型HPVDNA阳性率低于其它组，而ASCUS组的阳性率又低于LSIL、HSIL组，组间比较差异有统计学意义（p<0.01）

【结论】 两者比对；宫颈病变与高危型HPVDNA感染高度相关。但高危型HPVDNA检测结果为阳性并不等同于宫颈癌或癌前病变，仅提示患病风险较高，可根据医生指导进行随访或进行早期治疗，杜绝宫颈癌的发生。

【关键词】 TCT（液基薄层细胞学） HPV(人乳头瘤病毒) 宫颈病变 HR-HPV(高危型HPV)

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HPV-DNA检测在宫颈癌筛查中的现状与展望

摘要:子宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一,严重危害着广大妇女的健康与生命。早期筛查对子宫颈癌与宫颈上皮内瘤变(CIN)的防治有重要意义。大量研究表明,高危型人乳头瘤病毒(HPV)的持续感染是引发子宫颈癌的主要生物因素,所以HPV-DNA检测对宫颈癌的防治有着重要的作用。现就该检查在宫颈癌筛查中的现状和进展予以综述,为以后的研究提供参考。 关键词:人乳头瘤病毒;宫颈癌;筛查

宫颈癌作为女性第二好发恶性肿瘤,它的防治关键是进行宫颈筛查及上皮内瘤变(cervicalintraepithelialneoplasis,CIN)。而人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)是导致宫颈病变引发宫颈癌的重要环节,尤其是高危型HPV的持续感染,因此越来越多的临床医师使用HPV-DNA检测,它也成为宫颈疾病筛查和诊断中的重要辅助手段之一。现就HPV-DNA的检测对宫颈癌的筛查、诊断的意义进行综述,为以后的研究提供参考。 1 HPV-DNA的检测方法 HPV是一种嗜上皮性病毒,也是一种脱氧核糖核酸(DNA)病毒,检测HPV的方法有免疫组织化学、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹和聚合酶链反应等。19xx年由美国Appliedbiosystems公司推出了在传统聚合酶链反应技术上发展起来的实时荧光定量聚合酶链反应检测,它不仅具有较高的特异性和敏感性,还实现了检测、定量、分型的同步进行,检测简便快速。但其检测费用和实验条件要求较高,目前大都处于实验室阶段,不适合大规模HPV筛查和流 行病学研究[1] 。最近Digene公司推出的杂交捕获二代(hybirdcaptureⅡ,HC-Ⅱ)是唯一通过美国食品药品管理局批准的可在临床使用的HPV-DNA检测技术[2] ,虽然可检出13种高危型、5种低危型HPV及病毒载量,却不能确定其具体型别。Digene公司随后又在杂交捕获法技术的基础上结合基因芯片推出了

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HPV检测及临床应用

人乳头瘤病毒概述

人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)属于乳头多瘤空泡病毒科（papovaviridae）乳头瘤病毒属，是一种可引起人类黏膜组织良性及恶性肿瘤的病毒。它于19xx年由Strauss在电镜下发现，是由DNA核心和蛋白衣壳组成的无包膜双链环状DNA病毒，其核心是由7800～7900个碱基对以共价键组成，含有遗传信息的密环状双链DNA，外为72个壳粒包绕，构成对称型的20面体。病毒无包膜，直径为55nm，分子量为54000道尔顿。其感染主要是上皮组织，具有高度的宿主特异性，对人体特异部位的上皮细胞具有亲和力。HPV在人体的温润条件中最易生长增殖，性接触为主要的传染途径，病期在3个月左右者传染性最强。少数情况下，有可能通过接触污染物品感染，如内裤、浴盆、毛巾等传播。分娩过程中，胎儿经过母亲HPV的感染产道或出生后与患母密切接触均可感染。

HPV在人群中极易传播扩散，可通过直接或间接接触交叉传染，其感染部位隐蔽，发病隐匿，不易早期发现，可致多种增生性病变，在女性生殖系统所引起的最常见的恶性肿瘤为宫颈癌。全世界每年约有50万妇女宫颈癌新发病例，其中亚洲约占38万；每年约有23万女性死于子宫颈癌。在不同地区、不同经济状况的国家宫颈癌的发病率和死亡率有着显著的差别，其中80%的病例发生在发展中国家。我国每年约有15万宫颈癌新发病例，每年约有8万人死于子宫颈癌，其死亡率居妇科肿瘤的第二位。近年来，宫颈癌病人数目在逐渐上升，并呈年轻化的趋势。

对宫颈癌的病因学研究可知，HPV感染是子宫颈癌的主要致病因素，99.7%宫颈癌患者存在HPV感染。目前，宫颈癌是人类所有癌症中唯一原因明确、早发现可治疗的癌症，其早期治疗的5年生存率接近100%，晚期治疗5年生存率为20-50%。筛查是目前预防和早期诊断宫颈癌的主要手段。世界各国的妇产科学会均推荐将HPV检测用于宫颈癌的早期筛查，以浓缩高风险人群，便于进行有效的监控、早期发现宫颈癌。

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开展人乳头瘤病毒检测的可行性报告

一、 基本情况

在全球范围内，每年约有20多万女性死于宫颈癌。在发展中国家，宫颈癌则属于常见多发的妇科肿瘤，排行榜首。我国每年新发现的病例为13.15万，发病率占世界的1/3，患者的年龄越趋年轻，发病史缩短。而宮頸癌是唯一可以通过篩查而预防的癌症。而人乳头病毒是导致宫颈癌的高危（必要）因素。

20xx年在巴黎召开的“EUROGIN”子宫颈癌全球防御大会一致认为：人乳头瘤病毒（HPV DNA）检测是宫颈病变及宫颈癌筛查的最佳方法。20xx年被中国宫颈癌筛查及早诊早治指引采纳。结合高危人乳头瘤病毒（HPV DNA）检测与细胞学检查比单独细胞学检查更具经济效益。

二、 方案

引进人乳头瘤病毒检测，该检测则是对宫颈癌预防及早期发现最有效的检测，不仅可以监测病人病毒的分型，而且对早期宫颈癌的发现和治疗非常有价值。高危人乳头瘤病毒（HPV DNA）阳性比细胞学检测能更准确预测宫颈癌病变。

三、 临床意义

.操作简便快捷, 检测的通量大

.检测灵敏度高，<0.1pg/ml，5000拷贝/ml

.特异性高（双重特异性：引物特异性及探针特异性）

.采用UNG技术及闭管操作，有效消除产物污染风险；

.适合于临床检测高危HPV和宫颈癌的早期筛查

.成本低，经济效益高。

四、 预期效果

人乳头瘤病毒检测适用于：门诊妇科病人的常规检查和体检的筛查；早期宫颈癌的检查；临床上对病人治疗效果的观察。从而可以大大的提高门诊及体检的收入和妇产科的诊断手段，进而提高我院对宫颈癌的治疗和早期的检出率！为我院取得经济效益和社会效应双重效果！

五、 结论

该检测具有极高的临床应用价值，无论从临床意义及其经济效益来看，均具有可行性。人乳头瘤病毒检测产品是针对国内患者人群的现状开发出的具有高临床敏感度和临床特异性的产品。比传统的检测更经济、更精确、更科学、更安全，为我院诊疗宫颈癌开辟一条崭新的道路！

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凯杰digene HC2 HPV DNA检测系统

产品用途及售后服务

旋转混合器

DML3000基因杂交信号放大仪

自动恒温加热器

digene? HC2 HPV DNA 检测试剂盒

凯杰企业管理（上海）有限公司

1 产品用途

1.1 产品原理

基于杂交捕获二代技术（Hybrid Capture? 2，简称HC2），采用专利全长8,000 个碱基对的RNA混合鸡尾酒探针，结合基因杂交、抗体捕获和化学发光信号放大方法，定性且定量地检测世界卫生组织（WHO）国际癌症研究机构（IARC）最新（迄今）公布的13种高危型HPV：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59 和68 型。

*HC2检测是目前临床HPV DNA检测领域的金标准，也是子宫颈癌筛查的首选方法。

1.1.1 HC2技术原理

A.

B.

C.

D.

E. 样本DNA双链被释放并分解为DNA单链； HC2专利全长8000碱基对的RNA探针与DNA单链结合为RNA-DNA杂交体； 固定在微孔壁的特异性抗体（一抗）捕获RNA-DNA杂交体； 携带碱性磷酸酶的特异性抗体（二抗）与RNA-DNA杂交体结合； 基因信号放大仪检测由碱性磷酸酶催化底物释放的化学发光信号。

1.2 临床应用

1.2.1 子宫颈癌筛查

A. 高度的阴性预测值，安全地将子宫颈癌筛查间隔延长至3 年，由此降低的检查成本远远高于因

采用HPV 检测所增加的费用；

B. 发现高危型HPV持续阳性而细胞学涂片未见异常的妇女，因这一人群中有20–25%会在四年内

发展为CIN III或浸润癌；

C. 找出高危型阳性的妇女，浓缩高危人群，便于进行有效监控，早期发现宫颈病变。

1.2.2 ASCUS 的分流与管理

A. 把潜在患子宫颈癌风险妇女从低风险妇女中分离出来，合理指导阴道镜的使用，提高诊断率，

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