生化：

第一单元 蛋白质结构与功能 1.氨基酸与多肽：半胱（巯基）、蛋（甲硫）氨酸是所有必需氨基酸中唯一含有硫元素的氨基酸。含有苯环的氨基酸是苯丙氨酸和酪氨酸、色氨酸。酸性氨基酸是谷氨酸和天冬氨酸。谷胱甘肽（GSH）由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽（谷-胱-甘），半胱氨酸巯基是其主要功能基团。2.蛋白质的结构：蛋白质一级结构，氨基酸以肽键连接，氨基酸的排列顺序。二级结构：局部主链的空间构象。α螺旋结构特征：1.多肽链主链围绕中心轴旋转；2.氢键维持α螺旋结构的稳定；3.右手螺旋。三级结构：亚基间相对的空间位置。一条多肽链中所有原子在三维空间的整体排布为三级结构。四级结构：由二条肽链以上多肽主链构成，每条肽链具有独立的三级结构，每条肽链称为一个亚基，各亚基间以非共价键维系，称四级结构。 蛋白质的变性：蛋白质的空间结构（但不包括一级结构）遭到破坏。生物学活性丧失。

第二单元 核酸的结构与功能 1.核酸：脱氧核糖核酸（DNA）：遗传信息的贮存和携带者；核糖核酸（RNA）：参与遗传信息的表达。2.DNA的结构与功能：腺嘌呤（A），鸟嘌呤（G），胞嘧啶（C），胸腺嘧啶（T），尿嘧啶（U）。[A]=[T]；[C]=[G]含量相同。两碱基之间的氢键是维持双螺旋横向稳定的主要化学键。纵向则以碱基平面之间的碱基堆积力维持稳定。3.DNA变性及其应用：①DNA变性：氢键断裂。高色效应：紫外吸收（260nm）增强。②解链温度\融解温度（Tm）：UV吸收增值达到最大吸收增值50%时的温度，称Tm。G+C含量愈大，Tm愈高3.DNA变性的复性：DNA发生热

变性后，经缓慢降温，恢复完整的双螺旋结构。核酸探针杂交。同一个体的DNA

碱基组成不受年龄、营养和环境的影

响。DNA碱基组成有种属特异性。P磷

最稳定。4.RNA 的结构与功能：1.mRNA：5′帽子（m7Gppp-），3′尾巴，U代T。编码区是蛋白质合成的模板，三个碱基为一组构成1个氨基酸的密码。2.tRNA：稀有碱基，转运氨基酸，最小。反密码：先配对后反转。3.rRNA：最多。

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生物氧化

要求：

（1） 生物氧化还原的概念，列举与体外燃烧的异同。

（2） 理解电子传递链和氧化磷酸化、解偶联机理。

（3） 解释呼吸链、呼吸链组成及各个成分的作用。写出两条主要呼吸链传递的顺序。

以及相应电子流经各个复合体可以产生多少个ATP。

（4） 熟记作用物水平磷酸化和氧化磷酸化的概念。熟记氧化磷酸化偶联部位及电子传

递抑制剂的作用的部位。解释氧化磷酸化P/O的比值。

（5） 熟记两种穿梭机制，解释其对线粒体NADH氧化磷酸化的意义。

（6） 记住体内生理，生化活动用能和储能形式。

（7） 列举体内CO2生成的主要方式。了解ATP的重要性及机体合成ATP的方式和部位。

（8） 氧化-还原电势E的理解，清楚E0'、ΔG0'的含义，以及放（吸）能反应时E0'，Δ

G0'是负值还是正直。

（9） 要理解不需传递体的生物氧化体系和需递体的生物氧化体系。

（10） 了解化学渗透假说的内容。

（11） 理解呼吸控制率的概念。

糖 代 谢

（1） 掌握糖酵解的定义、过程发生的位置。了解过程中的三个不可逆的反应步骤，以

及在此过程中的ATP的变化，糖酵解的调节。磷酸的类似物氧化和磷酸化解偶联。

了解在有氧和无氧情况下的产物。

（2） 掌握在三羧酸循环之前的氧化脱羧的过程、位置、参加反应的物质和酶，并且在

这个过程中的能量代谢。

（3） 掌握三羧酸循环的路径和位置。羧酸循环的起始物、中间产物和终产物。掌握在

此循环中的能量代谢和参加的酶。清楚脱去的CO2的碳的来源和柠檬酸具有前手

性。

（4） 了解戊糖磷酸途径的作用和有关作用的酶存在细胞中的位置。了解NADPH和核糖

-6-磷酸及其衍生物的作用。戊糖磷酸途径的起始物和该途径的生物学意义。

（5） 了解糖异生的概念和作用。清楚糖异生的过程和它是如何绕过三个不可逆的反应

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生化实验总结

山大11级

时间流逝，转眼间一学期的生化实验已经结束了。经过这一学期的基础实验的学习，让我受益匪浅。

这一学期我们主要做了Folin-酚法测蛋白、稀碱法提取酵母RNA、醋酸纤维薄膜电泳、、纤维素酶活力的测定、最适PH选择、菲林试剂热滴定定糖法、肌糖元的酵解作用、N-末端氨基酸残基的测定（DNS-CL）法、凯式定氮法等实验。这些实验有的很简单，有的却很复杂，但是最终在老师的讲解与指导下，终于顺利的结束了这一课程。所以首先要感谢老师的指导与帮助，教会了我们新的知识，纠正了我们很多错误的操作，让我们以后的实验科研道路可能变得简单。

这一学期的实验让我印象最深的实验应该是菲林试剂热滴定法，这个实验对滴定的操作要求很高，对我们的基本实验技能是一种挑战，而且要忍受高温来滴定，无疑加大了我们实验的难度。因为要在沸腾的情况下滴定，让人有一种胆怯心理，但是最终我们还是正确的做出了实验的结果，而且还比较准确，这让我非常高兴。

还有一个实验就是最后一个生化大实验，这可能是本学期做的时间最长的生化实验了，从下午2点开始到晚上7点，接近5个小时。可以说这个实验让我吃了好多亏，当然更多的是让我们更加清楚的了解了实验器具的使用方法，实验操作规范的重要性。我们一开始竟然没清洗干净改良式凯式蒸馏仪，这让我们一开始的实验遇到了各种各

样的问题。后来在同学的帮助下才发现这个问题，让我们的实验进程慢了很多。不过这也让我们知道了实验过程中一定要仔细认真的做好每一个环节，尽可能保证每一个步骤的操作规范性，这样才能得出正确的结论，而且可以拿到更好更正确的结果。这正好验证了“欲速则不达”这句话。

现在，所有实验都结束了，不过我们以后的实验道路还很长很长。经过这一学期的学习，我发现理论和实践有着本质的不同，理论知识不是完全和实验得出的结果一样，同时唯有通过实验才能更彻底的了解书本的知识，让自己把知识能够灵活运用。总之，生化实验课让我获益颇丰，学习到了很多实验的技能，也发现了身上的很多不足。在以后的生活，我一定不断完善、提高自己的能力，克服自己身上的不足，努力学习，在以后的学习工作中体现出自己的人生价值。

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反馈抑制：一种负反馈机制，其中酶促反应的末端产物可抑制在此产物合成过程中起作用的酶。这种抑制具有协同性、积累性和序贯性。 辅酶：作为酶的辅因子的有机分子，本身无催化作用，但一般在酶促反应中有传递电子、原子或某些功能基团(如参与氧化还原或运载酰基的基团)的作用。在大多数情况下，可通过透析将辅酶除去。

酶的专一性：酶对所作用的底物有严格的选择性。一种酶仅能作用于一种物质，或一类分子结构相似的物质，促其进行一定的化学反应，产生一定的反应产物，这种选择性作用称为酶的专一性。

转氨酶：是催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶。

限制性内切酶：识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。

发夹结构：多核苷酸链中由茎区(双链区、螺旋区)和环区(单链区)组成的类似于“发夹”状的结构。常出现在RNA的二级结构中，在蛋白质的二级结构中也有发夹结构。

5，茚三酮反应（ninhydrin reaction）：在加热条件下，氨基酸或肽与茚三酮反应生成紫色（与脯氨酸反应生成黄色）化合物的反应。 1，酶（enzyme）:生物催化剂，除少数RNA外几乎都是蛋白质。酶不改变反应的平衡，只是

通过降低活化能加快反应的速度。

4，辅酶（conzyme）：某些酶在发挥催化作用时所需的一类辅助因子，其成分中往往含有维生素。辅酶与酶结合松散，可以通过透析除去。 5，辅基（prosthetic group）：是与酶蛋白质共价结合的金属离子或一类有机化合物，用透析法不能除去。辅基在整个酶促反应过程中始终与酶的特定部位结合。

12，辅酶A(coenzyme A)：一种含有泛酸的辅酶，在某些酶促反应中作为酰基的载体。

14，转氨酶（transaminase）：那称为氨基转移酶，在该酶的催化下，一个α-氨基酸的氨基可转移给别一个α-酮酸。

1,酵解（glycolysis）：由10步酶促反应组成的糖分解代谢途径。通过该途径，一分子葡萄糖转化为两分子丙酮酸，同时净生成两分子ATP和两分子NADH。

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20种氨基酸 8种非极性AA Ala丙Val缬Leu亮Ile异亮Pro脯Phe苯丙Trp色Met甲硫也叫蛋 7种极性Gly甘Ser丝Thr苏Cys半胱Gln谷氨酰胺Asn天冬酰胺 Tyr酪R基带负电酸性Glu谷Asp天冬R基带正电碱性Arg精His组Lys赖 重要的肽脑啡肽 催产素 抗生素 谷胱甘肽保护巯基酶活性,防止过氧化物积累,由谷氨酸,半胱氨酸,甘氨酸组成.一级结构蛋白质肽键中氨基酸的排列顺序和连接方式 细胞色素c存在于真核生物细胞线粒体中,是一种含血红素辅基的单链蛋白质,对它分析表明,有28个aa残基是生物共有的,表明这些aa残基是决定细胞色素c的生物功能所必须的. 分子病由于遗传基因突变导致蛋白质分子中aa序列改变造成蛋白质功能发生变化的一种遗传病,镰刀细胞贫血病是最早被认识的分子病, 测定步骤末端分析揭示蛋白质分子中多肽链数目 拆分多肽链 断裂多肽链内二硫键 测定氨基酸组成 分析N端和C端残基 多肽断裂成肽断 测定肽断氨基酸序列 确定肽断在多肽链中的次序 确定蛋白质中二硫键位置 二级结构多肽链的彼此靠近的氨基酸残基之间由于氢键的相互作用而形成的空间关系，最重要是α-螺旋(每圈螺旋包括3.6个氨基酸残基,螺距0,54nm相当于每个氨基酸绕螺旋轴旋转100度,沿轴上升0,15nm,aa残基侧链伸向外侧)和β-折叠(平行和反平行β-折叠)纤维蛋白中β-折叠是反平行式,球蛋白中都存在 β转角(甘氨酸 脯氨酸经常出现)无规卷曲。超二级结构(由若干相邻二级单元组合,形成二级结构组合体aa bab bbb) 结构域(多肽链在二级结构或超二级结构的基础上形成三级结构的局部折叠区,相对独立的紧密球状实体,,三级结构,多肽链在二级结构的基础上，主链构象和侧链构象相互作用，进一步盘曲折叠形成特定的球状分子结构 特征(含多种二级结构单元,具有明显折叠层次,是紧密实体,内部空腔占体积极小) 维持三级结构的作用力氢键 范德华力(定向 诱导 分散效应) 疏水作用 盐键 四级结构由两条或两条以上具有三级结构的多肽链聚合而成有特定三维结构的蛋白质构象。四级结构有对称性,四级结构优越性增强结构稳定性,提高遗传经济性和效率,是催化集团汇聚在一起,具有协同性和 别构效应(蛋白质与配基结合后改变蛋白质的构象,改变蛋白质生物活性的现象) 别构蛋白(蛋白质分子不只有一个配基的结合部位) 蛋白质相对分子质量1cKB~1000KB 分子直径1~100nm 蛋白质沉淀加入大量高浓度中性盐（盐析），有机溶剂，重金属盐，生物碱试剂和某些酸类，热变性沉淀 酸性aa等电点\pi=(pk1+pkr)/2 碱性pi=(pk2+pkr)/2茚三酮紫色 双缩脲紫红色络合物 酚试剂蓝色化合物sanger黄色 edman鉴定多肽和蛋白质的N端aa 肽和蛋白质双缩脲反应,氨基酸不反应紫外分光光度法测定蛋白质的含量 等电点 （溶液在某一ph下使蛋白质所带的正电荷与负电荷恰好相等,其在电场中不向阳极也不向阴极移动,这时溶液的ph）分离纯化方法分子大小 (透析和超滤 密度梯度离心 凝胶过滤) 溶解度差异(等电点沉淀 盐溶和盐析) 别构效应由于一个亚基构象的改变而引起其余亚基以致整个分子的构象.性质,功能的变化 血红蛋白别构效应氧与血红蛋白分子中一个亚基的血红素中的铁结合后,引起亚基构象的改变,又会引起其他3个亚基构象改变,导致亚基间三个盐键破裂,从而使原来结构紧密的血红蛋白分子变得松弛,整个血红蛋白分子就成为易于氧结合的构象,从而大大加快氧合速率 蛋白质构象病由于组织中特定蛋白质承受空间结构或构象变化而引起的疾病 核酸基本单位核苷酸 核苷酸分成磷酸和核苷 核苷分成戊糖和碱基(嘌呤碱嘧啶碱) 腺嘌呤核苷A 腺嘌呤脱氧核苷dA 腺苷酸AMP 脱氧腺苷酸dAMP五种含N碱基：两种嘌呤Ade腺嘌呤，Gua鸟嘌呤 三种嘧啶Cyt胞嘧啶，Ura尿嘧啶，Thy胸腺嘧啶 稀有碱基即修饰碱基（含量稀少的碱基，存在于

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糖代谢：掌握血糖、糖酵解、糖有氧氧化、糖原的合成与分解、糖异生、糖蛋白

和蛋白聚糖的概念

一、糖的主要生理功能是氧化供能:糖在生命活动中的主要作用是提供碳源和能

源、提供合成体内其他物质的原料、作为机体组织细胞的组成成分

二、糖的消化吸收主要是在小肠进行：消化部位： 主要在小肠，少量在口腔。

糖的吸收—吸收部位：小肠上段；吸收形式：单糖

三、糖的无氧分解：

①在机体缺氧条件下，葡萄糖经一系列酶促反应生成丙酮酸进而还原生成乳

酸的过程称为糖酵解，亦称糖的无氧氧化。糖酵解的反应部位：胞浆

②糖酵解的调控是对3个关键酶活性的调节:己糖激酶、6-磷酸果糖激酶-1、

丙酮酸激酶 调节方式：别构调节、共价修饰调节

③两个磷酸化反应：葡萄糖→6-磷酸葡萄糖（己糖激酶）；6-磷酸果糖→1,6-

二磷酸果糖（6-磷酸果糖激酶-1）

④两个底物水平磷酸化反应：1,3-二磷酸甘油酸→3-磷酸甘油酸（磷酸甘油

酸激酶）；磷酸烯醇式丙酮酸→丙酮酸（丙酮酸激酶）

⑤糖酵解的主要生理意义是在机体缺氧的情况下快速供能：是机体在缺氧情

况下获取能量的有效方式。是某些细胞在氧供应正常情况下的重要供能途径（红

细胞

、白细胞、骨髓细胞）。

⑥底物水平磷酸化：ADP或其他核苷二磷酸的磷酸化作用与底物的脱氢作用

直接相偶联的反应过程

四、糖的有氧氧化：

①指在机体氧供充足时，葡萄糖彻底氧化成H2O和CO2，并释放出能量的过

程。是机体主要供能方式。部位：胞液及线粒体

②糖有氧氧化的反应过程包括糖酵解途径、丙酮酸氧化脱羧、三羧酸循环及

氧化磷酸化

③三羧酸循环是以形成柠檬酸为起始物的循环反应系统：柠檬酸循环/Krebs

循环

A.反应部位：线粒体

B.TCA循环由8步代谢反应组成:乙酰CoA与草酰乙酸缩合成柠檬酸/柠檬

酸经顺乌头酸转变为异柠檬酸/异柠檬酸氧化脱羧转变为α-酮戊二酸/α-酮戊

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1蛋白质的变性：在某些理化性质和化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，即有序的

空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质的改变和生物活性的

丧失，称为蛋白质的变性。

2 蛋白质的PI：当蛋白质溶液处于某一PH时，蛋白质解离成正，负离子的趋势相等，即

成为兼性离子，静电荷为零，此时溶液的PH成为蛋白质的等电点。

3 蛋白质一级结构：在蛋白质分子中，从N端至C端的氨基酸排列顺序成为蛋白质的一级

结构。

4 蛋白质四级结构：蛋白质分子中各个亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用，

称为蛋白质的四级结构。

5 肽平面：肽键具有一定程度的双键性质，参与肽键的六个原子C、H、O、N、Cα1、

Cα2不能自由转动，位于同一平面，此平面就是肽平面。

6 DNA变性：某些理化因素（温度、PH、离子强度等）会导致DNA双链互补碱基对

之间的氢键发生断裂，使双链DNA解离为单链，这种现象称为DNA

变性。

7 Tm值：在DNA解链过程中，紫外吸光度的变化△A260达到最大变化值的一半时所

对应的温度称为DNA的解链温度，或称融解温度。

8 分子杂交：在DNA的复性过程中，如果将不同种类的DNA单链或RNA放在同一

溶液中，只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，他们

就有可能形成杂化双链，这种杂化双链可以在不同的DNA单链之间形

成，可以在RNA单链之间形成，甚至还可以在DNA单链和RNA单链

之间形成，这种现象称为核酸分子杂交。

9 同工酶：是指催化相同化学反应，酶蛋白的分子结构、理化性质乃至免疫学性质不

同的一组酶。是由不同基因编码的多肽链，或同一基因转录生成的不同

mRNA所翻译的不同多肽链组成的蛋白质。

10 酶的化学修饰：酶蛋白肽链上的一些基因可与某种化学基团发生可逆的共价结合，

从而改变酶的活性，这一过程称为酶的化学修饰或共价修饰。

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