生物实验报告单

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实验十二 消化实验

家兔离体小肠平滑肌生理特性

[目的要求]

1、学习离体肠段平滑肌的实验方法。

2、了解肠段平滑肌的生理特性。

[基本原理]

哺乳动物消化管平滑肌与肌肉组织共有的特性，如兴奋性、传导性和收缩性等。但消化管平滑肌又有其特点，即兴奋性较低，收缩缓慢，富有伸展性，具有紧张性、自动节律性，对化学、温度和机械牵张刺激较敏感等。这些特性可维持消化管内一定压力，保持胃肠等一定的形态和位置，适合于消化管内容物的理化变化，在体内受中枢神经系统和体液因素的调节。将离体组织器官置于摸拟体内环境的溶液中，可在一定时间内保持其功能。本实验以台式液作灌流液，在体外观察及记录哺乳动物离体肠段的一般生理特性。

[动物与器材]

兔、恒温平滑肌槽、支架、烧杯、20ml注射器、张力传感器、生物机能实验系统、温度计、台式液、肾上腺素（1：10000）、乙酰胆碱（1：10000）、阿托品针剂（1支）。

[方法与步骤]

1、装好实验装置，平滑肌槽恒温调至37℃。

2、制备离体兔肠段

用木槌猛击兔后头延髓部，致其昏迷后立即剖开腹腔，找到胃幽门与十二指肠交界处。在十二指肠起始端扎一线，取出十二指肠、空肠、放入冷台式液内。先用20ml注射器冲洗内容物，冲洗干净后剪成若干约1.5cm长的小肠段（每一实验小组一段）在其两端结扎，一端做一短线环固定在通气的浴皿内，另一端扎线与张力传感器相连。将肠段完全浸浴在调好温度的平滑肌槽中，并调整好台式液充气量（小气泡接连不断）。

3、开启生物机能实验系统，接通与张力传感器相连的通道。固定管并调节扎线与张力传感器，使肠段运动自如又能牵动传感器（注意：扎线不可贴壁或过紧

过松）。调节增益与扫描速度，使肠段的运动曲线清晰地显示在显示器上并记录肠段活动曲线。

4、实验观察

（1）记录对照肠段运动曲线后，停止供气1分钟并记录曲线变化，同时观察肠段紧张度变化。当出现明显变化后，立即恢复供气。用新鲜37℃台式液冲洗，待恢复正常（注意作好标记）。

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       普通生物学实验报告

一、实验名称：番红-固绿二重染制作百合子房永久切片

二、实验材料和用具：

1.材料：新鲜百合花子房

2.试剂：FAA固定液（50%乙醇89ml+冰醋酸5ml+甲醛6ml)、1%番红、1%固绿、各级乙醇（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%）、脱水剂、石蜡、封片胶。

3.用具：包埋机、切片机、摊片机、快速制片处理仪、恒温箱、解剖刀、镊子、单面刀片、毛笔、乙醇灯、包埋盒、染缸、晾片板、温度计等。

三、实验步骤：

取材→固定→冲洗→脱水→透明→透蜡→包埋→切片→镜检→烤片→染色→树胶封藏→镜检→显微照相

染色程序如下：

＊切片在二甲苯中脱蜡，10-20min,直至全部石蜡脱掉;

＊1/2纯乙醇+1/2二甲苯，5min;

＊经无水乙醇、95%、90%、80%、70%、50%、30%各级乙醇各5min,蒸馏水5min;

＊1%番红水溶液染色10小时左右；

＊用水洗去多余染液；

＊30%、50%、70%、80%、90%、95%各级乙醇脱水，5min;

＊在材料上滴加1%的固绿（95%乙醇配制），染色10-30s;

＊95%乙醇漂洗;

＊纯乙醇脱水5min;

＊1/2纯乙醇+1/2二甲苯，5min,纯二甲苯5min.

四、实验结果：

           

百合子房横切      7微米         4倍

百合子房横切    7微米          40倍

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纳雍县猪场中学生物学科分组实验报告单

班级：        姓名：          组别     实验时间：20##年  月   日

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题目：石蜡切片技术实验报告

学院：农学院，专业：植物学，姓名：张永丰，学号：2011202010

目的

掌握石蜡切片技术，为以后的科研中切出合格的实验装片做准备。并观察植物叶的横切面内部结构。

材料：已经固定好的女贞叶

方法与操作步骤

一、 脱水：依次使用下列浓度的乙醇脱水

50%乙醇—70%乙醇—85%乙醇—95%乙醇—100%乙醇—100%乙醇

每步两个小时。

二、 透明：依次通过下列试剂进行透明

1、1/2无水乙醇1/2二甲苯（加少许番红粉末，对材料进行附染）两个小时

2、二甲苯两个小时

3、二甲苯一个小时

三、 浸蜡：浸蜡步骤如下

1、将材料瓶中的二甲苯取出1/2，加入剩余二甲苯的体积3/2倍的石蜡液于36℃温箱中处理35小时

2、换用纯石蜡液于60℃温箱中处理2小时，再换一次纯石蜡液处理2小时

四、 包埋与切片

1、在提前准备好的纸盒中放入少量蜡液。

2、片刻后放入材料，避免形成断层还要注意材料摆放的位置和方向。

3、及时将蜡块冷却，防治形成结晶。

4、修块与粘连：将多余的石蜡切除，使蜡块成为梯形；将蜡块一正确的方向粘连在枕木上。

5、切片：利用切片机将蜡块切成薄片。切片厚度为8～10μm，以每分钟40～50转为宜。

6、粘片与展片：在载玻片上滴一滴黏贴剂和一滴蒸馏水用牙签涂匀，将蜡带光面朝下固定于载玻片上，放到展片台上经加温使其充分展开。

7、干燥：将展好的片放于36℃温箱中干燥16小时

五、脱蜡：切片分别经过下列步骤进行脱蜡

    二甲苯 30min  1/2二甲苯1/2无水乙醇 5min无水乙醇 5min 95%乙醇5min 85%乙醇 5min  70%乙醇 5min

六、染色：染色分为番红染色和固绿染色两步

 1、番红染色：将载玻片放入盛有番红染液（1%番红，70%乙醇）的染缸中染色22小时

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1、正常情况下，我们观察到离体小肠平滑肌在台氏液中可以自动地、缓慢地收缩，但其节律性很不规则。小肠平滑肌自律性产生的离子基础尚未完全清楚，目前认为，它的产生可能与细胞膜上生电性钠泵的活动具有波动性有关，当钠泵的活动暂时受抑制时，膜便发生去极化；当钠泵活动恢复时，膜的极化加强，膜电位便又回到原来的水平。 2、在浴槽中加入0.01%乙酰胆碱（Ach ）2滴（约0.2ml）后，可见离体肠管活动增强，描记曲线出现收缩频率变快，幅度增加。出现上述现象的机理，目前认为与消化道平滑肌细胞产生动作电位的离子基础是Ca2+的内流有关。乙酰胆碱可与肌膜上的M受体结合，使得两类通道开放：一类为电位敏感性Ca2+专用通道，另一类为特异性受体活化Ca2+专用通道。前一类通道对Ach敏感，小剂量Ach即引起开放；后一类通道对Ach相对不敏感，只有大剂量Ach才会引起开放。这两类通道开放都使得肌浆中Ca2+增高，进而激活肌纤蛋白—肌凝蛋白—ATP系统，使平滑肌收缩，肌张力增加。3、在浴槽中加入0.01%肾上腺素2滴（约0.2ml）后，可见离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩频率变慢，幅度减小以及基线下移。出现上述现象的机理，目前认为与肠肌细胞膜上存在α和β两中受体，α受体又分为α抑制型受体和α兴奋型受体有关。肾上腺素作用于α抑制型受体，引起肠肌膜上一种特异性受体活化，使K+外流增多，细胞膜发生超极化，肠肌兴奋性降低，肌张力下降。同时，肾上腺素还作用于β受体，①它的激活引起肠肌细胞膜中的cAMP合成增多，cAMP激活肠肌膜及肌浆网上Ca2+泵活动，使肌浆中Ca2+浓度降低，亦使肌张力降低；②β 受体激活后还促使K+及Ca2+外流增加，加速膜的超极化，促进了肠肌肌张力的减低。 4、在浴槽中加入2%氯化钙溶液2滴后，离体肠管活动增强，描记曲线出现收缩幅度增加。这是因为加入氯化钙后，细胞外液Ca2+浓度升高，则Ca2+内流增加，使得细胞内液中Ca2+浓度升高，Ca2+与钙调蛋白结合增加，促进了横桥的激活。因而收缩力增加。5、在浴槽中加入1mol/L盐酸溶液2滴后，离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩幅度降低，频率变慢。出现这一现象，目前认为其原因在于：①细胞外H+升高时，Ca2+通道的活性受到抑制，使得Ca2+内流减少。② H+升高能干扰肌肉的代谢和肌丝滑行的生化过程： H+能与Ca2+竞争钙调蛋白的结合位点而使肌球蛋白ATP酶活性降低（近期有理论认为是直接抑制作用而非竞争作用）；使肌原纤维对Ca2+的敏感性和Ca2+从肌质网的释放量减少。 6、在加盐酸使平滑肌收缩减弱的基础上，再加2滴NaOH于浴槽中，则肠管活动出现相反的情况，即肠管活动增强。原因在于NaOH可以中和H+，改变了细胞外液的PH值，PH过高、过低，收缩幅度及张力都会降低，最适PH时收缩效果最好。7、浸浴小肠肠管的台氏液温度以38℃~40℃为宜，低于或高于这个温度，都会影响结果。因为肠管平滑肌对温度改变极为敏感， 25℃ 当温度降到30℃以下时，由于代谢水平的降低，兴奋性减弱，可出现收缩曲线基线下移，频率变慢，收缩幅度变小。有时可能会见到基线先上移后下降的现象。这是因为降温本身对肠管是一种刺激，也可短暂地加强代谢活动，所以肌张力升高。 42℃ 当温度高于40℃时，由于酶活性提高，各离子通道活性增加，使得基线上移，收缩频率增高，幅度增加。当然，如果台氏液温度过高（50℃以上），可因蛋白变性，使肠管收缩功能消失。结论： 1、消化道平滑肌具有自律性，但其收缩缓慢，节律性不规则。 2、消化道平滑肌具有一定的紧张性。 3、消化道平滑肌的活动易受温度、PH值及其它化学因素、药物因素的影响。

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人体机能学实验报告

                                                    

离体小肠平滑肌肌的生理特性

实验结果：             实验讨论：

1、   我们可以看到小肠从17℃转移到38℃的台氏液中，小肠平滑肌的收缩幅度、基线上移和频率增加，产生上述的主要原因是：小肠肠管的台氏液温度以38℃~40℃为宜，低于或高于这个温度，都会影响结果。由于小肠管平滑肌对温度改变极为敏感，当温度降到30℃以下时，故代谢水平的降低，兴奋性减弱，可出现收缩曲线基线下移，频率变慢，收缩幅度变小。

2、   在浴槽中加入乙酰胆碱后，可见离体肠管活动增强，幅度增加。出现上述现象的机理，目前认为乙酰胆碱可与肌膜上的M受体结合，使得两类通道开放：一类为电位敏感性Ca2+专用通道，另一类为特异性受体活化Ca2+ 专用通道。前一类通道对Ach敏感，小剂量Ach即引起开放；后一类通道对Ach相对不敏感，只有大剂量Ach才会引起开放。这两类通道开放都使得肌浆中 Ca2+增高，进而激活肌纤蛋白—肌凝蛋白—ATP系统，使平滑肌收缩，肌张力增加。

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