实验二理化因素对离体心脏活动的影响
【实验目的】 学习离体心脏灌流法。观察Na+,k+,Ga2+三种离子、肾上腺素、乙酰胆碱及 温度、酸碱度对离体心脏活动的影响。
【实验原理】 心脏的自律细胞能自动地产生有节律的兴奋。离体心脏在适宜的环境和条件 下能较长时间保持心脏的舒缩活动。心脏的正常节律活动有赖于内环境的相 对稳定，改变离体心脏灌流液的理化成分，会影响心脏的舒缩活动。细胞外 爷中的离子浓度、温度、酸碱度、激素及相应药物都可以影响心肌细胞的兴 奋性、自律性、传导性及收缩性。
【实验对象】 蟾蜍
【实验药品和器材】 任式液，0.65%NaCl溶液，2%GaCl2溶液，1%KCl溶液，0.001%乙酰
胆碱溶液，0.01%肾上腺素溶液，3%乳酸溶液，2.5%NaHCO3。BL-420 生物信号分析系统，张力换能器，铁支台，试管夹，蛙类手术器械， 蛙心插管，滴管，大烧杯，棉线，双凹夹，滑轮。
【实验步骤】1.离体蛙心制备
(1)暴露心脏
（2）心脏插管
（3）摘取心脏
2.连接实验装备
3.观察项目
(1) 记录正常心搏曲线并分析其疏密、规律性、幅度、顶点及基线的含义。
(2) 观察Ga2+、K+离子浓度对离体心脏收缩的影响。
(3) 观察肾上腺素和乙酰胆碱对离体心脏收缩的影响。
(4) 酸碱的影响。
【实验结果与分析】
1.（1）Na+浓度对离体心脏收缩的影响
结果：当把全部任式液换成等量0.65%NaCl溶液时，心脏收缩曲线幅度明显降低。之后换以任式液恢复正常。
分析：加入Na+心室收缩能力显著减弱，这是因为细胞外Na+浓度上升，Na+平衡电位升高，导致整体平衡电位升高，当静息电位减少到一定程度时，会有一部分Na+通道不经激活而直接进入失活状态，引起兴奋阈值的升高和兴奋性的降低，最终导致心室收缩幅度减小。洗脱Na+后，心肌细胞静息电位恢复正常，Na+通道恢复活性，兴奋阈值降低，兴奋性升高，心室收缩恢复原来强度。
（2）Ga2+浓度对离体心脏收缩的影响
结果：加入一两滴2%GaCl2时，心脏收缩曲线幅度升高，甚至出现强直。
分析：加入Ga2+后心室收缩能力增强，原因是心肌细胞的肌质网不如骨骼肌发达，储Ga2+量较少，在收缩过程中依赖细胞外Ga2+的内流。在心肌动作电位的平台期，细胞外的Ga2+通过L型Ga2+浓度上升，从而触发肌质网释放大量的Ga2+，从而发动心肌收缩。在一定范围内增加细胞外Ga2+浓度，可以使心肌收缩增强。
（3）K+对离体心脏收缩的影响
结果：在灌流液中加入一两滴1%KCl时，收缩曲线幅度降低，变疏。用任式液洗涤，基本恢复。
分析：加入K+后心室收缩能力显著减弱，这是因为细胞外K+浓度上升，K+平衡电位升高，导致整体平衡电位升高，当静息电位减少到一定程度时，会有一部分Na+通道不经激活而直接进入失活状态，引起兴奋阈值的升高和兴奋性的降低，最终导致心室收缩幅度减小。洗脱K+后，心肌细胞静息电位恢复正常，Na+通道恢复活性，兴奋阈值降低，兴奋性升高，心室收恢复原来强度。
2.（1）肾上腺素对离体心脏收缩的影响
结果：加入一两滴0.01%肾上腺素，收缩曲线变密，幅度增高，换以适量任式液，曲线基本恢复。换用任式液，曲线恢复。
分析：加入肾上腺素后心室收缩能力明显增强，这是因为肾上腺素作用于心肌膜上的β肾上腺素能受体，从而激活腺苷酸环化酶使细胞内cAMP的浓度升高，继而激活蛋白激酶和细胞内蛋白的磷酸化过程，使心肌膜上的Ca2+通道开放概率增加，所以在心肌动作电位平台期Ca2+的内流增加，细胞内肌质网释放的Ca2+也增加，最终效应是心肌收缩能力增强。另外，肾上腺素与心肌膜上的β肾上腺素能受体结合引起的正性变传导作用还可使心室各部分肌纤维的收缩更趋同步化，也有利于心室肌收缩的加强。洗脱肾上腺素后，与β肾上腺素能受体结合的肾上腺素逐渐消失，被激活的腺苷酸环化酶逐渐失活，肾上腺素引起的正性变传导作用也消失，心室收缩能力逐渐下降直至恢复正常。
（2）乙酰胆碱对离体心脏收缩的影响
结果：加入一两滴0.001%乙酰胆碱，曲线变疏，幅度降低。换用任式液，基本恢复。
分析：加入乙酰胆碱后心室收缩能力明显减弱，心率明显减慢，这是因为乙酰胆碱作用于心肌膜上的M型胆碱能受体，从而抑制腺苷酸环化酶使细胞内cAMP的浓度降低，使细胞内肌质网释放的Ca2+浓度降低，从而使心肌收缩能力减弱。对于窦房结细胞，乙酰胆碱与M型胆碱能受体结合后，通过Gk蛋白激活细胞膜上的K+通道，使胞内的K+流向胞外，于是最大复极电位降低，故去极化到达阈电位所需的时间更长，窦房结的自律性频率降低，心率减慢。此外，乙酰胆碱能抑制4期的内向电流If，也可导致心率减慢。乙酰胆碱还能抑制Ca2+通道，减少内向Ca2+流，使房室交界处的慢反应细胞动作电位0期的上升幅度减小，上升速率减慢，故房室传导速度减慢。洗脱乙酰胆碱后，与M型胆碱能受体结合的乙酰胆碱逐渐消失，被抑制的腺苷酸环化酶逐渐复活，肌质网释放的Ca2+浓度升高，心室收缩能力逐渐上升直至恢复正常。而与乙酰胆碱结合的窦房结细胞自律性恢复，被乙酰胆碱抑制的内向电流If恢复，房室交界处的慢反应细胞动作电位也恢复正常，心率也恢复正常。
3.酸碱的影响
结果：先加入3%的乳酸溶液一到两滴，收缩曲线幅度变小，再加入1~2滴2.5%碳酸氢钠，曲线频率和幅度逐渐恢复。
分析：加乳酸使心肌收缩力减弱。加入酸溶液，H+浓度增加，可竞争性抑制钙离子与肌钙蛋白结合；使肌凝球蛋白ATP酶活性降低；使钙离子从肌浆膜释放减少，抑制钙离子释放；降低钙离子通道活性，使钙离子内流减少，所以抑制心脏收缩活动，幅度降低，心率减慢，基线下降。加入碳酸氢钠后，解除了H+对钙离子的竞争作用，心肌收缩活动恢复。加入碱性溶液，可使细胞内氢离子外逸。与胞外钾离子进行H+—K+交换，钾离子外流减少，细胞膜电位减小。另外碱也使细胞液中钙离子浓度减低，内流的钙离子减少，心肌收缩力降低。
【思考题】
1.此实验说明心肌有哪些特性？
答：说明了心肌具有自动节律性、传导性、兴奋性和收缩性的特性
2.以本实验说明内环境相对恒定的意义？
答：正常机体通过调节作用，维持内环境的包括水、无机盐、各种营养物质、代谢产物、pH值、渗透压、温度等多个方面的相对稳定。从本实验可知，离子浓度、激素、pH值、温度都对心脏收缩有很大影响，维持内环境的相对恒定，才能保证心脏正常收缩。因此，维持内环境相对稳定，才能使机体有正常的生命活动。
3.实验中插管内液面为什么每次都应保持一定的高度？
答：控制在同一个压强下，蛙心插管内灌流液的液面高度应始终保持一致，以保证心脏固定的负荷。
实验人员：邹璨（执笔）、周薇、袁清操、袁宇航、湛美杰
第二篇：理化因素对离体心脏活动的影响实验报告
理化因素对离体心脏活动的影响
实验目的：1.学习离体心脏灌流法；
2.观察不同理化因素对离体心脏活动的影响。
实验原理： 静脉窦能自动产生一定节律的兴奋，是蛙心的正常起博点。在适宜的环境中失去神经支配的离体蛙心在一定的时间内仍可产生规律的节律性兴奋和收缩活动，仍可保持对生物活性物质的反应性。离体心脏和在体心脏相似，其正常节律性活动和正常的反应性，需要一个适宜的理化环境，改变灌流液的成分可引起心脏活动的改变。
实验对象：蟾蜍
实验药品和器材：
蛙类手术器械、蛙心插管、蛙心夹、张力换能器、试管夹、双凹夹、万能支架、滑轮、滴管、小杯、任氏液、0.65%NaCl、2%CaCl2、1%KCl、3%乳酸、1:10000肾上腺素、1:100000乙酰胆碱。
实验步骤：1.离体蛙心的制备：（1）暴露心脏；（2）心脏插管；（3）心脏离体。
2.连接实验装置:(1)用试管夹夹住蛙心插管的上部并固定于支架上，将蛙心夹的连线连接在张力换能器上；（2）将换能器的引线连接于BL-420系统的输入通道。
3.观察项目。
实验结果：
实验讨论：根据实验结果得：
1：把全部任式液换成等量0.65%NaCl溶液，心脏收缩曲线幅度明显降低。原因：心肌的收缩活动与Ca+触发的， 用065%NaCL 溶液灌蛙心，灌注液中缺乏Ca+，导致心肌动作电位2期内流Ca+减少，而Ca+的胞内浓度和心肌的收缩能力正相关，所以心肌收缩活动也减弱。
2：滴加两滴1% KCl溶液，心脏收缩曲线幅度降低。原因：（a）滴加KCl后，细胞外钾离子浓度增加，而钾离子对Ca+的内流有竞争性抑制作用，导致内流的Ca+减少，从而引起心肌收缩活动减弱；（b）当胞外钾离子浓度增加时，膜内外钾离子浓度差减小，静息电位的绝对值减小，从而导致心肌收缩活动减弱；
3：滴加2%的氯化钙后，心脏收缩曲线幅度上升，原因：滴加氯化钙使心肌细胞外液Ca+浓度升高，Ca+内流增多，而Ca+的胞内浓度和心肌的收缩能力正相关，所以心肌收缩活动加强。
4：滴加两滴1/10000Adr，心脏收缩曲线幅度明显上升，频率加快。原因：肾上腺素能与心肌细胞膜上的β1受体结合，促进L型Ca+通道开放，引起正性变时、变力、变传导作用，所以心脏收缩曲线幅度明显上升频率加快。
5：滴加两滴1/100000Ach，心脏收缩曲线幅度降低。原因：乙酰胆碱能与心肌细胞
膜上的M受体结合，使L型Ca+通道被抑制，Ca+内流减少；同时，钾离子通道激活，复极时钾离子外流加速，平台期缩短，导致Ca+内流减少，从而导致心脏收缩曲线幅度降低。
6：加乳酸，心脏收缩曲线幅度降低，原因是，H+会与Ca+竞争结合肌钙蛋白，阻碍兴奋收缩偶联，从而抑制心肌的收缩。加入NaHCO3后心脏收缩曲线幅度回升是因为它中和了H+，消除了H+对Ca+竞争抑制。