顶岗实习报告

时间:2024.3.27

河 北 化 工 医 药 职 业 技 术 学院

 

顶岗实习的岗位技术总结报告

石药集团河北中润制药厂实习报告

 

 

姓    名    朱亚娜                      

专   业  生物化工工艺                     

班  级生工30901                       

校内指导教师   崔润丽                

校外指导教师      王玉飞                

实习时间     20##-08            

              

制药工程系

实习单位: 石药集团河北中润制药有限公司

前言

石药集团河北中润制药有限公司-简介

石药集团河北中润制药有限公司坐落于河北省省会石家庄市,注册地址位于石家庄市丰收路47号,是世界最主要的抗生素原料供应商。公司成立于1989年,是石药集团控股的香港中国制药集团有限公司的境内投资子公司,属于中外合资企业。公司现有员工3200余人,全部人员经过严格的GMP知识、制药技能的培训,具有持续创新的工作能力。中润是中国国内制药企业外资投资额最大的公司。
   公司拥有青霉素、头孢菌素、生物酶、碳青霉烯四大系列40余个产品。青霉素系列产品主要包括青霉素钾工业盐、青霉素钾、青霉素钠、6-APA、阿莫西林、氨苄西林、氨苄西林钠,产能和市场份额位居世界抗生素前列。头孢菌素系列主要包括中间体7-ACA、头孢曲松钠、头孢唑林钠、头孢哌酮钠、头孢噻肟钠等。主打产品7-ACA年产能世界第一。中润也是唯一拥有锌盐化学法、钠盐化学法和酶法三种工艺生产7-ACA的企业

工作范畴:原材料的入厂合格检验、发酵过程每隔6小时总糖测定,发酵过程每隔6小时氨氮测定。配料的氨氮、总糖、还原糖、氨基氮的测定;霉菌组实验:测定生产过程发酵液的效价和杂质等;提炼组实验:测定结晶岗位的脱脂液、稀释液的水分、效价、PH值;提炼岗位的FAB、转化岗位的钠盐母液、钠盐转化液、钠盐溶解液等样品的效价、水分和含量;无菌室的丁醇、丁醇水、乙酯、乙酯水、钠盐母液的水分、效价、PH值;还测定回收岗位的丁醇、丁酯、乙酯半成、品酯化成品、酯化割头、废乙酯的含量水分和含量;原材料:玉米浆、原材料、液糖聚合物等的含量、总氮、干物质、折光率。

目录

第一章  青霉素钠中间体

一.钠盐溶解液的测定………………………………………………………………………1

二.钠盐转化液的测定………………………………………………………………………1

三.钠盐结晶母液的测定……………………………………………………………………1

第二章  提炼岗位

一.提炼实验室需测定的项目………………………………………………………………2

二.实验用到的仪器…………………………………………………………………………2

三.成品丁酯的测定…………………………………………………………………………2

四.硫酸含量的测定…………………………………………………………………………3

五.Na2CO3含量的测定………………………………………………………………………3

六.脱脂液的测定……………………………………………………………………………3

七.稀释液的测定……………………………………………………………………………3

八.丁醇结晶母液的测定……………………………………………………………………4

第三章  青霉素效价和苯乙酸残量的测定………………………………………………5

一.仪器与材料………………………………………………………………………………5

二.测定步骤…………………………………………………………………………………5

三.仪器的维护及正确使用…………………………………………………………………7

四.流动相的配制……………………………………………………………………………11

五.测定过程中所遇到的问题………………………………………………………………11

第四章  结语…………………………………………………………………………………12

第五章  实习心得……………………………………………………………………13

第一章     青霉素钠中间体

第一节钠盐溶解液的测定

1.效价:吸取样品10ml溶于100ml容量瓶中,加纯化水稀释至刻度摇匀,用制备好的样品冲洗旋光管2~3次,装满样品放入旋光仪测定旋光度;

公式:效价(μ/ml)=α×5580×10

2.水分:取样20μl注入自动水分滴定仪测定读取显示屏上的数据;

第二节钠盐转化液的测定

1.效价:吸取样品10ml溶于100ml容量瓶中,加纯化水稀释至刻度摇匀,用制备好的样品冲洗旋光管2~3次,装满样品放入旋光仪测定旋光度;

公式: 效价(μ/ml)=α×5750×10

2. 水分:取样20μl注入自动水分滴定仪测定读取显示屏上的数据;

3.PH:纯化水冲洗电极用滤纸拭干,放入样品中测PH值,读取显示屏上的数据;

4.K﹢:取两滴样品于滴定板上,加入一滴钴亚硝酸钾,判定:有黄色漂浮或黄色沉淀,证明有K﹢,判为不合格,没有变化,证明没有K﹢,判为合格;

第三节 钠盐结晶母液的测定

1.效价:吸取样品10ml溶于100ml容量瓶中,加纯化水稀释至刻度摇匀,用制备好的样品冲洗旋光管2~3次,装满样品放入旋光仪测定旋光度;

公式:效价(μ/ml)=α×5580

2.水分:取样20μl注入自动水分滴定仪测定读取显示屏上的数据;

第二章     提炼岗位

第一节提炼实验室测定的项目

1.回收岗位:丁醇、丁酯、酯化成品、乙酯半成品、废乙酯、酯化割头;

2.无菌室:丁醇、丁醇水、乙酯、乙酯水、结晶母液、转化液;

3.过滤:乙醇、乙酯;

4.提炼:FBA、乙酯、硫酸;

5.碱化:FBA、Na2CO3、K2CO3;

6.结晶:脱脂液、稀释液

7.制氺:纯化水;

第二节所用到的仪器

水分滴定仪、旋光仪、电导仪、高效气相色谱仪;

第三节成品丁酯的测定

1.水分检测:准确吸取样品20μL再按START键然后拔下进样口处塞子迅速将样品注射到水分阳极池中,滴定仪开始滴定并显示结果,水分滴定仪编号MEB08445,水分%=0.01%水分%=0.01%,两次平均值=0.01%。内控标准水分≤0.5%,结论:合格。

2色级测定:将澄清透明的样品25ml加入到250ml比色管中,与铂-钴标准比色液比较,得出结果,色级=5号,铂-钴标准比色液批号13-S-Co-101201内控标准色级≤20号,结论:合格。

3含量测定:将液体注入到气相色谱仪中分析,色谱条件:柱子温度70℃以4℃/min的速率升温到110℃,检测器温度200℃,进样口温度200℃,进样量0.3μl,气相色谱仪编号C11324010245,色谱柱编号us8802935H,色谱图标号丁醇12,正丁醇含量=63.36%正丁醇乙酸丁酯含量之和=99.72%,其他单杂含量=0.06%,内标标准丁醇含量≥65.0%,正丁醇乙酸丁酯含量之和≥98.0%,其他单杂含量≤0.5%,结论:不合格。

第四节硫酸含量的测定

操作过程:吸取样品1ml加纯化水约30ml加酚酞指示剂2滴,用氢氧化钠滴定液滴至微红色;

计算公式:含量%=×100%

合格标准14.00~18.00%

第五节Na2CO3含量的测定

操作过程:精密吸取样品1ml于三角瓶中,加纯化水30 ml加甲基橙指示剂2滴,用盐酸滴定液滴定至棕红色为终点;

计算公式:含量%=×100%

合格标准:5.00~15.00%

第六节脱脂液的测定

1.效价:吸取样品5ml溶于50ml容量瓶中,加纯化水稀释至刻度摇匀,用制备好的样品冲洗旋光管2~3次,装满样品放入旋光仪测定旋光度;

公式:效价(μ/ml)=α×5580×10

2.酯含量:取滤后样品1ml,加入1mol/L氢氧化钠和中性乙醇各10ml放20min后加0.5%酚酞2滴用0.500mol/L盐酸滴定;

公式;酯含量%=×100%

第七节稀释液的测定

1. 效价:吸取样品5ml溶于50ml容量瓶中,加纯化水稀释至刻度摇匀,用制备好的样品冲洗旋光管2~3次,装满样品放入旋光仪测定旋光度;

公式:效价(μ/ml)=α×5580×10

2. 水分:取样20μl注入自动水分滴定仪测定读取显示屏上的数据;

3. PH:纯化水冲洗电极用滤纸拭干,放入样品中测PH值,读取显示屏上的数据;

第八节丁醇结晶母液

1.效价:过滤用滤后样品冲洗旋光管2~3次,装满样品放入旋光仪测定旋光度;

公式:效价(μ/ml)=α×5580

2.水分:取样20μl注入自动水分滴定仪测定读取显示屏上的数据;

第三章  发酵液中青霉素效价及其苯乙酸残量的测定(高效液相色谱法)

第一节仪器与材料

1.仪器

安捷伦高效液相色谱仪、戴安高效液相色谱仪、Waters515液相色谱仪;

2.材料

401~415十五个大发酵罐的青霉素发酵液和307~310四个中级发酵罐中的青霉素发酵液,以及302、306小发酵罐中的青霉素发酵液;

第二节测定步骤

1.1原理:用高压输入液泵把流动相泵入装有固定相的色谱柱,经进样器进入样品。由流动相带入色谱柱内,在柱内各组分被分离后,依次进入检测器变成电信号,由化学工作站记录为色谱峰和数据。

1.2仪器与试剂:高效液相色谱仪、电子天平、超声波清洗仪、溶剂过滤器、PH计、C18色谱柱、1ml移液管、2ml移液管、烧杯、量筒、50ml容量瓶、100ml容量瓶、注射器、0.45μm微孔滤膜、甲醇(色谱纯)、磷酸二氢钾(分析纯)、磷酸(分析纯)。

1.3试剂配制

磷酸盐缓冲液:称68g磷酸二氢钾于烧杯中加1000 ml纯化水使溶解,摇匀,用磷酸调节PH至3.5即得68g/L磷酸二氢钾缓冲液。

5%甲醇水:用量筒分别量取色谱纯甲醇50ml和纯化水950ml混合均匀,用0.45μm的滤膜过滤后备用。

流动相:以68g/L磷酸二氢钾溶液-纯化水-甲醇(100:500:400)为流动相;经0.45μm微孔滤膜过滤后备用。

1.4色谱条件

色谱柱:0DS,5μm,250mm×4.6mm

流速:1.0ml/min

检测波长:225nm

进样量:20μl

柱温:30℃

1.5系统适用性试验:将对照品溶液连续5次注入高效液相色谱仪中,记录色图谱色谱峰流出顺序为苯乙酸、青霉素,而色谱峰之间的分离度应大于1.5,记录峰面积计算RSD,苯乙酸峰面积的RSD小于10.0%,青霉素峰面积的RSD小于2.0%

1.6操作过程

1.6.1对照品溶液的制备:精密称定苯乙酸对照品25mg于50 ml容量瓶中,加水稀释至刻度摇匀,做储备溶液A;精密称定青霉素对照品25mg于50mg容量瓶中,加纯化水溶解;精密吸取0.5ml储备液于该容量瓶中,然后加纯化水稀释至刻度,摇匀。

1.6.2供试品溶液的制备:根据发酵液的生长周期,参考下表取过滤好的发酵液,精密量取相应量。置于规定体积的容量瓶中,加纯化水溶解并稀释至刻度,摇匀。

将对照品溶液经0.45μm微孔滤膜过滤后,取20μl注入液相色谱仪。连续进样两次,记录色谱峰面积,将供试品溶液经0.45μm微孔滤膜过滤后,取20μl注入液相色谱仪记录色谱峰面积。

1.7计算结果

1.7.1青霉素效价(μ/ml)

效价=

式中  A对照:对照品溶液中青霉素的峰面积

      A样品:发酵液样品溶液中青霉素的峰面积

      W对照:青霉素钾对照品的质量g

        1598:青霉素钾的理论效价

       1.1136:青霉素钾与青霉素分子量的比值

           P:青霉素对照品的含量

      D样品:样品的稀释倍数

       50:对照品溶液定容后的体积ml

1.7.2苯乙酸含量(μg/ml)

苯乙酸含量=

A对照:对照品溶液中苯乙酸的峰面积

A样品:发酵液样品溶液中苯乙酸的峰面积

W对照:苯乙酸对照品的质量mg

P:苯乙酸对照品的含量

D样品:样品的稀释倍数

5000:苯乙酸标准品稀释倍数

1.8注意事项

高效液相色谱仪的操作见《高效液相色谱仪使用维护操作规程》检测效价用的样品应于氨氮,氨基氮用的样品分析使用,用移液管转移样品时用滤纸擦后再定刻度。

第三节仪器的维护及正确使用

Waters515液相色谱仪使用维修操作规程

1仪器简介

1.1本仪器由515泵、waters2487检测器、进样系统、微机色谱工作站、打印机等组成。

1.2生产厂家:美国waters公司

1.3技术指标

   流量准确度:±0.1%RSD

   流量精度:±0.1%(f=1ml/min.甲醇,压力为1000~2000psi的背压)

   波长精度:±n/m

   波长重现性:±0.10nm

   漂移:1.0×10ˉ4AU/hour/℃(245nm预热1小时)

   噪音:单波长≤±0.35×10ˉ5AU(干电池,在254nm时间常数1.0)

2waters液相色谱仪环境要求

2.1通风良好并严格禁止静电;

2.2避免阳光直射;

2.3一起放置的台面应水平无震动;

2.4环境温度:10~30℃应无大的波动;

2.5相对湿度:20~90%

3waters液相色谱仪使用

3.1样品准备

3.1.1液相色谱仪使用前应准备好0.45μm微孔滤膜过滤,并经脱气处理的纯化水,流动相(下简称水、流动相)及色谱纯甲醇(简称甲醇)

3.1.2调整好检测器的检测波长

3.2开机准备

3.2.1依次打开泵、检测器、显示器、微机的电源;

3.2.2将吸滤器放入盛有水的贮液瓶中并封好口;

3.2.3打开泵上的清洗旋钮,用针管从液体出口处抽出约10ml液体关闭清洗旋钮。

3.2.4换洗柱用水,旋开泵旋钮按MENLV键,泵显示PURGE时按RUN/STOP排气。当流路无气泡时,按RUN/STOP键停止排气关泵头旋钮。并按RUN/STOP键运行泵,从泵的面板上按EDIT键,输入流速值XXXml/min应由小到大输入。

3.2.5待流速至设定流速后泵运行约30min后应由大到小降低流速至0.01ml/min将吸滤器从水中取出,放入盛有流动相的贮液瓶。并封好瓶口,流速从0.0ml/min逐渐升至设定流速。

3.3系统操作

3.3.1微机进入显示系统,用鼠标点击start programs millenniu32在文件中指向oracle 打开start database ,或直接输入设定密码,进入主系统操作。

3.3.2双击Millenmin32图标单击login输入use name xxx 及pasword xxx点击ok待大图标又灰转亮,且2487检测器自检完成。

3.3.3在project中选中cfc,双击run samples,在run samples中选中waters-2487按ok

3.3.4单击single在sample name 中输入样品号,function中选inject sample me the set中选2478,在RUN TIME中输入预定测样运行时间,在injection vocume设置10.0

3.3.5选右上角RUN and process continue on fault 单击monitor进行基线预览,等待泵显示压力稳定,屏显示的基线噪声水平符合要求(约需30min)

3.3.6点击红灯abrot待inject亮后点击inject,当仪器显示single inject waitting时即可开始进样。

3.4进样测定

3.4.1将预分析的样品按一定方法处理好后置于洁净小瓶中,用此样品清洗进样针数次,另取一定的样品液,于手动进样器处于inject位时插入进样针。扳手柄至load位推入样品液,迅速扳手柄到inject位置

3.4.2液相色谱仪即开始测定样品,自动记录谱图

3.5数据处理:带测定结束后,打开Milleenninm32主画面,选择Browse project选YYY点击ok。在channels中选样品名后,击rerenl出现图谱击integrecte积分,击peaks得到处理后的结果,用于计算;

3.6关机操作

3.6.1测定结束后,关闭检测器电源;

3.6.2关闭色谱工作站,要将打开的所有窗口逐项的关闭,然后关闭主机、显示器电源;

3.6.3将流动相换成甲醇水,操作同3.2.4-3.2.5,洗柱约30min,更换为甲醇再洗柱60min,关闭515泵电源;

3.6.4清理液相色谱仪及周围卫生罩上机罩;

3.6.5认真填写《液相、气相色谱仪使用记录》和《检验设备维护记录》

4waters液相色谱仪使用注意事项

4.1仪器室内要经常保持通风并保持清洁;

4.2液相色谱仪使用过程中所用的各种液体(水、流动相)和进样用的样品溶液均需经0.45微米微孔滤膜严格过滤,成用液体的贮液瓶定期清洗,保证清洁防止仪器污染;

4.3不锈钢吸滤器要经常超声波清洗保证清洁,滤头要定期清洗。先用清洁的纯化水超半小时,然后换洗柱用水超半小时,安装滤头时不要手碰,以免污染滤头;

4.4洗柱用水不能长时间保存,如果水中有异物,应新配置实用;

4.5为延长检测器氘灯的使用寿命,测定结束后,宜先关闭检测器电源且使用过程中电源不宜频繁开关,氘灯达到其使用寿命时要及时更换;

4.6测定结束后应分别用甲醇水和甲醇清洗色谱柱,防止出现结晶,延长仪器和色谱柱的使用寿命;

4.7液相色谱仪使用过程中要随时记录使用情况,记录内容包括色谱柱的使用情况(如柱型号、柱压)色谱柱的出峰情况(如保留时间,峰面积等)

4.8液相色谱仪使用过程中要注意观察如发现异常应尽快处理,如遇较大故障,仪器不能工作时要及时与厂商联系;

4.9液相色谱仪检定周期为二年,检定有效期前应及时送检;

5常见故障处理和维护保养

5.1泵的保养

5.1.1使用流动相尽量要清洁;

5..1.2进液处的砂芯过滤头要经常清洗;

5.1.3流动相交换时要防止沉淀;

5.1.4避免泵内堵塞和有气泡;

5.2进样器的保养:每次分析结束后,要反复冲洗进样口,防止样品的交叉污染系统压力过高;

5.3柱的保养

5.3.1柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动;

5.3.2当柱子和色谱仪联结时,阔件或管路要清洗干净;

5.3.3要注意流动相的脱气;

5.3.4避免使用高粘度的溶剂作为流动相;

5.3.5进样样品要提纯;

5.3.6严格控制进样量;

5.3.7每天分析工作结束后,要清洗进样阀中残留的样品;

5.3.8每天分析测定结束后,都要用适当的溶剂来清洗柱;

5.3.9若分析柱长期不使用,应用适当有机溶剂保存并封闭;

5.4检测器(UV)的保养

5.4.1紫外灯的保养:在分析前,柱平衡的差不多时;打开检测器在分析完成后马上关闭检测器;

5.4.2样品也要保养

6常见故障及处理

6.1手动进样阀的5.6口漏液时,应检查换转子密闭圈是否损坏;

6.2系统压力超过设定值,系统停机。首先检查流路中的管路是否有打析或液压变形的情况,然后按由近及远的原则检查流路各段确定堵塞位置。顺序为泵到进样器管路,进样器六通阀、色谱柱、检测器出口管,可断开相应接口后启动泵进行测试;

6.3系统压力低,不稳定或无压力;

6.3.1流路中存在气泡执行排气泡操作,排除气泡;

6.3.2流路中有漏液,检查并排除漏点。

6.3.3进出口单向阀污染,清洗或更换单向阀;

6.3.4柱塞杆及密封圈磨损,更换柱塞密封或柱塞杆,建议两个同时更换;

6.3.5进样器六通阀定子或转子密封面磨损,更换定子或转子密封面;

6.3.6流动相打空色谱柱内有气体,设定0.2-0.5ml/min流速,用异丙醇清洗色谱柱直至压力稳定;

6.3.7流通池内存在气泡,堵住排液管出口3~5秒迅速公开,重复操作至压力稳定;

6.4基线噪音大或基线不稳定

6.4.1流动相或流路污染,检查更换流动相,冲洗流路可先断开色谱柱测试,如故障不能排除可判断为流动相或流路污染;

6.4.2色谱柱污染,对色谱柱进行清洗或更换,根据流动相情况先置换色谱柱内流动相,按相似相溶原理选择合适溶剂清洗色谱柱2~3小时测试;

6.4.3流路或检测器中存在气泡,排除气泡;

6.4.4出现密集正负信号,流通池内充满空气排除空气;

6.4.5压力波动,检查排除,漏点清洗单阀;

6.4.6基线漂移检查室内温度或柱温箱温度,冷藏后的流动相使用前应放置室温并脱气;

第四节 流动相的配制

高效液相色谱仪使用的流动相是纯化水、甲醇、磷酸二氢钾按5∶4∶1的比例配制而成的,通常实验室一天要配置2000ml流动相,纯化水和磷酸二氢钾要经过真空抽滤除去杂质,首先用一1000ml的量筒量取1000ml纯化水经过真空抽滤后倒入5000ml的试剂瓶中,然后在量取200ml的磷酸二氢钾经过真空抽滤后倒入试剂瓶中,最后量取800ml的甲醇水倒入试剂瓶中,充分摇动试剂瓶使其充分混匀;

第五节测定过程中多遇到的问题

1.测定过程中首先要进行青霉素标准品的称量,在称量前电子天平一定要先进行校准,如果校准不得当会导致青霉素标准品称量不准确,青霉素标准品要精确至小数点后四位,标准品偏高会导致测定的发酵液效价偏低,标准品偏高会导致测定的发酵液偏高;

2.测定过程中要严格控制好实验室的温度,温度对样品在色谱仪的出峰时间有影响,温度偏高会导致样品的出峰时间偏后,温度过低会导致样品的出峰时间提前,所以实验室温度一般保持在25℃左右;

3.流动相对样品出峰时间的影响,流动相是甲醇、纯化水、磷酸二氢钾按一定比例配制而成的,甲醇过高会是样品的出峰时间提前;

第四章结语

从实习至今我在104化验室以实习半年之久,我对化验室的工作有了很多了解,已经熟练掌握了实验室的每项工作,熟悉了实验室的各个实验仪器;比如青霉素发酵液的前序工作:氨氮、氨基氮、还原糖、硫酸铵的测定,氨氮的测定需要用到水浴锅进行20分钟的水浴加热,A、B两样品试管用橡胶管连接,A试管需放在水浴锅内,水浴锅的温度为80℃,在测样品时两试管连接时不能连接的过于紧密否则会有气泡产生,导致样品测定存在的误差增大;在测苯乙酸的过程中会用到离心机对样品进行离心,离心后的样品会分层,在用移液管吸取上层清液时要注意管尖不能伸到分层的液面以下,否则影响样品的测定;在测定青霉素效价和苯乙酸残量过程中,青霉素标品称量时电子天平一定要进行校准,青霉素标品的重量对青霉素发酵液效价的影响非常大,常导致效价下降,效价只能升不能降否则要重新复样,高效液相色谱仪的柱子里不能存在气泡,测样前要检查机子是否存在气泡,还要严格控制实验室的温度和湿度,温度一般控制在25℃左右,流动相配置时甲醇的含量要严格控制,会影响样品的出峰时间;在提炼实验室使用旋光仪测旋光度时要保护好钠灯,要保持旋光仪内部的清洁,还有旋光管不能漏液否则测得的旋光度偏低。用水份滴定仪测水分时要排尽针里的气泡;原材料的聚合物进行液相测定时,色谱柱一定要先用纯化水冲平后在用流动相冲柱30分钟左右才能进样,玉米浆测总氮时用浓硫酸碳化要时不时的观察回流状况。

第五章 实习心得

进入石药集团中润制药厂已有八个月之久,从一开始的不懂不会到现在的操作熟练,期间经过了一段学习期适应期。进入化验室对我们学分析的来说可谓是对口工作,在学校是今天天与实验室的瓶瓶罐罐打交道,来到实验室后并没感到陌生,然而经过这几个月的学习时候有了好多见识,在学校不常见或没见过的仪器化验室里就有,使我对仪器分析有了很多的了解。对不同岗位实验的学习使我学习到了好多知识,对好多试剂的性质用途有了深深的了解。更对化验室的危险源了如指掌,在化验室接触的大部分都是有毒有害气体、液体试剂,为了自身的安全考虑我们必须深知这些试剂的危害程度。在化验室工作必须对化验室的各岗位工作牢牢地掌握,以适应轮岗工作。轮岗对我们来说很重要,轮岗也是应对化验室人员变动的有效措施,如果岗位缺人就应该及时轮换以保证化验工作的正常进行,化验室人员变动很频繁。我已经适应了化验室的工作,我在以后会做的更好。

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