设计性实验报告

题    目：葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定  

课程名称：  

姓    名：

学    号：

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专    业：

班    级：

指导教师（职称）：

实验学期：  至  学年第学期

葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定

（，，班，学号）

摘要  运用氧化还原滴定的原理设计葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定方案并具体实施。从而进一步掌握及标准溶液的配制和标定方法，巩固氧化还原滴定的操作技能。学会间接碘量法测定葡萄糖含量的方法和原理，进一步掌握返滴定法技能。其中，葡萄糖分子中含有醛基，能被IO-定量地氧化为羧基。故可将一定量过量的在碱性条件下加入葡萄糖溶液中，使醛基完全转化为羧基。再将其酸化，用标准溶液滴定析出的。所用指示剂为淀粉。根据所加标准溶液的量及滴定所耗标准溶液的量结合反应式中各物质之间的计量关系，便可计算葡萄糖的含量。该方法简便易行且准确度高，基本符合实验要求。

关键词  葡萄糖注射液样品（5%）(0.05mol/L)标液   (0.1mol/L) 标液  间接碘量法  返滴定法

1  引言

目前已知测定葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法有两种：

第一种方案：间接碘量法：移取一份稀释10倍后的葡萄糖溶液25.00mL，再加入25.00mL 标准溶液。一边摇动，一边缓慢加入1mol/LNaOH溶液，直至溶液呈浅黄色。将碘量瓶加塞放置10～15min后，用少量水冲洗瓶盖及碘量瓶内壁，然后加入2mL、6mol/LHCl使溶液成酸性，立即用标准溶液滴定至溶液呈淡黄色时，加入3mL、5g/L淀粉指示剂，继续滴定蓝色恰好消失且半分钟内不褪色即为终点^[1]。根据滴定消耗溶液的体积计算试样中葡萄糖的含量。这种方法简便易行，且准确度较高。

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蛋白质浓度的测定（Folin-酚试剂法）

【实验目的】

熟悉并掌握用Folin-酚法测定蛋白质浓度的方法。

【实验原理】

    蛋白质（或多肽）分子中含有酪氨酸或色氨酸，能与Folin-酚试剂起氧化还原反应，生成蓝色化合物，蓝色的深浅与蛋白质浓度成正比，可通过绘制标准曲线，用比色法测定蛋白质浓度。

【实验试剂】

1.标准酪蛋白200ug/ml

2.Folin-酚乙液（原液与水按1:1比例混合，实验室已准备）

3.Folin-酚甲液（实验室已准备） A液  4%Na2CO3: 0.2%NaOH=1：1

B液  1%CuSO4 : 2%酒石酸钾钠=1：1

                             A：B= 50：1   混匀

4.样品血清（稀释200倍）

【实验步骤】

1.      准备9支干净的试管，按表一顺序加入试剂

表一

2.      各试管中加入5ml Folin-酚甲液，用旋涡摇匀器充分混合均匀，静置水浴（37度）10min。

3.      各试管中加入0.5ml Folin-酚乙液，用旋涡摇匀气充分混合均匀，静置水浴（37度）30min。

4.      使用分光光度计，用640nm波长进行比色。

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实验三：福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度

一、 实验目的

1． 学会制备无蛋白血滤液。

2． 掌握Folin－Wu 法测定血糖含量的原理和方法。

3． 掌握7200 型可见分光光度计的使用方法。

二,实验原理

蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物 还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。蓝色的深浅不蛋白质的含量成正比，可用比色法测定。

三.实验仪器 1． 试管 2． 秱液管 3． 卵清蛋白片 4． 7220 分光光度计

四. 实验试剂 1、碱性硫酸铜溶液 A 液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g 及碳酸氢钠11g 溶于蒸馏水，秲释定容至 1000ml. B 液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。 临用时，A 液：

B 液=9：1 混合（体积比），混合液于冰箱中保存（4℃）。 2、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml） (1)1%葡萄糖母液：称取1.000g 葡萄糖，溶于蒸馏水，秲释并定容至100ml。 (2)葡萄糖标准液：取1.0ml 葡萄糖母液于100ml 容量瓶中，加蒸馏水定容。 3、10%钨酸钠溶液： 称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100 毫升。 4、

0.33mol/LH2SO4 溶液： 于53ml 蒸馏水中加入1ml 的浓硫酸。

五.实验步骤 1、无蛋白血滤液的制备： 用奥氏吸管吸取全血（已加抗凝剂）1ml,缓缓放入100ml 锥形瓶中，加蒸馏水7ml， 摇匀，

溶血后（血液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。 再加

0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀，放置5～15 分钟，至沉淀变 为暗棕色（如丌变色可再加0.33mol/L H2SO41-2 滴）。 用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部倒入，如滤液丌清需重新过滤。每 毫升无蛋白血滤液相当于1/10ml 全血。 2、血糖的定量测定： 取25ml 的血糖管3 支，编号。第一支血糖管中加入2ml 蒸馏水（空白管）；第二支血 糖管中加2ml 标准葡萄糖液；用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。 然后向三支血糖管中各加入2ml 新配制的碱性硫酸铜溶液，同时置于沸水浴中8 分钟，取 出，在流水中迅速冷却后,勿摇动，各加4ml 酸性钼酸盐溶液。 一分钟后，用蒸馏水秲释至25ml，混匀，用7200分光光度计在420nm波长处比色， 以空白管调节零点。

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实验五  纤维素酶活力测定（3,5-二硝基水杨酸法）

实验六  3,5-二硝基水杨酸法测还原糖

姓名：周超

同组者：刘炳煜

班级：11级生命基地

学号：201100140067

【实验目的】

1、学习用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的方法

2、学习用3,5-二硝基水杨酸法测定纤维素酶活力

【实验原理】

1、3,5-二硝基水杨酸法测纤维素酶活力的原理

纤维素酶水解纤维素，产生纤维素二糖、葡萄糖等还原糖，能将3,5-二硝基水杨酸中硝基还原成橙色的氨基化合物，利用比色法测定还原物生成量来表示酶的活力。

2、3,5-二硝基水杨酸法测还原糖的原理

    还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其他产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈橘红色，在540nm处有最大吸收，在一定的浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可以测定样品中还原糖的含量。

【实验材料】

一、器材

比色管、水浴锅、电炉、分光光度计、容量瓶100ml、烧杯、移液枪

二、试剂

1、标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml）：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，溶于蒸馏水并定容至100ml，混匀，4°C 冰箱中保存备用。

2、3,5-二硝基水杨酸试剂：称取10克3,5-二硝基水杨酸，溶入蒸馏水中，加入20克分析纯氢氧化钠，200克酒石酸钾难，加水500毫升，升温溶解后，加入重蒸酚3克，无水亚硫酸钠0.5克。加热搅拌，待全溶后冷却，定容至1000毫升。存于棕色瓶中，放置一周后使用。

3、0.1摩尔PH4.5醋酸-醋酸钠缓冲溶液

4、0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)水溶液，溶解后成胶装液，静置过夜，使用前摇匀。

5、西瓜汁

6、酶液（10ug/ml）

【实验步骤】

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福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度

一、原理

蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用比色法测定。

二、实验仪器

1.卵清蛋白片

2.7220分光光度计

3.试管

4.移液管

三、实验试剂

1.Folin-酚试剂A：碱性铜溶液

      甲液：取Na2CO32g溶于100ml0.1mol/l氢氧化钠溶液中

      乙液：取CuSO4.5H2O晶体0.5g，溶于1%酒石酸钾100ml中。

临用时按甲：乙=50：1混合使用。

2.Folin-酚试剂B：将100g钨酸钠、25g钼酸钠、700ml蒸馏水、50ml85%磷酸继100ml浓盐酸置于1500ml的磨口圆底烧瓶中，充分混匀后，接上磨口冷凝管，回馏10小时，再加入硫酸锂150g，蒸馏水50ml及液溴数滴，开口煮沸15分钟，在通风橱内驱除过量的溴。冷却，稀释至1000ml，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。临用时，用1mol/l的氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果，将试剂稀释至相当于1mol/L的酸。

3.1mg/mL牛血清蛋白液：称取1g牛血清蛋白片溶于0.9%氯化钠溶液中，并稀释至1000ml

 四、实验步骤

1.标准曲线的绘制

取7支干燥洁净的试管，编号，按下表加入试剂，比色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标作图。

2.样品测定

准确吸取样液0.5ml于干燥的试管中，同样按下表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求出样液的蛋白质浓度。

五、实验结果

标准曲线的绘制：

则根据y=5.5072x=0.325得x为0.05901，则样液的浓度为0.5901mg/ml.

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蛋白质浓度测定——考马斯亮蓝染色法

（实验报告）

实验日期：2015年4月28日   实验温度：室温

实验地点：生物化学与遗传学实验室   指导老师：***

班级：2013级生物技术1班   姓名：**   学号：********

I.实验目的

    1.学习考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的原理和方法；

    2.熟悉蛋白质含量测定的影响因素。

II.实验原理

    考马斯亮蓝是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的，这是一种迅速、可靠的通过染色法测定溶液中蛋白质浓度的方法。

    考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大吸收波长465nm，与蛋白质结合后变为蓝色，最大吸收波长595nm，在一定的蛋白质浓度范围内吸光度与蛋白质含量成正比。

    蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合，反应2min即可到达平衡，复合物在室温下1h内保持稳定。蛋白质—考马斯亮蓝G-250复合物吸光系数，使得在测定蛋白质浓度时灵敏度很高，可测微克级蛋白质含量。

III.实验试剂与仪器

   1.实验试剂

    (1) 100μg/mL标准蛋白质溶液  5mg酪蛋白溶于50mL的0.1mol/L氢氧化钠溶液      。

(2)考马斯亮蓝G-250试剂  50mg考马斯亮蓝G-250溶于25mL的95%乙醇中，加85%的磷酸50mL，蒸馏水定容至500mL。

(3)正常人血浆。

   2.实验器材

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