第二篇:蛋白质浓度的测定实验报告
蛋白质浓度的测定
一.试验原理
考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合,这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色,最大吸收峰在465nm。当他与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色,其最大吸收峰改变为595nm。考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感性。
在一定范围内,考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后,在595nm下,吸光度与蛋白质含量呈线性关系。故可用于蛋白质浓度的测定。
二.试验设备与试剂
设备:普通离心机,721型分光光度计
试剂:标准蛋白液(100ug/ml)
三.实验材料
新鲜绿豆芽
四.实验内容
1. 标准曲线的制备
取9支干净的试管,按表进行编号并加入试剂。
2. 样品蛋白的测定
(1) 样品蛋白液制备
准确称取2g新鲜绿豆芽胚轴的部分,研磨成匀浆,离心分离(4000r/min,10min)。取上清液用0.9%nacl定容到10ml。
(2) 含量测定
另取两只干净的试管,加入样品液0.1ml,0.9mlnacl和考马斯亮蓝染液4.0ml,混匀。室温静置3min,与波长595nm处比色,读取吸光度。
五.实验结果
1. 标准曲线
结果如表所示,并以吸光度为纵坐标,个标准液含量为横坐标做标准曲线。
2. 样品蛋白含量的测定
样品蛋白的比色结果如表,根据直线方程求出每支试管中蛋白质含量。
根据公式求出样品绿豆芽蛋白质含量
六.结果与讨论
结果: 绿豆芽蛋白质含量=1233.0ug/g
讨论:1.试液为混合均与就取样2.量取溶液时读数有误差3.读取A值时有读数误差4.比色杯中的误差