实验一：使用高倍显微镜观察几种细胞

一、实验目的：

1、学会如何使用显微镜观察细胞；

2、了解细胞的结构；

3、学会制作临时装片。

二、实验材料：（实验材料可换）松针、动物血液、动物神经细胞永久装片

三、实验用具：  载玻片、盖玻片、蒸馏水、滴管、镊子、土豆、刀片、显微镜（物镜5X、10X、40X）

四、方法步骤：

1、制作松针的临时切片：

（1）取干净的载玻片一个平置于试验台上，用滴管在载玻片中央滴一滴蒸馏水。

（2）将土豆切成条状（截面约：0.5X0.5cm)取两条，将一根松针夹在两个土豆条之间，用刀片削成尽量薄的薄片，削时，手腕不动，靠大臂带动小臂移动刀片。切片数次。从中选取较薄的切片，置于载玻片的水滴上。

（3）从一侧轻轻盖上盖玻片，不要产生气泡。用吸水纸轻轻吸去盖玻片周围的水滴，即完成临时切片的制作。

2、观察切片：

（1）取出显微镜，置于试验台上靠左的位置，打开光源。

（2) 将上步制作好的切片置于显微镜的载物台上，调整载物台位置，使盖玻片对准光源。

（3）使用5X物镜观察切片，使松针切片在视野中心，换成10X物镜，观察松针叶面横切结构。

（4）换成40X物镜观察，注意细胞及细胞内物质结构，画图。

3、 动物血液临时装片的制作及观察（除了不用切片，其他类似）

4、 动物神经细胞永久装片的观察。

五、考点提示：

1、松针的叶面结构是什么样的？

2、动物细胞的结构是什么样的？与植物细胞又什么不同？

3、显微镜的物镜倍数愈大，视野的亮度如何？物体的大小如何？

4、如何调节焦距？

5、如何才能使切片尽量的薄？切片的厚薄对显微镜下观察的效果有什么影响。

实验二：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质

一、实验目的：  

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中学生物教学资料

高中生物实验总结

实验七观察质壁分离和复原

1、条件：细胞内外溶液浓度差，活细胞，大液泡

2、材料：紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞（具紫色大液泡），质量浓度0.3g/mL的蔗糖溶液，清水等

3、步骤：制作洋葱鳞片叶外表皮细胞临时装片→观察→盖玻片一侧滴蔗糖溶液,另一侧用吸水纸吸引→观察(液泡由大到小,颜色由浅变深,原生质层与细胞壁分离)→盖玻片一侧滴清水,另一侧用吸水纸吸引→观察(质壁分离复原)

4、结论:细胞外溶液浓度＞细胞内溶液浓度，细胞失水质壁分离

细胞外溶液浓度＜细胞内溶液浓度，细胞吸水质壁分离复

知识概要：制片观察加液观察加水观察

考点提示：

（1）洋葱为何要选紫色的？若紫色过淡怎么办？

紫色的洋葱有紫色的大液泡，便于观察液泡的大小变化；缩小光圈，使视野变暗些。

（2）洋葱表皮应撕还是削？为何？表皮应撕不能削，因为削的表皮往往太厚。

（3）植物细胞为何会出现质壁分离？动物细胞会吗？当细胞失去水分时，其原生质层的伸缩性大于细胞壁的伸缩性；动物细胞不会发生质壁分离，因为动物细胞没有细胞壁。

（4）质壁分离时，液泡大小和颜色的变化？复原时呢？

细胞发生质壁分离时，液泡变小，紫色加深；当细胞质壁分离复原时，液泡变大，紫色变浅。

（5）若发生质壁分离后的细胞，不能发生质壁分离复原，其原因是什么？ 细胞已经死亡（可能是外界溶液浓度过大，细胞失水过多或质壁分离时间过长）

（6）高倍镜使用前，装片如何移动？

若要把视野中上方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向上移动。若要把视野中左方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向左方移动，因为显微镜视野中看到的是倒像。

（7）换高倍物镜后，怎样使物像清晰？视野明暗度会怎样变化？如何调亮？换高倍物镜后，应调节细准焦螺旋使物像变得清晰；视野会变暗，可调大光圈或改用反光镜的凹面镜来使视野变亮。

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高中生物实验总结

实验一 观察DNA和RNA在细胞中的分布
实验原理：DNA 绿色（甲基绿试剂），RNA 红色（吡罗红试剂）
分布：真核生物DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA；RNA主要分布在细胞质中。
实验结果: 细胞核呈绿色,细胞质呈红色.

实验二 物质鉴定
还原糖 + 斐林试剂～砖红色沉淀

 脂 肪 + 苏丹III ～橘黄色
脂 肪 + 苏丹IV～ 红色

蛋白质 + 双缩脲试剂 ～紫色反应

1、还原糖的检测
（1）材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。
（2）试剂：斐林试剂（甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液），现配现用。
（3）步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL（斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入）→水浴加热2min左右→观察颜色变化（白色→浅蓝色→砖红色）
★模拟尿糖的检测
1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液
2、检测方法：斐林试剂（水浴加热）或班氏试剂或尿糖试纸
3、结果：（用斐林试剂检测）试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。
4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。

2、脂肪的检测
（1）材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。
（2）步骤： 制作切片（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央
               ↓
   染色（滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精）
              ↓
 制作装片（滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片）
              ↓
 镜检鉴定（显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒）

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实验一：使用高倍显微镜观察几种细胞

一、实验目的：

1、学会如何使用显微镜观察细胞；

2、了解细胞的结构；

3、学会制作临时装片。

二、实验材料：（实验材料可换）松针、动物血液、动物神经细胞永久装片

三、实验用具：  载玻片、盖玻片、蒸馏水、滴管、镊子、土豆、刀片、显微镜（物镜5X、10X、40X）

四、方法步骤：

1、制作松针的临时切片：

（1）取干净的载玻片一个平置于试验台上，用滴管在载玻片中央滴一滴蒸馏水。

（2）将土豆切成条状（截面约：0.5X0.5cm)取两条，将一根松针夹在两个土豆条之间，用刀片削成尽量薄的薄片，削时，手腕不动，靠大臂带动小臂移动刀片。切片数次。从中选取较薄的切片，置于载玻片的水滴上。

（3）从一侧轻轻盖上盖玻片，不要产生气泡。用吸水纸轻轻吸去盖玻片周围的水滴，即完成临时切片的制作。

2、观察切片：

（1）取出显微镜，置于试验台上靠左的位置，打开光源。

（2) 将上步制作好的切片置于显微镜的载物台上，调整载物台位置，使盖玻片对准光源。

（3）使用5X物镜观察切片，使松针切片在视野中心，换成10X物镜，观察松针叶面横切结构。

（4）换成40X物镜观察，注意细胞及细胞内物质结构，画图。

3、 动物血液临时装片的制作及观察（除了不用切片，其他类似）

4、 动物神经细胞永久装片的观察。

五、考点提示：

1、松针的叶面结构是什么样的？

2、动物细胞的结构是什么样的？与植物细胞又什么不同？

3、显微镜的物镜倍数愈大，视野的亮度如何？物体的大小如何？

4、如何调节焦距？

5、如何才能使切片尽量的薄？切片的厚薄对显微镜下观察的效果有什么影响。

实验二：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质

一、实验目的：  

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生物实验中颜色反应的总结 1.斐林试剂检测可溶性还原糖

原理：还原糖+菲林试剂→砖红色沉淀

注意：菲林试剂的甲液和乙液要混合均匀后方可使用，而且是现用现配，条件是需要加热。

应用：检验和检测某糖是否还原糖；不同生物组织中含糖量高低的测定；在医学上进行疾病的诊断，如糖尿病、肾炎。

2.苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ检测脂肪

原理：苏丹Ⅲ+脂肪→橘黄色；苏丹Ⅳ+脂肪→红色

注意：脂肪的鉴定需要用显微镜观察。

应用：检测食品中营养成分是否含有脂肪。

3.双缩脲试剂检测蛋白质

原理：蛋白质+双缩脲试剂→紫色

注意：双缩脲试剂在使用时，先加A液再加B液，反应条件不需要加热。 应用：鉴定某些消化液中含有蛋白质；用于劣质奶粉的鉴定。

4.碘液检测淀粉和观察动植物细胞的基本结构的染色剂

原理：淀粉+碘液→蓝色；碘液能使动植物细胞着色。

注意：这里的碘是单质碘，而不是离子碘。

应用：检测食品中营养成分是否含有淀粉；验证光合作用产生淀粉；在观察动植物细胞基本结构——细胞膜、细胞质、细胞核时用碘液做染色剂，使细胞核染上颜色便于观察。

5.DNA的染色与鉴定

染色原理：DNA+甲基绿→绿色

应用：可以显示DNA在细胞中的分布

鉴定原理：DNA+二苯胺→蓝色

应用：用于DNA粗提实验的鉴定试剂

6.吡罗红使RNA呈现红色

原理：RNA+吡罗红→红色

应用：可以显示RNA在细胞中的分布。

7. 台盼蓝使死细胞染成蓝色

原理：正常的活细胞，细胞膜结构完整具有选择透过性能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；死细胞或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

应用：区分活细胞和死细胞；检测细胞膜的完整性。

8.线粒体的染色

原理：健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料，可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。

应用：可以用高倍镜观察细胞中线粒体的存在。

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           实验一 观察DNA和RNA在细胞中的分布 
实验原理：DNA 绿色，RNA 红色 
分布：真核生物DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA；RNA主要分布在细胞质中。 
实验结果: 细胞核呈绿色,细胞质呈红色. 


                        实验二 物质鉴定 
还原糖 + 斐林试剂 砖红色沉淀 脂 肪 + 苏丹III 橘黄色 
脂 肪 + 苏丹IV 红色 蛋白质 + 双缩脲试剂 紫色反应 
1、还原糖的检测 
（1）材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。 
（2）试剂：斐林试剂（甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液），现配现用。 
（3）步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL（斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入）→水浴加热2min左右→观察颜色变化（白色→浅蓝色→砖红色） 
★模拟尿糖的检测 
1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液 
2、检测方法：斐林试剂（水浴加热）或班氏试剂或尿糖试纸 
3、结果：（用斐林试剂检测）试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。 

（3)研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？ 
加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。 
（4）斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？ 
混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。 
（5)还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为： 浅蓝色 棕色 砖红色 
（6）花生种子切片为何要薄？ 只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。 
（7）转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？ 
切片的厚薄不均匀。 
（8）脂肪鉴定中乙醇作用？ 洗去浮色。 
（9）双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？先加A液的目的。怎样通过对比看颜色变化？ 
不能混合；先加A液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。

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生物学中常用的试剂：

1.斐林试剂： 成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液)。用法：将斐林试剂甲液和乙液混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。

2.班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。用于尿糖的测定。

3.双缩脲试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO4(乙液)。用法：向待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，摇匀。如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。

4.苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。用于检测脂肪。可将脂肪染成橘黄色(被苏丹Ⅳ染成红色)。

5.二苯胺：用于鉴定DNA。DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色。

6.甲基绿：用于鉴定DNA。DNA遇甲基绿(常温)会被染成蓝绿色。

吡罗红：检测RNA，呈红色

7、50%的酒精溶液：用于洗去苏丹Ⅲ在脂肪上的浮色。

8、70%的酒精溶液：用于医学临床上的消毒灭菌。

9、95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA

10、15%的盐酸：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。

11. 龙胆紫溶液或醋酸洋红：碱性染料，用于染色体染色时，前者呈深蓝色，后者呈红色 改良苯酚品红染液：检测染色体，红色

健那绿：检测线粒体，专一性让线粒体染色呈蓝绿色

12.20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶）

13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。

14.碘液：用于鉴定淀粉的存在。遇淀粉变蓝。遇糖原变红

15.丙酮：用于提取叶绿体中的色素

16.层析液：(成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93号汽油)可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开。

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