鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验
（Ames试验）
－ 鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）的组氨酸营养缺陷型（his）菌株，在含微
量组氨酸的培养基中，除极少数自发回复突变的细胞外，一般只能分裂几次，形成在显微镜下才能见到的微菌落。受诱变剂作用后，大量细胞发生回复突变，自行合成组氨酸，发育成肉眼可见的菌落。某些化学物质需经代谢活化才有致变作用，在测试系统中加入哺乳动物微粒体酶①，可弥补体外试验缺乏代谢活化系统之不足。鉴于化学物质的致突变作用与致癌作用之间密切相关，故此法现广泛应用于致癌物的筛选。
鼠伤寒沙门氏菌的突变型（即组氨酸缺陷型）菌株在无组氨酸的培养基上不能生长，在有组氨酸的培养基上可以正常生长。但如在无组氨酸的培养基中有致突变物存在时，则沙门氏菌突变型可回复突变为野生型（表现型），因而在无组氨酸培养基上也能生长，故可根据菌落形成数量，检查受试物是否为致突变物。某些致突变物需要代谢活化后才能使沙门氏菌突变型产生回复突变，代谢活化系统可以用多氯联苯（PCB）诱导的大鼠肝匀浆（S-9）制备的S-9混合液。
（一）主要培养基与试剂
1.培养基
（1）营养肉汤培养基 取5.0g牛肉膏、10.0g蛋白胨和5.0g氯化钠，加1000mL蒸馏水并加热溶解，调pH至7.2，分装后经灭菌，置普通冰箱保存备用，保存期不超过半年。
营养肉汤培养基
成分：牛肉膏
蛋白胨
NaCl
加蒸馏水至
（2）营养肉汤琼脂培养基 取2.0g琼脂粉加上述营养肉汤培养基100mL，加热融化后调pH为7.4，103kPa，20min灭菌，制备平板时，每皿20-25ml。营养肉汤琼脂培养基用作基因型鉴定的结晶紫敏感试验、抗氨苄青霉素和四环素试验、紫外线敏感性试验以及细菌活力鉴定等。
（3）底层琼脂培养基
成分：琼脂粉
蒸馏水
V-B培养基E
40%葡萄糖溶液 15g 930mL 20mL 50mL 2.5g 5.0g 2.5g 500mL 配制：将上述成分混合后，于0.103MPa下高压灭菌30min。储于4℃冰箱。 配制：首先将前两种成分高压灭菌30min后，再加入后两种成分，充分混匀倒底层平板。按每皿25mL制备平板，冷凝固化后倒置于37℃培养箱中温孵24h，备用。
（4）顶层培养基
①顶层琼脂：取6g琼脂粉、5g氯化钠加蒸馏水至1000mL。
②0.5mmol/L组氨酸-生物素溶液（诱变试验用）：取12.4mgD-生物素（相对分子质量224）和7.8ml组氨酸或9.5mgL-盐酸组氨酸/1000ml顶层培养基
③顶层培养基：加热融化顶层琼脂，每100mL顶层琼脂中加10mL 0.5mmol/L组氨酸-生物素溶液，混匀后分装在三角瓶中，灭菌。用时融化分装于小试管，每管2mL，在45℃水浴中保温。
2. 试剂
（1）0.8％氨苄青霉素溶液（鉴定菌株用，无菌配制）称取氨苄青霉素40mg，用0.02mol/L NaOH溶液稀释至5mL，保存于冰箱中。
（2）0.1％结晶紫溶液（鉴定菌株用）称取100mg结晶紫，溶于100mL无菌水中。
（3）L-组氨酸溶液和0.5mmol/L D-生物素溶液（鉴定菌株用）称取77.6mg/L组氨酸或95.9mg/L盐酸组氨酸和124mg D-生物素，分别溶于100mL蒸馏水中，灭菌，保存于4℃冰箱中。临时用时用无菌蒸馏水稀释10倍。
（4）0.8％四环素溶液，称取40mg四环素，用0.02mol/L盐酸稀释至5mL，保存于4℃冰箱中。适用于四环素抗性试验和氨苄青霉素-四环素平板。
（5）二甲基亚砜 光谱纯，103kPa，20min灭菌。
(6)Vogel-Bonner (V-B) 培养基E
成分：枸椽酸(C6H8O7·H2O)
磷酸氢二钾(K2HPO4)
磷酸氢铵钠(NaNH4HPO4·4H2O)
硫酸镁(MgSO4·7H2O)
加蒸馏水至
至1000mL。于0.103MPa下高压灭菌30min。储于4℃冰箱。
(7)40%葡萄糖溶液
成分：葡萄糖 400g
加蒸馏水至 1000mL
配制：加少量蒸馏水加温溶解葡萄糖，再加蒸馏水至1000mL。于0.068MPa下高压灭菌20min。储于4℃冰箱。
（8）S-9辅助因子（10％S-9混合液）
① 0.4mol/L氯化镁（MgCl2）溶液：称取3.8gMgCl2，加蒸馏水稀释至100mL。
② 1.65mol/L氯化钾（KCl）溶液：称取12.3gMgCl2，加蒸馏水稀释至100mL。 ③ 0.2mol磷酸盐缓冲液（pH7.0）：每10mL由437mg磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2 O）溶液和107.64mg磷酸二氢钠(NaH2PO4)溶液混合而成，调pH至7.0，经103kPa，20min灭菌或滤菌。5ml
④ 辅酶-Ⅱ（氧化型）溶液：准确称取辅酶-Ⅱ，用无菌蒸馏水溶解配制成0.02mol/L溶液，-20℃以下低温保存。30.6mg
⑤ 14.105mg 6-磷酸葡萄糖
⑥ 10％S-9混合液（临用时配制）：取5mL 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）、0.1mL 1.65mol/L氯化钾溶液（12.3mg）、0.1mL 0.4mol/L氯化镁溶液（8.132mg）、14.105mg6-磷酸葡萄糖、100g 500g 175g 2g 1000mL 配制：先将前三种成分加热溶解后，再将溶解的硫酸镁缓缓倒入容量瓶中，加蒸馏水
30.6mg 氧化型辅酶-Ⅱ溶液，3.8ml蒸馏水，微孔滤膜过滤，和1mLS-9液混匀，置冰浴中待用。
3 菌株鉴定用和特殊用途试剂 (1) 组氨酸—生物素平板 成分：琼脂粉 蒸馏水 (V-B)盐溶液 40%葡萄糖
灭菌盐酸组氨酸水溶液(0.5g/100mL) 灭菌0.5mmol/L生物素溶液
15g 914mL 20mL 50mL 10mL 6mL
配制：高压灭菌琼脂和水后，将灭菌40%葡萄糖，V-B盐溶液和组氨酸溶液加进热的琼脂溶液中。待溶液稍为冷却后，加入灭菌生物素，混匀，浇制平板。用于无R因子主平板或测定组氨酸需要。
(2) 氨苄青霉素平板和氨苄青霉素/四环素平板 成分：琼脂粉 蒸馏水 (V-B)盐溶液 40%葡萄糖
灭菌盐酸组氨酸溶液（0.5g/100mL） 灭菌0.5mmol/L生物素溶液
氨苄青霉素溶液(8mg/mL于0.02mol/LNaOH中) 四环素溶液(8mg/mL于0.02mol/L HCl中)
15g 910mL 20mL 50mL 10mL 6mL 3.15mL 0.25mL
配制：琼脂和水高压灭菌20min，将无菌的葡萄糖、VB盐溶液和组氨酸—生物素溶液加进热的溶液中去，混匀。冷却至大约50℃，无菌条件下加入氨苄青霉素溶液。应该在倾注琼脂平板后几天内，制备主平板。氨苄青霉素平板用于有R因子的主平板。再加入无菌四环素溶液。氨苄青霉素/四环素平板用于保存TA102菌株的主平板。能在冰箱中保存2个月，当无R因子的菌株生长时，平板不再使用。 （二）菌株的鉴定与保存
采用四株鼠伤寒沙门氏菌突变型菌株TA97、TA98、TA100、TA102。TA97和TA98可检测各种移码型诱变剂，TA100可检测引起碱基对置换的诱变剂。TA102能检出其他测试菌株不能检出或极少检出的某些诱变剂，如甲醛、各过种氧化氢化合物和丝裂霉素C等交联剂。一般用来测试受试物诱变性时，必须通过四个菌株的检测，必要时可增加TA1535、TA1537、和TA104任一菌株。 菌株 TA100 TA98 TA97 TA102
组氨酸突变 hisG hisD hisD hisO hisG
LPS rfa rfa rfa rfa rfa
修复
R因子（pkM101） + + + +
检测突变 碱基置换 碱基置换 移码 碱基置换
菌株特性应与Ames试验标准相符。突变性菌的某些特性易丢失或变异，遇到下列情况应鉴定菌株的基因型。 ① 在收到培养菌株后。
② 当制备一套新的冷冻保存株或冷冻干燥菌株时。 ③ 当每皿自发回变数不在正常范围时。 ④ 当对标准诱变剂丧失敏感性时。 ⑤ 使用主平板传代时。 ⑥ 投入使用前。
1.菌株活化 生长 保存与使用
（1）从-70℃超低温冰箱中取出保藏管，置37℃水浴中速溶，将菌液划线接种于氨苄青霉素平板，置37℃培养24小时。
从平板上选择5个生长良好的菌落，将每一个菌落的一半分别接种于5支盛有完全培养液试管中，经37℃振荡培养24小时。
进行菌株基因型和生物学特性鉴定。菌株鉴定合格后方能使用。
菌株鉴定合格后予以保藏，每支安瓿瓶分装0.8ml菌液和二甲亚砜0.07ml火焰封口后保存于超低温冰箱。
若以主平板保存菌种时，对带有质粒的pkM101的菌株，其主平板中可加入氨苄青霉素25μg/ml，对TA102菌株（另带PAQ1），还需加四环素2μg/ml。划线接种的主平板可保存于4℃冰箱中，一般可保存两个月。
（2）按上述方法将菌株用平板活化，取菌振荡培养（37℃，210r/min，10小时）过夜。菌液在3000r/min离心20min，弃上清，将沉淀混悬于生理盐水中，供菌株鉴定用。 2.菌株鉴定
表1 试验菌株鉴定的判断标准
2.1. 组氨酸需求试验
原理：组氨酸缺陷型试验菌株本身不能合成组氨酸，只能在补充组氨酸的培养基上生长，而在缺乏组氨酸的培养基上，则不能生长。
鉴定方法：用0.1ml吸管将测试菌株增菌液分别于含生物素的最低葡萄糖平板和含组氨
酸/生物素平板上划线接种，于37℃下倒置培养48h后观察结果。
结果判断：组氨酸缺陷型菌株在含组氨酸平板上生长，而在无组氨酸平板上则不能生长。 试验时，每株菌的5个菌落划与同一块平板上，每菌划完上述两种平板后，再划3块完全培养基平板（供Apr、Tcr、△uvrB试验）。
2.2. 结晶紫敏感试验（rfa突变）
原理：具有深粗糙（rfa）的菌株，其表面一层脂多糖屏障缺损，因此一些大分子物质如结晶紫能穿透菌膜进入菌体，从而抑制其生长，而野生型菌株则不受其影响。
鉴定方法：吸取待测菌株增菌液0.1mL涂布于完全培养基平板上，用一直径6mm的圆过滤纸片，以结晶紫溶液（1mg/ml，无菌蒸馏水配制）浸湿，放在平皿中央。37℃下培养12-24h后观察结果。
结果判断：假若待测菌在滤纸条与划线交叉处出现一透明菌带，说明该待测菌株具有rfa突变。阳性者在纸片周围出现一个透明的抑制带，说明存在rfa（深粗型）突变。这种变化允许某些大分子物质进入细菌体内并抑制其生长。TA97、TA98、TA100和TA102均有抑制带，野生型鼠伤寒沙门氏菌没有抑制带。
2.3. 抗氨苄青霉素（Apr）试验
原理：含R因子的试验菌株对氨苄青霉素有抗性。因为R因子不太稳定，容易丢失，故用氨苄青霉素确定该质粒存在与否。
鉴定方法：取2.1中划好的完全培养基板，将一滤纸条（约1.5×8.5mm）用氨苄青霉素浸湿，交叉放置于细菌接种线上。37℃下培养12-24h后观察结果。
氨苄青霉素溶液（8mg/ml，0.02mol/l NaOH配）新鲜配制，4℃保存。
结果判断；假若测试菌在氨苄青霉素平板上生长，说明该测试菌具有抗氨苄青霉素作用，表示含R因子，否则，表示测试菌不含R因子或R因子丢失。4个菌株经过24h培养，在氨苄青霉素带的周围依然生长不受抑制，即有抗氨苄青霉素效应，证明它们都带有R因子。
2.4. uvrB突变实验（紫外线敏感试验）
原理：具有△uvrB突变的菌株对紫外线敏感，当受到紫外线照射后，不能生长，而具有野生型切除修复酶的菌株，则能照常生长。
鉴定方法：取2.1中已划好菌的完全培养基平板，用黑纸盖住平板的一半，置紫外灯下照射（15W，距离33cm）8秒钟。置37℃下孵育12-24h后观察结果。
结果判断：具有△uvrB突变的菌株对紫外线敏感，经辐射后细菌不生长，而具有完整的切除修复系统的菌株，则照常生长。对紫外线敏感的三个菌株（TA97、TA98、TA100）仅在平皿没有照射过的一半生长，具有野生型切除修复酶的菌株TA102仍能生长。
2.5. 四环素抗性试验（Tcr）
原理：具有pAQI的菌株对四环素有抗性。
鉴定方法：取2.1中划好的完全培养基板，将一滤纸条（约1.5×8.5mm）用四环素溶液浸湿，交叉放置于细菌接种线上。37℃下培养12-24h后观察结果。
结果判断：假若测试菌照常在氨苄青霉素/四环素平板上生长，表明该测试菌株对氨苄青霉素和四环素两者有抗性，具有pAQI质粒，否则，说明测试菌株不含pAQI质粒。TA102菌株生长不受抑制，对照菌株有一段生长抑制区，表明TA102菌株有抗四环素效应。
2.6. 自发回变试验
原理：每种试验菌株都以一定的频率自发地产生回变，称为自发回变。这种自发回变是每种试验菌株的一项特性。
鉴定方法：将待测菌株增菌液0.1mL加到顶层琼脂培养基的试管内（45℃保温），混匀后铺到于底层琼脂平板上，待琼脂固化后，置37℃培养箱中孵育48h后记数每皿回变菌落数。当有s9存在时，顶层培养基中还需加入0.5ml s9混合液，其余同上。
结果判断：每种标准测试菌株的自发回变菌落数应符合要求。经体外代谢活化后的自发回变菌落数，要比直接作用下的略高。
2.7 回变特性—诊断性试验
原理：每种试验菌株对诊断性诱变剂回变作用的性质以及S9混合液的效应不一。 鉴定方法：按照平板掺入试验的操作步骤进行。将受试物换成诊断性诱变剂。 结果判断：标准菌株对某些诊断性诱变剂特有的回变结果参见表2。
表2 测试菌株的回变性 诱变剂
剂量(?g) 6.0 柔毛霉素
1.5 叠氮化钠（NaN3）
1.0 ICR—191
0.25
链霉黑素
0.5
丝裂霉素C（MMC） 0.20 2,4,7-三硝基-9-芴酮 20 4-硝基-O-次苯二胺 0.5
1.0 4-硝基喹啉-N-氧化物
10 甲基磺酸甲酯
1.0
2-氨基芴（2-AF） 苯并（a）芘 9-AA
S9 - - - - - - - - - + +
TA97 124 76 1640 inh inh 8377 2160 528 174 1742 337
TA98 3123 3 63 inh inh 8244 1599 292 23 6194 143
TA100
47 3000 185 inh inh 400 798 4220 2730 3026 937
TA102 592 188 0 2230 2772 16 0 287 6586 261 255
注：inh表示抑菌。表中数值均已扣除溶剂对照回变菌落数。
8. 菌株的保存
鉴定合格的菌种应保存在深低温（如－80℃）或加入9％光谱级DMSO作为冷冻保护剂，保存在液氮条件下（－196℃），或者冷冻干燥制成干粉，4℃保存。除在液氮条件下，保存期一般不超过2年。主平板贮存在4℃，2个月后丢弃，TA102主平板保存2周应该丢弃。
受试物剂量、溶剂和特殊处理
受试物最低剂量为每平皿0.2μg，最高剂量为5mg，或为溶解度允许浓度，或饱和浓度，或对细菌产生最小毒性浓度。每种受试物在允许最高剂量下用4个（含4个）以上剂量，每剂量间隔不超过5倍，每个剂量应做3个平皿，否则应说明选定剂量的理由。溶剂可选用水、二甲基亚砜（每皿不超过0.4mL），或其他溶剂（毒性剂量以下），无论选用什么溶剂均应无诱变性。
若遇特殊样品作非常规处理时应在报告中说明，对以下几种情况可作如下处理：
① 含组氨酸样品：根据食品中测得的组氨酸含量若能诱发回变率的增高可加设组氨酸平行对照组；或将检品经XAD-Ⅱ树脂柱过滤洗脱预处理。
② 食品包装材料及其制品成分：根据材料或制品的组成成分，可分别采取过筛抽提、蒸发残渣等技术处理。
③ 挥发性样品：可采用真空干燥器处理等方法。
④ 天然植物材料：可按植物化学方法制备粗制品或纯制品。
溶剂的选择
如果受试物为水溶性，可用灭菌蒸馏水作为溶剂；如为脂溶性，应选择对试验菌株毒性低且无致突变性的有机溶剂，常用的有二甲基亚砜（DMSO）、丙酮、95%乙醇。一般操作中，为了减少误差和溶剂的影响，常按每皿使用剂量用同一溶剂配成不同的浓度，固定加入量为100?l。
剂量的设计
决定受试物最高剂量的标准是对细菌的毒性及其溶解度。自发回变数的减少，背景菌变得清晰或被处理的培养物细菌存活数减少，都是毒性的标志。
对原料而言，一般最高剂量组可为5mg/皿。对产品而言，有杀菌作用的受试物，最高剂量可为最低抑菌浓度，无杀菌作用的受试物，最高剂量可为原液。受试物至少应设四个剂量组。每个剂量均做三个平行平板。
试验操作（正式试验）
Ames试验可分为平板掺入法、预培养平板掺入法及点试法等。
取活化的TA97，TA98，TA100，TA102各菌株，分别接种于5ml完全培养液试管中，振，210r/min，10小时）荡培养过夜（37℃）
菌液在3000r/min离心20min，弃上清，将沉淀混悬于生理盐水，备用。
采用预培养法。分别取0.1ml各浓度受试品溶液和0.1ml菌液，需活化时再加入0.5ml S9混合液，与小试管中混合，37℃水浴振荡培养20min，然后加2ml顶层培养基（45℃保温），迅速混匀倒在底层培养平板上（预温37℃），铺平待凝，37℃培养48-72小时，计数回变菌落数。
每一浓度平行做三块平板。实验重复一次。
TA97 9-AA 2-AF
TA98 MMC 2-AF
TA100 NaN3 2-AF
TA102 MMC 2-AF
受试品配制：
称取10mg受试品，溶于10ml无菌水，得1mg/ml；
取1ml加9ml无菌水，得100?g/ml；
取1ml加19ml无菌水，得5?g/ml；
从5?g/ml溶液中去5ml，加5ml无菌水，得2.5?g/ml；
同上倍比稀释分别得到1.25,0.625,0.03125,0.0156?g/ml
阳性对照品配制：临用时配制
9-AA（50?g/皿） 称取15mg，溶于1mlDMSO，得15mg/ml，取0.1ml，加2.9mlDMSO，得500?g/ml
MMC （0.5?g/皿） 称取10mg，溶于1mlDMSO，得10mg/ml；
取0.1ml，加0.9mlDMSO，得1mg/ml；
取0.1ml，加0.9mlDMSO，得0.1mg/ml；
取0.1ml，加1.9mlDMSO，得5?g/ml；
NaN3（1.5?g/皿） 称取15mg，溶于5ml水，高压灭菌，贮于4℃冰箱，即3mg/ml的贮备液；
取0.1ml，加0.9ml无菌水，300?g/ml；
取0.1ml，加1.9ml无菌水，15?g/ml。
2-AF（10?g/皿） 称取10mg，溶于5mlDMSO，得2mg/ml，贮于4℃冰箱；
取0.1ml，加1.9mlDMSO，得0.1mg/ml，即100?g/ml。
阴性对照
溶剂对照组，S9混合物加溶剂对照组
1. 平板掺入法
取营养肉汤培养基5mL，加入无菌小三角瓶或无菌试管中，将主平板或冷冻保存的菌株培养物接种于营养肉汤培养基内，37℃振荡（100次/min）培养10h至对数增长期，每毫升不少于1-2×109个活菌数，培养瓶可用黑纸包裹，以防光线照射细菌。取底层培养基平皿若干个，融化顶层培养基分装于无菌小试管，每管2mL，在45℃水浴中保温。
在保温的顶层培养基中依次加测试菌株新鲜增菌液0.1mL，混匀，加受试物0.05-0.2mL（需活化时加10％S-9混合液0.5mL），再混匀，37℃培养48h观察结果。另做一阳性对照和空白对照，不加测试物只加标准诱变剂（见表1-18和表1-20）或溶剂，如二甲基亚砜（光谱纯或分析纯），其他方法同上。
2. 预培养平板掺入法
预培养对于某些受试物可取得较好效果。因此可根据情况确定是否进行预培养。在加入顶层琼脂前，先进行以下预培养步骤：在试验中，将受试物（需活化时加入10％S-9混合液）和菌液，37℃培养30min，或30℃培养30min，然后再加2mL顶层琼脂，其他同上述平板掺入法。
3. 点试法
前面的操作方法同平板掺入法，之后在水浴中保温的顶层培养基中依次加入测试菌株增菌液0.1mL（需要时加10％S-9混合液0.5mL），混匀，迅速倾入底层培养基上，转动平皿，使顶层培养基在底层上均匀分布。平放固化后取无菌滤纸圆片（直径为6mm），小心放在固化的顶层培养基的适当位置上，用移液器取适量受试物（如10μL），点在纸片上，或将少量固体受试物结晶加到纸片或琼脂表面，37℃培养48h观察结果。另做阳性对照和空白对照。将加受试物改加标准致突变物（见表1-19和表1-20）或溶剂（如二甲基亚砜），其他步骤同上。
（六）结果的判定和报告
对与掺入法的结果以直接计数培养基上长出回变菌落数的多少而定，如在背景生长良好条件下，受试回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数≥2×空白对照数），并有剂量反应关系或
至少某一测试点超过对照2倍以上有可重复的并有统计学意义的阳性反应，即可认为该受试物为诱变阳性。对于点试法，如在受试物点样纸片周围长出较多密集的回变菌落与空白对照相比有明显区别者，可初步判定该受试物为阳性，但应该用掺入法试验来确证。
出报告时，阳性结果至少应做三次测试，阴性结果至少进行二次测试，才能对受试物作出判定。受试物的诱变性要用平板掺入试验来确证。报告中应注明试验条件和附上全部结果资料，对结果有疑议者，需经统计分析，同一样品必须包括活化和非活化的结果，剂量单位为每平皿微克，特殊例外。结果记录和报告格式见表1-21和表1-22。
表1-18 标准诱变剂在平板掺入中的试验结果 剂量 s-9 诱 变 剂 每皿回变菌落数 /μg·皿-1
ta97a ta98 ta100 ta102
6.0 124 3123 47 592 柔毛霉素 －
1.5 76 3 3000 186 叠氮钠Ⅱ1.0 －
icr-191 1.0 1640 63 185 0 －
0.25 inh inh inh* * 2230 链黑霉素 －
inh inh inh inh 丝裂霉素c（MMC） 0.5 －
8377 8244 400 16 2，4，7-三销基芴铜 0.2 －
2160 1599 798 0 4-硝基-磷-苯撑二胺 20.0 －
528 292 4220 287 4-硝基喹啉-n-氧化物 0.5 －
1.0(μl) 174 23 2730 6586 甲基磺酸甲酯 －
50.0 2688 1198 183 895 敌克松 －
10.0 + 1742 6194 3026 261 2-乙烯氨基芴
1.0 + 337 143 936 255 苯并（a）芘
* 所列数值代表his＋回变菌落数值，取自剂量反应的线性部分，对照值已扣除，用PCB诱导的大鼠肝S-9（20μL/皿）活化2-AF和苯并（a）芘。
* * inh：指链霉素在无毒性范围（小于0.25μg）内没有检出诱变性，每0.005μg在TA100引起的回变菌落数小于70；丝裂霉素对uvrB菌株是致命的。
表1-19 标准诱变剂在点试中的试验结果 s-9 ta97a ta98 ta100 ta102 诱 变 剂 剂量/μg·片-1
5.0 柔毛霉素 － － ＋ － ＋＋
± 叠氮钠Ⅱ1.0 － － ＋＋＋＋ － －
icr-191 1.0 － ＋＋＋＋ ＋ ＋＋ ＋
2.5 inh inh inh 丝裂霉素c － ＋＋＋
2，4，7-三销基芴铜 0.1 － ＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋ ＋＋ 4-硝基-磷-苯撑二胺 20.0 － ＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋
± 4-硝基喹啉-n-氧化物 10.0 － ＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋
甲基磺酸甲酯 2.0（μl） － ＋ － ＋＋＋ ＋＋＋＋
50.0 敌克松 － ＋＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋
20.0 2-乙烯氨基芴 ＋ ＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋ ＋
1.0 黄曲霉毒素b1 ＋ － ＋＋ ＋＋ －
甲基硝基亚硝基胍 2.0 － － － ＋＋＋ －
[注] ①每皿回变菌落数（扣除自发回变）的符号；－为＜20；＋为20~100；＋＋为100~200；
＋＋＋为200~500；＋＋＋＋为＞500。
② 柔毛霉素和叠氮钠溶解在水中，其他所有化合物溶解在DMSO中。用PCB诱导的大鼠肝S-9（20μL/皿）活化2-AF。柔毛霉素在点试中产生最低效应，应作平板掺入试验（见表1-18）。
③ 缩写：ICR-191——2-甲氯基-6氯代-9-[3-（2-氯乙基）氨基丙胺]吖啶-2盐酸；inh――因诱变剂毒性引起的生长抑制。
表1-20 推荐用于平板掺入与点试中的标准诱变剂 s-9 ta97a ta98 ta100 ta102 方 法
点试 － 敌克松 敌克松 叠氮钠 敌克松
＋ 2-氨基芴 2-氨基芴 2-氨基芴
掺入 － 敌克松 敌克松 叠氮钠 敌克松
＋ 2-氨基芴 2-氨基芴 2-氨基芴
表1-12 Ames试验结果报告表
送样单位___________样品名称（中文）___________（英文）___________ 送样日期_________________________________________________________
方法：（常规平板掺入、预培养、点试、其他）
菌株_______________生物学性状________ _____菌浓________ __ ___
试样最小毒性剂量___________________溶解度____________ ______
溶剂及量_______________________________S-9来源_______ ______
____________________蛋白含量__________________活性___________
______________________用量度___________
结果：
表1-22 Ames试验点试法、掺入法结果 ta97 ta98 ta100 ta102 名 称 剂 量 /μ·g皿-1 -s9 +s9 -s9 +s9 -s9 +s9 -s9 +s9
样 品
空白对照
溶剂对照
阴性对照
[注]点试法结果为每皿变菌落数（用符号表示），掺入法结果为每皿回变菌落数（X±SD）。