质粒DNA的转化、提取及酶切分析
摘要：目的 构建人Bcl-2基因原核表达载体，并对其酶切鉴定。方法 将Bcl-2重组质粒转化进入经CaCl2法制备的大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选培养充分克隆，然后用碱裂解法分离提取重组质粒DNA，最后用限制性内切酶酶切重组质粒DNA，并跑电泳鉴定。结果 Bcl-2重组质粒成功转化进入大肠杆菌DH5α感受态细胞，成功扩增提取到重组质粒DNA，酶切鉴定出现目的条带，但电泳结果较差，条带差。总结 实验过程中要避免杂菌的污染，重组质粒DNA的提取回收非常重要，如果回收浓度过低，最后跑电泳条带会很差，或者不出现目的条带。
关键词：人Bcl-2基因；质粒转化；CaCl2法；质粒提取；碱裂解法；酶切分析
随着现代分子生物学发展，分子生物学实验技术已经渗透到了生命科学的各个领域中。DNA重组技术是现代分子生物学最基本的操作技术，而质粒是存在于细菌染色体以外的小型环状双链DNA，能自我复制和表达其携带的遗传信息，所以质粒是DNA重组技术中的一种理想载体。进行DNA重组，经常要进行一些细菌转化、细胞转染、PCR扩增、酶切分析和DNA重组等试验，这就需要获得大量纯化的质粒DNA分子。本研究介绍人Bcl-2重组质粒DNA的转化、分离提取和内切酶酶切鉴定。转化是将外源DNA分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状。转化效率直接影响前后试验的进展和工作效率，而感受态细胞的状态是影响转化效率最直接、关键的因素之一。感受态细胞的制备使用CaCl2法，因为CaCl2法转化效率高，简便易行常用。扩增后Bcl-2重组质粒DNA的分离提取使用碱裂解法，因为碱裂解法效果良好，回收效率高且经济[1]。分离获得的重组质粒DNA经限制性内切酶EcoR I酶切，并经琼脂糖凝胶电泳检测，看是否与预计相符合。
1. 材料与方法
1.1 试剂：不含氨苄青霉素的LB液体培养基、含氨苄青霉素的LB液体培养基、100mg/ml氨苄氨基酸溶液、人Bcl-2重组质粒、大肠杆菌DH5α、75%乙醇；碱裂解法试剂溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ，氯仿、异丙醇、蒸馏水；限制性内切酶EcoR1及其缓冲液、1×TAE电泳缓冲液、SYBR Green荧光染料、DNA Maker。
1.2 仪器和器材：加样枪、枪尖、EP管、玻璃涂布器、恒温水浴箱、超净工作台、恒温摇床、恒温培养箱、电泳装置、紫外成像仪。
1.3 方法：CaCl2法、碱裂解法、DNA限制性内切酶酶切分析法。
实验中将人Bcl-2重组质粒转化DH5α扩增菌，转化后在含Amp的培养基上进行筛选，生长的菌落即是含重组质粒的工程菌。扩增重组质粒工程菌获得的质粒作为限制性核酸内切酶的酶切底物DNA，酶切完跑电泳分析。
2. 实验操作
2.1 质粒转化
2.1.1 制备新鲜感受态DH5α大肠杆菌（实验前已经制备好）。
2.1.2 DNA重组子的转化大肠杆菌DH5α，如表1操作：
表1：DNA重组子的转化大肠杆菌DH5α
2.2 质粒DNA分离提取
2.2.1 用接种针调琼脂平板中单菌落于盛有2ml LB液体培养基(含100µg/ml Amp)的试管中，37℃摇荡培养过夜。
2.2.2 取菌液1ml收集在1.5ml的EP管中，10000r/min离心2min，吸弃上清，将离心管倒置于一纸巾上，以使所有液体流出。
2.2.3 在沉淀中加入溶液Ⅰ 250µl，涡旋混匀，静置5min。
2.2.4 加入新鲜配置的溶液Ⅱ 250µl，颠倒5次，溶液变透明、粘稠。
2.2.5 加入溶液Ⅲ 350µl，颠倒混匀，溶液出现白色沉淀。
2.2.6 12000r/min离心2min，将上清转移至吸附柱中。
2.2.7 10000r/min离心30s，弃滤液。
2.2.8 向吸附柱中加洗脱液500µl，10000r/min 离心30s，弃滤液。
2.2.9 将吸附柱换到另一新EP管中，在吸附柱中央加buffer缓冲液20µl，10000r/min离心1min，弃吸附柱，得质粒DNA分离液。
2.3 DNA限制性内切酶酶切分析
2.3.1 在质粒DNA分离提取液中依次加入下列试剂：灭菌的双蒸水11µl，缓冲液2µl，20U/µl EcoR I 2µl，质粒DNA样品5µl，加至200µl EP管中，反应总体积20µl，加盖，混匀后稍离心，37摄氏度水浴反应1h。
2.3.2 配置琼脂糖凝胶，并灌胶。
2.3.3 加样：取6×载样缓冲液5µl加入经酶切后的EP样品管中，轻轻混匀， 用微量移液器取15μl样品加到凝胶点样空中，每排孔需加一份DNA Make做对照。
2.3.4 接通电泳槽电源，跑电泳。
2.3.5 跑胶完毕，在紫外成像仪观察结果。
3. 实验结果
3.1 质粒转化结果
实验组培养基上生长有大量单个白菌斑（如图1所示），阴性对照组培养基上没有菌落生长(如图2所示)，阴性对照组培养基所加感受态细菌是不含人Bcl-2重组质粒的，表明感受态细菌本身没有含抗Amp基因，其在加Amp的平板上不能生长，感受态细菌也未被杂菌污染，而实验组中人Bcl-2重组质粒成功转化DH5α。
3.2 质粒DNA提取和酶切结果
重组质粒DNA提取产物的酶切电泳结果显示(如图4所示)，电泳图中1号加样孔出现两条条带，条带1为pBS(2.96kb)条带，条带2为目的Bcl-2(1.9kb)条带，条带2比较模糊，条带1相对清晰。
图1 实验组 图2 阴性对照组
图3 图4 电泳图谱
4. 讨论分析
4.1 质粒转化结果分析
4.1.1 实验组与对照组不同在于实验组加入了人Bcl-2重组质粒，人Bcl-2重组质粒中带有抗Amp基因，故实验组中人Bcl-2重组质粒转化DH5α工程菌能在含Amp的培养基上生长，而对照组加入的为无重组质粒的新鲜感受态DH5α细菌，细菌不能存活。实验组与对照组对比表明人Bcl-2重组质粒转化成功，为下一步操作打下坚实基础！
4.1.2 实验组菌落生长分布比较均匀，说明涂平板时也图得比较均匀；菌落大小均一，生长状况也一致，未发现杂菌菌落，结合对照组中无菌落生长，表明感受态细菌未被杂菌污染，操作过程中也没有被杂菌污染。实验组菌落生长比较密集，说明平板涂布不太好，加入的菌液过多。菌落较密集的话，在挑选菌落培养时不易操作，不易挑到单个菌落。比较理想的菌落生长情况是生长分布均匀又不密集(如图3所示)，但图3中平板涂布不好，涂平板时把胶弄破了(图3中箭头所示)，涂平板时应小心轻盈。
4.1.3 在实验过程中要注意生物安全，尤其在质粒转化实验中要严格无菌操作，避免杂菌污染。
4.1.4 电穿孔技术与CaCl2法相比，电穿孔技术的转化速度快，转化效率也更高[2],但电穿孔技术需要特殊仪器，成本较高。CaCl2法操作方便，比较常用。在本实验中，从菌落生长比较密集来看，CaCl2法的转化效率已经很好的满足了要求。
4.2 质粒DNA提取和酶切结果
4.2.1 从大肠杆菌细胞中分离提取质粒DNA对接下来的酶切非常重要，提取到的质粒DNA量太少或质量太差都可能在酶切后跑不出条带。碱裂解法提取质粒DNA中，使细菌溶解破坏的主要是NaOH，NaOH同时使细菌中染色体和蛋白质变性，所以，加入溶液Ⅱ这一步比较关键，加入溶液Ⅱ的时间不能过长(不能加完试剂去接电话等)，也不能剧烈震荡，强碱环境中时间不能过长，基因组DNA会慢慢断裂，剧烈震荡也会使基因组DNA断裂。
4.2.2 pBS-Bcl-2重组质粒分子量为4.86kb，其中质粒载体pBS为2.96kb，人Bcl-2 cDNA为1.9kb，酶切电泳可能的结果有4.86kb、2.96kb、1.9kb三条带。结果酶切电泳出现两条条带，2.96kb条带(条带1)和1.9kb条带(条带2)，条带2比较模糊，Maker的条带也没有跑分开，有拖带现象，原因可能是电泳的电压过高，导致Maker跑得过快未能较好分开。条带的亮度主要与DNA的含量有关，DNA的含量越高，条带越亮越粗。质粒DNA的含量和酶切的时间都会影响到酶切的效果，质粒DNA的含量过少，可能最后跑电泳看不到条带；酶切时间过短可能导致酶切不完全，看不到理想的条带。本实验中，如果是酶切不完全，应该会看到三条带，或者只出现4.86kb带，但本实验出现两条带，说明酶切比较完全。条带模糊的原因可能是分离提取到的质粒DNA底物浓度过低，提取的质粒DNA没有经过核酸检测仪测定浓度，只是取5µl质粒DNA底物用于酶切，5µl的质粒DNA底物含量可能过少，远远没有达到2µg。
参考文献：
1. 张泉.朱鸿飞.于可响.薛方明.孙怀昌.ZHANG Quan.ZHU Hong-fei.YU Ke-xiang.XUE Fang-ming.SUN Huai-chang重组大肠杆菌碱裂解方法的改进[期刊论文]-中国生物工程杂志2007,27(2)
2.刘卫今，蒋勇，完迪迪.简单高效的感受态细胞制备和质粒转化体系的建立.安徽农业科学.Journal dAnhui Aoi．Sei．2008,36(7)：2745—2746
第二篇：E.Coli 感受态细胞的制备、质粒DNA的转化、提取与酶切鉴定
E.Coli感受态细胞的制备、质粒DNA的转化、提取与酶切鉴定
制作人：刘如石
生物秀-专心做生物
一. 实验目的和要求
1、通过本实验了解和掌握氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞和质粒DNA转化受体菌细胞的原理与技术；物生2、了解质粒DNA的特性，掌握碱裂解法从大肠杆菌做om心c细胞中分离、提取质粒DNA的方法；.专o-bio秀b3、掌握限制性内切酶的特性、酶解和琼脂糖凝胶电物w.生ww泳的操作方法；
通过本实验了解大肠杆菌感受态细胞制备、DNA转化、限制性内切酶在分子生物学研究中的意义与作用。
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
二.实验原理
1、感受态细胞制备:所谓感受态是指受体细胞处于容易吸收外源DNA的一种生理状态，可以通过物理物生与化学方法诱导形成，也可以自然形成，在基因工做om心c.程技术中通常采用诱导的方法。用于转化的受体菌专o-bio秀-修b细胞一般是限制饰系统（Restriction-.物w生ww的变异株，以防止对导入的外Modification）缺陷
源DNA的切割，用符号R-M-表示。其基本原理是：细菌处于0℃的CaCl2低渗溶液中，会膨胀成球形，细胞膜的通透性发生变化，转化混合物中的质粒DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物黏附于细胞表面，经
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
过42℃短时间的热激处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富的培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖，在选择培养基上可获得所需的转化子。
2、碱裂解法小量制备质粒DNA：碱裂解法是基于物线性大分子染色体DNA与小分子环形质粒DNA的变性生做mo复性的差异达到分离目的的，在心.cpH12.0～12.6的碱性专oo-和i环境中，线型染色体DNA环型质粒DNA氢键会发生b秀.b物性，w断裂，双链解开而变但质粒DNA由于其闭合环型生ww结构，氢键仅发生部分断裂，而且其互补链不完全分离；当将pH值调节到中性并在高盐浓度下，已分开的染色体DNA互补链不能复性而交联形成不溶的网状结构，通过离心，大部分染色体DNA、不稳定的大分子
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
RNA和蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去，而部分变性的闭合环状的质粒DNA在中性条件下很快复性，恢复到原来的构型，呈可溶性状态保存与溶液中，离心后上清中便含有所需要的质粒DNA。
物3、限制性内切酶：又称为内切酶生或限制酶，是一做om心c类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解.专oo-bi秀酶，是体外剪切基因片段的重要工具，主要存在于原核b物w.生ww识别切割特性，催化条件及是生物中。根据限制酶的
否具有修饰酶活性可分为Ⅰ、Ⅱ、III型三大类，Ⅰ类和III类限制性内切酶，在同一蛋白分子中兼有甲基化作用及依赖ATP的限制性内切酶活性。Ⅰ类限制性内切酶结合于特定识别位点，但却随机地切割回转到被结合
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
处的DNA。Ⅲ类限制性内切酶在识别位点上切割，然后从底物上解离下来。故Ⅰ类和Ⅲ限制酶在基因工程中基本不用，II类酶在分子克隆中使用广泛，其基本特点如下：物(1)、专一性地识别并切割特定生的核苷酸序列，如做om心GAATTCcEcoRI识别与切割序列为5`········3`.专oo-bi秀.3`b····CTTAAG····5`物w生ww
8～13个；(2) 、识别的核苷酸数目大多数为4～6个，少数识别
(3)、识别序列大多数为二重对称（回文序列），大多数酶产生的是具有凸出的粘性末端：
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
物生做om心.c专oo-bi秀.b物w生ww
(4)、有不同来源的限制性内切酶可以识别相同的序
列，甚至切割的位点也相同，称为同裂酶或异源同工酶，如HpaII与MspI；有的识别位点不同，但对DNA切割后可产生相同的粘性末端，称为同尾酶，如BamHI与BglII。
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
影响核酸限制性内切酶活性的因素：
DNA的纯度；DNA的甲基化程度；酶切消化反应的温度；
DNA的分子结构；溶液中离子浓度及种类；缓冲液的pH值。
4、琼脂糖凝胶电泳:琼脂糖溶化再凝固后能形成
带具有一定形状、大小与孔隙度的固体基质(密度与琼脂糖浓度相关)；而生理条件下，物核酸分子的糖-磷生酸骨架中磷酸基团呈离子化状态，此将核酸分子置做o因m心c于电场中时，它们会向正极迁移，由于糖-磷酸骨架在.专oo-ib结构上的重复性，相同数量的双链DNA几乎具有等量秀b物w.生ww的净电荷，因此他们能以同样的速度向正极方向迁移。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移率取决于核酸分子本身的大小和构象。分子量较小的DNA分子，比分子量较大的DNA分子，具有较紧密的构型，所以其电泳迁移速率也就比同等分子量的松散型的开环DNA分子或线性DNA分子要快。直接用低浓度的EB进行染
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
色，可确定DNA在胶中的位置。
影响琼脂糖凝胶电泳DNA迁移率的因素：
DNA的分子大小；琼脂糖浓度；DNA构象；电场强
度；
物生做om心.c三．实验材料与设备：专oo-bi秀.b物w1、用品与与仪器：生ww碱基组成与温度；嵌入染料的存在；电泳缓冲液的组成。超净工作台、电热恒温水浴、分光光度计、恒温培养
箱、恒温振荡器、移液器、微型离心管等、台式冷冻高速离心机、旋涡震荡器、电泳仪、电泳槽、紫外透射仪，凝胶成像仪、冰箱、制冰机等；
1.5mL 与0.5mL Eppendorf管、tip头、烧杯、量筒
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
镊子、试管三角瓶、玻璃涂棒、酒精灯、无菌牙签、吸水纸，一次性塑料手套等；
E.coliDH5α受体菌(R-M-)，pGEX-PDIP-r质粒(AmpR)
物2、试剂：生做om心cLB培养基:蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，.专oo-ibNaCl10g/L，琼脂粉15g/L（固体培养基），用10 秀b.物wmol/L的NaOH调节pH为7.0生ww，高压灭菌；
氨苄青霉素贮存液：浓度50-100mg／mL；
含有抗菌素的LB平板培养基：将配置好的LB固体培养基高压灭菌后，冷却到60度左右，加入氨苄青霉素（终浓度为50?g／mL浓度50-100?g／mL）；
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物 0.1mol/LCaCl2：称取1.1g进口无水CaCl2，溶于70mL双蒸水中，定容到100mL，过滤后灭菌；
0.1mol/LCaCl2 15％甘油：100ml 0.1mol/L CaCl2 溶液内含有15ml甘油，高压灭菌；物溶液I: 50mmol/L葡萄糖，生10mmol/L EDTA 做om心.c(pH8.0)；(pH8.0)，25mmol/L Tris-HCl专oo-bi秀.b溶液II: 0.2mol/L NaOH, 1%SDS (现配现用)；物w生w溶液III: 乙酸w钾溶液(3M, pH=4.8)( 60mL的5mol/L KAc, 11.5ml 冰醋酸，28.5mL H2O)；
RNaseA：10mg/ml；
TE缓冲液: 10mmol/L，Tris-HCl, 1mmol/L，EDTA，pH8.0；
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物 5×TBE缓冲液：0.45mol/L Tris－硼酸，0.01 mol/L EDTA, pH 8.0；
10×Loading buffer：1% SDS, 0.05%溴酚兰，50％的甘油；
物生做om70％乙醇；心.c专oo标准分子量片段；-bi秀.b物w核酸内切酶EcoRI (TaKaRa)；生ww无水乙醇；
琼脂糖；EcoRI酶解缓冲液(10×buffer H)；
溴化乙啶（EB）染色液(10mg/ml)。
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
四．操作步骤:
(一) 感受态细胞的制备：
1、从新活化的E.coliDH5α平板上挑取一单菌落，接种于3～5ml LB液体培养中，37℃振荡培养至对数生长物期(12h左右)；生做om心c.2、将该菌悬液以1:100～1:50转接于100ml LB液体专oo-ib培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊秀b.物w后，每隔20～30min测一生ww次OD600，至OD600为0.3～0.5时停止培养，并转装到1.5 mL离心管中；
3、培养物于冰上放置20min；
4、0～4℃，4000g离心10min，弃去上清液，加入1 mL冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液，小心悬浮细胞, 冰浴20分钟；
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
5、0～4℃，4000g离心10min，倒净上清培养液，
再用1.0 mL冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液轻轻悬浮细胞，物冰浴20min；生做om6、0～4℃，4000g离心10min，弃去上清液，加入心.c专oo100 ?L冰冷的0.1mo1／L CaCl溶液，小心悬浮细胞，冰-bi2秀.b物w上放置片刻后，即制成了感受态细胞悬液；生ww8、制备好的感受态细胞悬液可直接用于转化实验，如果在4℃放置12～24h，其转化效率可以增高4～6倍；也可加入占总体积15％左右高压灭菌过的甘油，混匀后分装于1.5ml离心管中，置于-70℃条件下，可保存半年至一年。
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
2、冰上放置20～30min，然后42℃水浴热激90～
120 Sec，迅速冰上冷却2min；
3、立即向上述Ep管中加入0.8mL LB液体培养
基，摇匀后于37℃振荡培养约15～30min，使受体菌恢物生复正常生长状态及表达抗性基因；做om心c.4、取培养液50?L接种于含抗菌素的LB平板培养专o-bio秀b基上，用玻璃涂棒涂匀；物w.生w5、将培养皿放在37℃恒温培养箱培养30 min,待菌w
液完全被培养基吸收后，倒置培养皿，于37℃恒温培养箱内培养过夜(14-16h) ；
（三）碱裂解法小量制备质粒DNA:
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
1、挑取转化筛选的带有目的质粒的大肠杆菌接种到液体培养基中，37℃震荡培养12～16小时；
2、将1.5mL菌液加入Ep离心管中，12000 g离心30 Sec，弃上清液，在吸水纸上扣干；
物生3、加入100mL预冷的溶液I ，于涡旋振荡器上做om心振荡悬浮细菌细胞，尽量使细胞分c散；.专oo-i秀.bb物w生w2＋w4、加入200mL新配制的溶液II, 盖紧管口,快速颠倒离心管,以混匀内容物,冰上放置3－5min;
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
5、加入150ml溶液III, 加盖后颠倒6-7次混匀，冰上放置2～3min；
6、12000 g离心6 min，将上清移入另一干净的Ep物管中；生做om心的c7、加2倍上清体积(约1mL)无水乙醇, 振荡混.专oo匀，室温放置2min.秀-bbi.物w8、12000g离心10min生ww，弃上清液，再用70％的乙
醇洗涤一次，12000g离心1min，离心管倒置于吸水纸上扣干，然后在中空浓缩系统上干燥质粒；
9、加入40mL含20 mg/mLRNaseA的灭菌蒸馏水或TE 缓冲液溶解提取物，室温放置直到质粒完全溶解(约8min)，存于－20℃或直接用于酶切。
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物 质粒图谱:
物生做om心.c专oo-bi秀.b物w生ww
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
(四)提取质粒的酶切鉴定与琼脂糖凝胶电泳：
1、在0.5mL Ep管中依次加入下列溶液于0.5ml离心管中
物生做om心.c专oo-bi秀b.2、轻轻混匀物, 4000g离心10秒，置于37℃水浴中w生ww酶解1.5h。提取质粒DNA 3.0 mL 10×buffer H 1.0 mlEcoRI 2.0 U10 mL1U: 1单位酶通常定义为，在建议缓冲液及温度下，在20 mL 反应液中反应1h，使1 mg DNA完全消化所需的酶量.
3、酶解完成后，加入1.2 ml10×上样缓冲液(或2 ml6×上样缓冲液), 混匀.
4、称取1g琼脂糖，置于三角瓶中，加入100mL 0.5×TBE或1×TAE缓冲液，瓶口倒扣一个小烧杯，将该三角瓶置于微波炉加热直至琼脂糖溶解。
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
5、将梳子放置在制胶槽上，在冷却至60℃左右的琼脂糖凝胶液加入一小滴EB，小心混匀，倒到制胶槽上，直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层，不要产生气泡（厚度约为3～4mm）；
6、室温下静置30min左右，待凝固完全后，轻轻物生拔出梳子。做om心c7、制好胶后将凝胶连同内槽放在含有0.5×TBE.专oo-槽中i或1×TAE缓冲液的电泳使用(注意:电泳槽中的缓b秀.b物冲液应与配胶用的缓冲液成分、浓度一致)。w生ww8、用微量加样器将样品分别加入胶板的样品孔内加完样后的凝胶板即可通电进行电泳（80～100V的电压下电泳，一般情况下，电压/电极间距离应小于
5V/cm），当溴酚兰移动到距离胶板下沿约1cm处停止电泳。
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
9、在紫外灯(310nm波长)下观察染色后的凝胶。DNA存在处显示出红色的荧光条带(在紫外灯下观察
时，应戴上防护眼镜或有机玻璃防护面罩，避免眼睛遭受强紫外光损伤，拍照电泳图谱时，可采用凝胶成象系统)
。
物生做om心.c专oo-bi秀.b物w生ww
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
五. 实验结果报告：
1、转化效率的计算：
做om心.c板菌液体积）专oo-ib转化效率（每微克质粒秀.bDNA的转化子数）＝转化物w生）w子总数（个转化子/w加入质粒DNA的量（μg）
2、质粒提取与酶切鉴定结果，贴上打印实验照
片并标明照片上各DNA条带的含义。物原液总体积/涂转化子总数＝菌落数×（转化反应生
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
六、思考题：
1、何谓感受态细胞？制备感受态细胞的理论依据是什么？
2、为什么通常使用R-M-菌作为物基因工程受体菌？生3、简述CaCl2制备细菌感受态细胞做om及其转化的基本心.c原理。专oo-ib4、根据DNA限制酶的切割特性，催化条件及秀.识别b物w是否具有修饰酶活性可分生ww为几种类型？其中II类限制性内切酶有何特性？
5、在用碱裂解法小量制备质粒过程中I液、II液与III液的作用机理是什么？
6、简述碱裂解法小量制备质粒的原理。
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区
生物秀-专心做生物
Thanks ！物生做om心.c专oo-bi秀.b物w生ww
生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区