毕业总结

 

一、实习目的

毕业实习是我们步入社会前的一个重要环节，其目的是通过生产实践，验证、巩固、深化所学的理论知识，扩大视野，增强感性认识，培养分析问题和解决问题的独立工作能力，并通过实习了解道路工程施工的具体项目和要求和验收标准；道路基层的施工工艺、质量控制与验收标准；道路路面混合料配合比设计、施工工艺、质量要求与验收标准；以及一些施工组织设计、施工管理的内容与程序。为以后的课程设计、毕业设计收集资料，打好基础。

二、实习时间

20##年2月13日至20##年3月23日

三、实习方式

本次实习，采取分散实习的方法，参加了施工现场的实习，每天跟班工作不少于8小时。

四、工程概况

一、工程概况

泉州田安大桥北连接线分别由桥梁、道路以及市政管线等子项工程组成。北连接线的起点接泉秀街路口，主线起点桩号K0+000，终点K0+754.701接滨江北路互通设计起点。北连接线里程桩号为K0+ 325.251～K0+ 754.701，共分为四联，跨径布置为（4X27.5）+（4X27.5）+（3X27.5）+（35+55+35）m，第一、三联为等宽段桥梁，第二、四联为变宽段桥梁，箱梁变宽通过调整箱梁宽度来适应桥梁变宽，四联均为整幅桥。上部构造钢梁均采用预应力混凝土连续箱梁，下部构造均采用H型墩、轻型桥台，墩台号为0～13号。地面道路设计起点K0+000（泉秀街路口）-K0+692.499（宝洲路口）。道路功能为城市道路，主路道路等级为城市I级主干道，辅路道路等级为城市I级次干道。主线双向四车道，道路主线设计行车速度60km/h, 道路辅线设计行车速度40km/h。设计荷载等级为公路-I级别。 　

五．实习内容

1. 参加施工现场测量实习

2. 参加施工现场跟班实习

3. 参加技术资料的整理工作。

4. 参与施工组织管理工作

通过实习了解到路桥施工现场所要做的许多工作，测量所需要的专业技能和数据处理方法，现在施工员的

混凝土压力试验机

　1、 接好电源线，选定合适的档位，按“设置”键，进行系统设置，如不需调整，直接进行下一步操作。 　

　2、 按“清零”键清零，放入试件，对准中心位置，然后转动手轮，调整丝杆，使上压力板距试件约5mm，按“启动”键启动电机(红色信号灯亮，如不亮则不会显示速率，试验数据无法保存及打印)。 　　3、 关闭回油阀，缓慢打开送油阀，按要求的速率控制加载，直至试件破裂。 　

　4、 打开回油阀，关闭送油阀，同时清除试件碎块。按同样的方法再放入第二块、第三块试件。 　　5、 打开回油阀卸荷，按“打印”键打印出全部检测内容，试验结束，按“停止”键停止电机，并关闭电源。 　

　6、 做同一尺寸试块的试验时，最好不要转动手轮，让活塞自由回落，这样既保证了试验精度，又节约了时间。 　

　7、 当活塞超出最大行程(约20mm)，接近开关起保护作用，压力机停止工作，这时应打开回油阀手柄，使活塞下降一段距离，然后重新进行试验。 　

　8、 试验机在工作过程中，当控制系统出现异常情况，请直接关闭电源开关。

　　9、试验机外壳必须安全接地。

针入度试验器使用

 1、 取出达到恒温的盛样皿，移入水温控制在试验温度的平底玻璃皿中的三角支架上，试样表面以上的水层深度不小于10mm。

　2、将盛有试样的平底玻璃皿置于针入度仪的平台上。旋开升降架背后的紧定螺钉，上下移动升降架至合适位置，旋紧。再用两侧微调手轮，慢慢放下针连杆，利用反光镜来观察使针尖刚好与试样表面接触，松手，升降架自锁。 　　

3、按下显示面板上置零按钮，显示清零。 　　

4、置零5S后按下启动键，标准针下落贯入试样，读取位移指示器读数。

5、 同一试样平行试验至少3次，每个测试点之间及与盛样皿边缘的距离不应少于10mm每次试验应换一根干净标准针，或将标准针取下用蘸有三氯乙烯溶剂的棉花或布擦干。 　

　6、测定针入度大于200的沥青试样时，至少用3支标准针，每次试验后将针留在试样中，直至3次平行试验完成后，才能将标准针取出。 　

　7、需要重新提针连杆时，应按下释放按钮，而不应在针连杆锁紧状态下抽拔。每次试验完毕后，均应取下针入件，上油保护并装入护套内

钢筋电子拉力试验机

　　　主要用途和使用范围 　　主要用于对各种金属、非金属及复合材料进行常规力学性能指标的测试。专业设计的自动控制和数据采集系统，实现了系统的全数字化调整。标准的RS232接口方便了用户对试验数据的计算机采集、处理和数据的网间传输。设备能够求取抗拉强度、剥离强度、撕裂强度等。该设备适用于防水卷材、电线电缆、纺织、橡胶、陶瓷、包装行业、土工布、薄膜、纸张、塑料制品等制造业以及各级产品质量监督部门，同时还适用于大中专院校进行教学演示工作。

操作规则

1、在被检验的金属线材上截取长200mm-500mm的一段，进行矫直，矫直时不得损伤线材表面。 　　

2、按照参数表中线材直径大小选择夹片园弧半径r，夹片园弧顶部至拨杆底面的距离b，以及拨杆孔φ，每付夹片上都打印了园弧半径数字以供选择。 　　

3、主杆上有相互垂直的四个孔，调正拔杆的方向可得到你所需要的孔位。 　　

4、将摇臂处于垂直的位置，并以此作试验的起始状态，将试样先穿入两面三刀夹片中底板的孔内，然后垂直向上从拨杆的下部穿过拨杆孔再穿入上夹至顶部，转动上夹头手柄把线材上端的夹紧。 　

　5、用手把上夹头往下按15-25mm后稳住，转动主夹片手柄将下端夹紧进行弯曲。 　　6、弯曲试样时，应使用较均匀的速度（约1次/秒）。 　　

7、弯曲记数是从起始位置向右弯曲90度，试样返回至起始位置为第一次，再向左弯曲90度，试样再返回起始位置为第二次以此类推至试样折断为止，试样折断的最后一次弯曲次数不计。 　　

8、长期使用后夹片的园弧表面若出现压伤的痕迹应更换夹片 　

　9、油杯及有相对滑动处应经常加油，保持润滑。 　

　10、使用后应擦拭干净并涂上防锈油以防锈蚀。

使用说明

一、检查机械性能是否良好、工作台和弯曲机台面保持水平；并准备好各种芯轴工　二、按加工钢筋的直径和弯曲机的要求装好芯轴，成型轴，挡铁轴或可变挡架，芯轴直径应为钢筋直径的2.5倍。 　

　三、检查芯轴，挡块、转盘应无损坏和裂纹，防护罩紧固可靠，经空机运转确认正常方可作业。 　

　四、作业时，将钢筋需弯的一头插在转盘固定备有的间隙内，另一端紧靠机身固定并用手压紧，检查机身固定， 　　确实安在挡住钢筋的一侧方可开动。 　

　五、作业中严禁更换芯轴和变换角度以及调速等作业，亦不得加油或清除。 　　六、弯曲钢筋时，严禁加工超过机械规定的钢筋直径、根数及机械转速。 　

　七、弯曲高硬度或低合金钢筋时，应按机械铭牌规定换标最大限制直径，并调换相应的芯轴。

　　八、严禁在弯曲钢筋的作业半径内和机身不设固定的一侧站人。弯曲好的半成品应堆放整齐，弯钩不得朝上。 　

　九、转盘换向时，必须在停稳后进行。 　

　十、作业完毕、清理现场、保养机械、断电锁箱。

五、 实习心得与体会

通过这次现场实习将所学理论知识与工程实践进行统一。在实习过程中，我以实习员的身份入试验室在试验室主任的指导下参加

参加工程试验工作

，顺利完成了四周的实习任务。同时，也为大学毕业后从事工程时间打下良好基础。 

本次实习，时间虽短，但基本达到了为毕业设计收集资料，完善所学知识，将理论与实践相结合的多重目的。

在实习工程中，我了解了道路工程试验室许多试验的过程及一般步骤，了解了级配碎石施工方法，了解了有关的施工技术。

实习实质是毕业前的模拟演练，在即将走向社会，踏上工作岗位之即，这样的磨砺很重要。希望人生能由此延展开来，真正使所学所想有用武之地。

第二篇：质粒转化大肠杆菌实习报告--附实验图片

细胞转基因技术研究进展

1实验内容：原核细胞转基因:大肠杆菌感受态细胞的制备, 转化和鉴定

2实验原理及技术介绍：

细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染 色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制， 并通过细胞分裂传递到后代。但是在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。

所谓感受态，是指细菌生长过程中的某一阶段的培养物，只有某一生长阶段中的细菌才能作为转化的受体，能接受外源DNA而不将其降解的生理状态。感受态形成后，细胞生理状态会发生改变，出现各种蛋白质和酶，负责供体DNA 的结合和加工等。细胞表面正电荷增加，通透性增加，形成能接受外来的DNA 分子的受体位点等。本实验为了把外源DNA（重组质粒）引入大肠杆菌，就必须先制备能吸收外来DNA分子 $&KiN8?2, 的感受态细胞。在细菌中，能发生感受态细胞是占极少数。而且，细菌的感受态是在短暂时间内发生。目前对感受态细胞能接受外来DNA 分子的本质看法不一。主要有两种假说:一种是局部原生质体化假说——细胞表面的细胞壁结构发生变化，即局部失去细胞壁或局部溶解细胞壁，使DNA 分子能通过质膜进细胞。另一种是 2^ kK2D$o  酶受体假说——感受态细胞的表面形成一种能接受DNA 的酶 位点，使DNA分子能进入细胞。

本实验通过CaCl₂对特定的大肠杆菌处理，制备感受态的细菌。这些细菌可使每微克超螺旋质粒DNA，如一些插入目的DNA片段的重组质粒，产生5×10⁶~2×10⁷ 个转化的菌落。当质粒与这些大肠杆菌混合后，质粒粘附在大肠杆菌的表面，在42℃的温度时，大肠杆菌出现热休克，质粒可通过大肠杆菌细胞膜上形成的空隙进入菌体内。随后，加入LB培养液，于37℃振动培养可使细菌复苏，并且表达质粒编码的抗生素抗性基因，提高转化效率。转化成功的大肠杆菌可以在相应抗生素培养皿中传代，形成菌落。

本实验以E.coli DH5a菌株为受体细胞,并用CaCl₂处理,使其处于感受态,然后与质粒共保温,实现转化。由于质粒带有氨苄青霉素抗性基因(Amp)，可通过Amp抗性来筛选转化子。如受体细胞没有转入PBS，则在含Amp的培养基上不能生长。能在Amp培养基上生长的受体细胞（转化子）肯定已导入了PBS。

质粒转化大肠杆菌的主要有两个用途:1、重组质粒的鉴定。2、为扩增质粒和其它载体作准备。

3材料,试剂与设备

3.1材料

　　E.coli DH5α菌株: Rˉ,Mˉ,Ampˉ；质粒DNA——实验室提供，eppendorf管。

3.2设备

恒温摇床,电热恒温培养箱,台式高速离心机,无菌工作台,低温冰箱, 恒温水浴锅, 制冰机,微量移液枪。
3.3试剂

1.LB培养基：胰蛋白胨10g/L, 酵母膏提取物5g/L, NaCl 10g/L,琼脂1510g/L, PH=7.4, 121℃ 高压灭菌20min。

　　2.Amp母液：实验室配制

　　3.含Amp的LB固体培养基:将配好的LB固体培养基高压灭菌后冷却至60℃左右,加入Amp储存液,使终浓度为50ug/ml,摇匀后涂板。

5.0.05mol/L CaCl₂溶液:称取0.28g CaCl₂ (无水,分析纯),溶于50ml重蒸水中,定容至100ml,高压灭菌。

4操作步骤

4.1 受体菌的培养

　　从LB平板上挑取新活化的E.coli DH5α单菌落,接种于3-5ml LB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于100ml LB液体培养基中,37℃振荡培养2-3小时至OD600 ＝0.5左右。

4.2  感受态细胞的制备 (CaCl₂法)

　　1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟。

　　2、弃去上清,用预冷的0.05mol/L的CaCl₂ 溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g离心10分钟。

3、弃去上清,加入200ul预冷0.05mol/L的CaCl₂ 溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置几分钟,即成感受态细胞悬液。

4、感受态细胞分装成200μl的小份。

　4.3 转化

　　1、从4℃冰箱中取200μl感受态细胞悬液，立即置冰上。

　　2、 加入质粒DNA溶液(含量不超过50ng,体积不超过10μl),轻轻摇匀,冰上放置30分钟后。

　　3、42℃水浴中热击90秒或37℃水浴5分钟,热击后迅速置于冰上冷却3-5分钟。

　　4、向管中加入1ml LB液体培养基(不含Amp),混匀后37℃振荡培养10—30min,使细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因(Amp)。

　　5、将上述菌液摇匀后取15μl 涂布于含Amp的筛选平板上,再用塑料带密封，然后正面向上放置半小时,待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿,37℃培养16-24小时。 

　　同时做两个对照:

　　对照组1：以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液,其它操作与上面相同。此组正常情况下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。

对照组2：以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液,但涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗生素的LB平板上，此组在正常情况下应产生大量菌落。

5结果

5.1结果照片如下：

  

                                                                                                                                                           

实验组 ：Amp+质粒

                    

     

                     

 对照组1 ：Amp+水

                          

对照组2：水

由上图可知，实验组长了一些菌落，对照组1没有长菌落，对照组2长了大量菌落。

5.2结果分析：

对照组1、2相互对照可知，大肠杆菌原本不能在含有Amp的培养基中生长，而且在不含Amp的培养基中生长得很好。

对照组1与实验组相互对照可知，只有转入质粒的大肠杆菌能够在含有Amp的培养基中生长。

实验组与对照组1、2对照可知，只有很少部分的大肠杆菌转入了质粒，此次实验的转化率比较低。

5.3转化率较低原因分析：

1.        由于在对数中期的大肠杆菌易生成感受态。所以可能是制感受态时受体细胞不再对数中期导致制得的感受态细胞太少，导致转化率很低。

2.        在使用用移液枪的时候注射质粒时过快或者用手混匀的时候用力过大，导致一些受体细胞破裂死亡。

3.   可能是质粒浓度过高，转化的时候进入大肠杆菌内的质粒过多而使大肠杆菌胀破死亡，因而导致转化率降低。

4.   另外，实验操作过程中操作的人过多，染菌的可能性变大使转化率变低。

5.4为了提高转化效率, 实验中要考虑以下几个重要因素：

1)   细胞生长状态和密度。密度不足或过高会使转化率下降。

2)   质粒DNA的质量和浓度。用于转化的质粒DNA应主要是共价闭环DNA。转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，量过多货体积过大时，转化率下降。

3)   试剂的质量。

4)   防止杂菌和其他外源DNA的污染。

5)   根据所需质粒DNA的特性，设置相应的选择性培养基进行筛选，有的可能还需进行多补筛选。

6讨论  感受态的制作和质粒转化是分子生物学实验最基本的操作技术。这次实习的一个很重要的目的就是学会这两种技术。结果表明我所操作的实验组转化率较低。而化合物及无机离子对转化率有影响：在Ca²⁺的基础上，联合其他二价金属离子(如Mn²⁺，CO²⁺)、DMSO或还原剂等物质处理细菌，可使转化率提高100～1000倍。所以在以后实验中可以利用这一点对本实验中所用的CaCl₂法制备感受态加以改进，以提高转化率。

    细菌经0℃ CaCl₂处理后转化率随时间的推移而增加，24h达到最高，之后转化率逐渐下降。所以在实验中要用0℃ CaCl₂处理大肠杆菌的时间比此次实验中所处理的时间稍作延长，亦可提高转化率。

另外目前制备感受态方法主要有电转化和CaCl₂转化法，这两种方法都是目前实验室制备感受态的基本方法。但是它对于我们这样的初学者来说仍略显复杂。最近从网上找到一种更为简捷有效的大肠杆菌感受态细胞制备的方法^[1]，只需一步室温离心便能够获得与常规方法效价相近，并能够长期保存的大肠杆菌感受态细胞。实验结果显示新方法制备的感受态细胞每微克转化菌落数达 1 0 

^5---1 0⁶。个，可以满足在质粒中进行的常规克隆需要达到了CaCl₂ 法的效果。而且所制备的感受态细胞能较长时间 (一8 0℃，至少可保存 9个月) 冷冻保存而转化效率不会下 降， 适于一次大量制备并长期保存使用，这种方法也可以考虑为我所用，简化实验步骤提高转化率。若成熟的话可以在制备感受态细胞时长期使用。

7参考文献：

【1】代红星;张庆桥;樊宝良.  一种简捷有效的大肠杆菌感受态细胞制备方法. 安徽农业科学 20##年第29期