姓名：袁栋

学号：130400113 班级：1304001

微生物在自然界中分布广泛，特别是土壤中， 是人类开发利用微生物资源的重要基地。通过选择培养基和富集培养基将该实验需要的微生物从中分离出来。由于不同微生物对营养物质的要求不同，可在培养基中加入营养物质不同或减少某种物质以营造一个只适于所选微生物生长而抑制其他微生物生长的环境，便可除去不需要的微生物，分离出所需要微生物。可用稀释平板分离法、平板法分离和划线分离法土壤中产淀粉酶的微生物。该实验采用稀释平板分离法。

在微生物课程中，认识到许许多多的微生物，而这些微生物也是由许多多的微小生物和菌株组成的。该次实验的内容和目的就是要研究提取分离土壤中微生物产淀粉酶菌株的筛选和培育，实验操作: :土壤中含有各种微生物，将含有微生物的土壤制成菌悬液，用十倍递减稀释法稀释后涂布接种到选择养基上，在适宜的条件下培养，待长出菌落后，从各个菌落上挑取单菌种接种到淀粉培养基上，适宜条件下培养，长出菌落后，在各个菌落上滴加碘液，菌落周围如

出现无色透明水解圈，说明淀粉被酶解，即该细菌菌株能产淀粉酶。我们在实验中分离得到的产淀粉酶的细菌具有一定的产淀粉酶的特性，进一步突出实验的重要性，提高学生自己动手观察能力. ：

配置培养基:

1、选择配培养基：淀粉16克 蛋白胨5克 氯化钠5克 琼脂20克 葡萄糖6克 无菌水1000毫升

2、富集培养基：淀粉1% 蛋白胨1% 葡萄糖0.5% 氯化钠0.5% 琼脂20克 1000毫升无菌水

空试管 10支/组（共30只）

培养皿 12套/组 滤纸2包 牙签6小包

无菌水2瓶 枪头、锥形瓶、涂布棒、移液管、烧杯、废旧报纸、滤纸量纸称、PH试纸、 超净工作台、培养箱、电子称高压蒸汽灭菌锅、涂布器离心机等

方法：

将实验玻璃仪器清洗烘干，用准备的报纸将烘干玻璃仪器分类包。放在压蒸汽灭菌锅灭菌，20分钟左右后拿出。

菌悬液的配制：将在花房取的土壤称量12.5g，将其加入112ml无菌水进行搅拌后用高速离心机离心，取上清液，在上清液中加入

2g可溶淀粉、0.625g的蛋白胨、氯化钠 0.625g，再加入100ml无菌水进行搅拌均匀，最后将其倒入锥形瓶放在旋转式摇床上以37摄氏度、200~250r/min振荡24h左右。

一定时间过后，将锥形瓶中经过高温灭菌且凝固的选择培养液放入微波炉中加热融化，然后分别倒入已经准备好的十组培养皿中进行静置冷却，待其凝固。再将已经准备好的十只试管放在试管架上，将100微升的移液枪调制50和40分别准备好的无菌水5毫升和4毫升到十只试管中。从富集土壤的菌悬液中1毫升滴入到第一支试管中，再从第一支试管中取1毫升滴入第二支试管中并摇匀震荡，依此类推到第十支试管。选择10-7、10-8、10-9三支试管，用移液枪在这三支试管中分别取20微升分别滴入到三个培养皿中，取三组。用平板涂布法涂匀，并用记号笔做好标记。剩余一个培养皿，将准备好的滤纸完全浸湿青霉素溶液平贴入培养皿中，再取10-6试管中取20微升滴入到浸青霉素的培养皿中平板涂布法涂匀，最后将做好的所有培养皿放入37度的培养箱中进行一天的培养。等待菌株的生长。24小时，观察菌株生长良好，并观察菌株周围产淀粉酶水解圈的大小及菌株直径的大小进行比较。取已凝固的培养液放入微波炉中进行加热处理，然后倒皿静置冷却，再在10-9培养皿中去菌株长势最好且水解圈最大的菌种进行点种到已经冷却的两个种子培养皿中，然后在放入培养箱中培养。 各组培养皿在无菌培养箱培养近24小时，有几组菌株

产生不怎么明显的水解圈和菌株，但还是有一组结果比较明显，而青霉素培养基则都还未生长出菌株，青霉素培养基并未长出菌落，产淀粉酶菌株长出。以下分别是借有班里比较好的10-7、10-8、10-9浓度培育的结果图：

观察并发现10-9溶度的菌悬液更适合产淀粉酶菌株的生长。且看到的菌株清楚易发现其周围的水解圈。在培养皿进行碘液染色，读取各个不同浓度培养皿中菌株数.

浓度 10-7 10-8 10-9

实值

平均值

19 18 18 17 22 23 24 27 30 32 30 31

； 青霉素菌对产淀粉酶菌有一定少许的杀伤力作用，滴入碘液的培养种子培养皿带有标记的菌株在淀粉培养基中的菌落上滴加碘液后，部分菌落周围出现透明圈，说明所采土壤中含有产淀粉酶的细菌菌株。综合分析得知实验结果还是呈现理想状态。 在用高压锅灭菌前要放干净锅内的冷空气，最高温度不能超过121℃，若温度过高或者过低对于灭菌也有一定的影响。涂刮在涂布器灭菌后要冷却一下才能进行涂布，避免破坏涂布器和菌种，涂皿过程中涂布器应该清清涂刮，多反复涂刮几次涂刮。土壤中存在产淀酶细菌，通过定量稀释混合倒平板法在取土壤菌悬液的时候，取30微升有利于实验的涂布，且实验结果的观察较明显。

跟其他组相比，我们这一组做的实验比较失败，菌株不明显，涂布时出现误差，而导致失败。实验操作的过程中，一定且要用无菌操作器材和无菌操作台上进行实验，确保实验的准确性和实验的安全性。

实验步骤虽然很简单，但是往往一个微小的细节处理不当也会导致你整个实验结果的失败。这个我真的深有体会，我们小组的实验结果都很不理想。实验步骤说难也不难，其实无非是先对配置培养液，然后对清洗干净的试管、培养皿以及配置好的培养液进行灭菌，等灭菌完了就放入无菌室进行细菌的接种，最后将接种好细菌和培养液的培养皿放进恒温培养箱进行培养。看似很简单的操作过程我却状况百出。我总结了几点导致这实验失败的地方。通过实践提高学生的动手能力，熟练掌握细菌室的基本操作技能。深化理论知识，使到理论与实践融会贯通。提倡学生多提问，有疑问老师及时解答与学生的学习相动。

第二篇：环境微生物报告

环境微生物报告

一 原理

自然界中的微生物分布极为广泛，举凡空气、废(污)水、土壤等与人类生活息息相关的环境均有微生物存在。干净既清洁的空气原本并不适合微生物生长，但随着环境大气中自然的流动( 如风、气流等 )、人为机械搅动以及微生物粒子本身的运动可轻易将微生物散布于空气中，四处传播并滞留一段时间，因此空气可算是微生物生存的一种媒介。不同地理的位置所存在的空气微生物数量及种类也有所不同，一般而言，室外空气中以土壤微生物占优势，而室内空气中则以人类的呼吸道内发现微生物最多，可能暴露生物危害的作业厂所，包夸下列工厂作业人员：(1)废污水处理厂 (2)家禽、家畜养殖及屠宰厂 (3)纺织工厂 (4)锯木场 (5)纸浆与造纸厂 (6)生技工厂 (7)具冷却水塔之工厂。

空气中的微生物包括许多种类，其中也有致病微生物，因此控制空气中致病微生物通常是微生物环境卫生的重要课题。

(一) 物理性方法

1.清洁：清洁为消毒的重要手段之一，也是保持卫生的基础，清洁方法包括洗涤、清扫与换气三种方法。

2.日光：日光是最经济最实惠的消毒方法，主要利用紫外光杀菌及光触媒杀菌机制。

3.干燥：空气中的湿度是空气中微生物生存条件之一，因此保持干燥可使微生物于空气中的寿命缩短。

4.臭氧：最强的氧化剂之一，可使细菌、真菌等菌体的蛋白质外壳氧化变性，且作用后还原为氧气，不会造成二次污染。

(二) 化学性方法

化学性的消毒方法报瓜使用各种化学药品制程容易或混合液进行消毒，如二氧化氯、溴、碘、丙烯二醇、乙醛气等。

有些微生物对空气中所含有的空气污染物非常敏感，因而可用来作为空气污染生物指标。由于地表生长所需物质几乎皆由雨水及空气中的水气而来，常用空气中硫氧化物含量做指标。

二 设备

1.玻璃培养皿 2.三角烧瓶

3.量瓶 4.取药勺

5.秤药纸 6.玻棒

7.棉花 8.酒精灯

9.试管 10.三角弯棒

11.恒温烘箱 12.电子分析天平

三 操作方法

1. 探讨环境中所存在之微生物，主要针对土壤、废水，空气及废弃物内之微生物进行研究。

2.土壤

(A) 明白土壤的组成及性质

(B) 取1g土壤加入10ml培养液，充分混合均匀

(C) 经一段时间，待土壤颗粒沉淀后取上液体进行10倍连续稀释，选取三个连续浓度。(例如：10?7，10?8，10?9)进行涂碟

(D) 取六个丰富培养基已凝固之培养皿，每个浓度涂两个碟

(E) 放置于37度C培养箱培养，隔天计算菌数，一般以30~300个菌落为合理菌数，计算原土壤中的菌数(平均值±标准偏差)个/g土壤

3.废水

(A) 纪录废水来源

(B) 进行连续10倍稀释，选取三个连续浓度(因废水来源不同，无法明确提供稀释倍数，如以水池为例，选取10?4，10?5及10?6较合理)

(C) 取含丰富培养基之培养皿六个，每个浓度涂两个碟

(D) 放置于37度C培养箱培养，隔天计算菌数，推算回原废水之菌量(个/ml废水)，表示以平均值±标准偏差

4.废弃物

(A) 纪录来源

(B) 以干净之卫生纸沾湿后，再盛装废弃物之垃圾筒(箱)内侧，擦拭约9cm平方(3*3cm)

(C) 将擦拭过之卫生纸浸泡于10ml之培养液中，充分摇晃均匀，静待之后取菌液进行稀释

(D) 以连续10倍稀释后取三个连续浓度涂碟

(E) 涂碟时，每个浓度两个碟，隔天计算菌数球出个菌/cm平方

5.空气

(1) 同时不同地的空气微生物量

(2) 同地不同时的空气微生物量

一.同时不同地

(A) 由同组同学选定不同地点，将含丰富培养基之培养皿打开(四个培养皿)

(B) 暴露相同时间后，盖上盖子，于37度C培养至隔天计算菌数，作图

二. 同地不同时

(A) 选定一地点，将四个培养皿盖子全部打开，在不同时间下盖回盖子，携带回实验室37度C下进行培养至隔天计算菌落并作图

6.张后问题、心得，封面

四.菌种或采样来源

1.土壤: 环境微生物实验室右前方之空地。

2.废水:空间设计系旁水质(云青馆旁)。

3.废弃物: 环境微生物实验室之前方垃圾铁桶。

4.空气:环境实验室前方之空地。

五.问题讨论

讨论-取之于各各不同角落的菌难道都使用第四组配置的培养基就可以了吗?

A: 实验室必须提供使微生物生长的养分及环境条件等要素，这些要素依微生物需求上的不同可分为三类，即能量来源、细胞构造成分以及生长环境因子，而培养基就是在实验室中供给为生物能量来源与细胞构造成分，使微生物生长的营养来源。

六.心得

裕杰：这次我们轮到第五组实验，是大家都说最麻烦的实验，但我到不觉得需要做很久，只是培养基需要很多个而已，分别是空气、废弃物、废水、土壤，共22个培养基，虽然这次实验做的蛮快的，可是这礼拜换我们当值日生...又要多等一小时...

俊杰：第五组的实验遽闻说会很慢，但就实际操作过后觉得并没有什么，是个非常简单的实验啊。忽然有被骗的感觉，除了要细心秤好需求的样本重量级小心涂抹培养皿后什么都是过去十堰长碰到的状况，所以东弄弄西弄弄不一会就完成了，唯一犯错的地方就是培养皿没有放反置，还好旁边的同学有提醒我，不然就糟糕了。

昱祥:经过这次的实验让我们了解和证实其实我们的环境充满了微生物，要不是我们的身体的免疫系统的帮助我们早就被一大堆莫名的微生物入侵。

名翔 :这个实验阿我看到其他组别在做时，都是做很慢的所以就想说这个实验会比较难，不过实际换我们做时却觉得没有想象中的难，不仅有听他组的指导，我们也很快的就摸会了，大概是前面的实验都认真做吧!我觉得已经变平常心了习惯了反而在做实验时，就很容易就上手了，就步骤看一看阿!就Ok了真的课程排的很好一路做下来都连结一贯的所以大概就微生物的了解及操作，更需要感谢第四组的同学有它们赶快完成我们就可以很快结束，所以阿做第四组的真的是影响许多人的进度耶，环境中的微生物真的是无所不在，到处都有看不见的微生物，好家在我们的免疫系统坚守重任我们才可以活力充沛，很小的微生物也是大自然界不可缺少的生物一环，应当保持平衡是最好的

七、实验结果 土壤:10

-1、10-1 10-2、10-2 废水:10-4、10-4 菌落数:无法计数、无法计数

无法计数、无法计数 135、130 10-3、10-3、240 10-5、10-5、135 10-6、10-6

废弃物:10-2、10-2

220、211 76、100 10-3、10-368、60 10-4、10-445、55

29 43 15 45 空气:5分钟 10分钟 15分钟 20分钟

土壤稀释10-1倍(还有许多小点) 土壤稀释10-2倍(还有许多小点)

土壤稀释10-3倍(还有许多小点)

菌落数:258

废水稀释10-4倍 菌落数

:135 废水稀释10-5倍 菌落数

:117 废水稀释10-6倍 菌落数:76