第2课时　无菌技术及大肠杆菌的培养和分离的实验操作

基础达标

知识点一　无菌技术

1．将配制好的培养基进行灭菌应用                                                                        (　　)

A．灼烧灭菌               B．高压蒸汽灭菌        C．干热灭菌               D．煮沸灭菌

2．下列操作与消毒灭菌无关的是                                                                           (　　)

…… …… 余下全文

动物实验

实验目的要求： （1）强化训练无菌操作观念及技术。

（2）练习开腹与关腹的常规步骤与方法。

（3）训练手术基本操作：切开、止血、结扎、缝合和学会荷包缝合。

（4）熟悉胃穿孔修补的基本原则和方法。

（5）通过动物阑尾切除了解人体阑尾切除术的手术步骤。

器材：卵圆钳、手术刀、组织剪、线剪、组织镊、有齿镊、直、弯血管钳，拉钩，持针钳，缝针、丝线、

纱布、肠钳、注射器、5或7号针头。

兔阑尾切除术（仿人阑尾切除术，图12）

25％乌拉坦4ml/kg体重由兔的耳缘静脉注射进行麻醉，成功后将其仰卧平放并绑缚在实

2遍，铺无菌洞巾。

10cm，出血点用直血管钳钳夹后用1

号丝线结扎切开一小口(图12—2)。术者和第一助手各持一把弯血管钳夹持对侧切口边缘，将其提起，用组织剪纵向剪开，此时可用长镊子或左手食指和中指插入腹腔，沿切口平行方向将内脏推向深面，以免损伤内脏（图12

12cm，呈卷曲状，籍系膜与回肠相连，其颈部变细，近端开

丝线贯穿缝扎(图12—4)，以控制出血。也可以先在阑尾的基部分别分离阑尾的动脉，各夹两把血管钳，离断缝扎，再将阑尾系膜的内外侧浆膜仔细剪开，这样就可以使阑尾与回肠之间的联接变松、距离变宽，

(图12—5)。作荷包缝合时缝针只穿透浆膜层和肌层，而不穿透肠腔，同时宜将荷包缝合在结肠上。阑尾周围用湿纱布垫好，以免切除阑尾时其内容物流入腹腔和涂擦石碳酸时溅到它处。在阑尾结扎线远侧0.3—0.5cm处用直血管钳钳夹阑尾，紧贴直血管钳用手术刀切除阑尾，残端顺次用棉签蘸纯石炭酸、70％酒精和盐水（三联棒）涂擦消毒和破坏阑尾残端粘膜，以防止术后因粘膜继续分泌液体而形成囊肿（石炭酸涂于残端粘膜内面，切勿溅到它处引起组织

兔胃穿孔修补术（仿人胃穿孔修补术，图11－1）

操作步骤方法：

(1) 麻醉、消毒、铺巾、开腹、关腹同实验1。

…… …… 余下全文

在实验报告中，黑色部分为必写部分，红色部分可以根据个人情况省略，蓝色部分为同学们自己补充部分，最后的思考题必须独立完成，不得抄袭，凡是抄袭思考题，一律0分，实验报告没收，重新写一遍。

目录

实验1 Led闪烁灯与流水灯... 2

实验2 GPIO键盘检测... 7

实验3 外部中断... 10

实验4 串口收发实验... 12

实验5 SysTick定时器... 14

实验6  RTC日历... 16

实验7 定时器中断... 18

实验8 输入捕获... 20

实验1 Led闪烁灯与流水灯

日期：                   

实验室:电子信息实验楼307

实验名称：Led闪烁灯与流水灯实验

实验设备：计算机，cortexM3最小系统板，单片机开发板。

实验目的：掌握工程建立方法和程序烧写方法，掌握gpio口的数据输出方法。

实验步骤：

一：工程建立方法：

1：新建文件夹，用自己的学号+实验编号作为文件夹名字。

2：拷贝一些文件夹到自己的文件夹，cm3，stm32f10x_stdperiph_driver,user 三个文件夹。 

3：在自己文件夹根目录下面新建空目录mdk，用来存放工程文件。在mdk目录下建两个空文件夹，list和obj。分别用来存放列表文件和目标代码文件。

4:在keil中建立一个工程，工程名字为自己的学号+实验编号"B10120101"。

5:在工程建立的时候选择cpu为stm-103RB.不添加keil自带的stm启动代码。

6：option 设置object文件夹为obj文件夹。勾选“creat hex file”，设置listing 为list文件夹。

…… …… 余下全文

无菌操作技术主要是指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施，其中包括无菌环境设施、无菌实验器材及无菌操作方法等。

微生物学四项基本实验技术是指显微镜技术、无菌操作技术、纯种分离技术和纯种培养技术。

微生物学实验技术所用玻璃器皿。不但要像化学实验那样要求清洁，而且还要无菌（玻璃器皿、接种工具、材料要灭菌），实验过程中要严格无菌操作。实验结束后若桌面被菌液污染，可用3％来苏尔液擦拭干净，带菌工具（吸管、塑料吸嘴、玻璃刮棒、染色涂片等）洗涤前浸泡在3％来苏尔液中，消毒后再清洗。有微生物污染的废物要集中处理，不能污染环境。

无菌操作一般是在无菌环境条件下，使用无菌器材进行检验或实验过程中，防止微生物污染和干扰的一种常规操作方法。无菌操作的目的，一是保持待检物品不被环境中微生物所污染；二是防止被检微生物在操作中污染环境和感染操作人员，因而无菌操作在一定意义上讲又是安全操作。

无菌操作技术在微生物四项基本实验技术中的应用和意义从以下四个方面做简要的论述：

一、在显微镜技术中的应用和意义

微生物个体微小，必须借助显微镜才能观察到，因此在微生物学的各项实验技术中，显微镜就成为研究者不可缺少的工具。显微镜的种类很多，根据其结构，一般分为光学显微镜和非光学显微镜两大类，在实验室观察微生物形态常用的显微镜，以光学显微镜最为常见。在显微镜技术中必不可少的是涂片、染色等技术，无论是在制片还是染色等过程中，防止杂菌的污染即无菌操作都是非常重要的，一旦被观察的玻片遭到杂菌污染，将使观察结果受到严重偏差和影响。

因此在操作过程中为保证无菌操作应注意：①在实验室观察平板培养物时，一般不宜开盖观察；检验结果，可以开盖检查。如取菌作涂片染色或移植培养时。培养皿上下盖可适度开缝，但不准完全揭开；②涂片染色时应使用夹子夹持玻片，切勿用手直接拿玻片，以防感染细菌；③用过的玻片应放置消毒液中或直接煮沸消毒，冲洗液也应煮沸或消毒处理后再倒掉以免污染环境。

…… …… 余下全文

无菌技术操作试卷答案

一．填 空

1．以开启过的未被污染的溶液可保存。

2．无菌盘的有效期不超过小时。

3．无菌包的有效期一般为天，或应重新灭菌。

4．一套无菌物品只供一位患者使用，以防

5．无菌包外应注明物品的

6．消毒液应浸没无菌持物钳轴节以上cm处。

7．打开无菌容器，将盖平移离开容器，向上置于稳妥处或拿在手中。

8．手持无菌容器时，应托住容器，手指不可触及容器及

9．戴手套时未戴的手不可触及手套的

10．打开包后的干镊子罐、持物钳应当

二．判 断 题

1．已倒出的无菌溶液没有用可以再倒回瓶中。（× ）

改错：无菌溶液倒出后，不可再倒回瓶中。

2．无菌持物钳用于夹取无菌物品，可夹取无菌纱布，无菌治疗巾，也可夹取油纱布。（ × ） 改错：无菌持物钳不能用以换药和消毒皮肤，不能触碰未经消毒的物品，不能用持物钳夹取油纱布及直接伸入药瓶内醮取药液。

3．高压蒸汽灭菌的纱布敷料、棉球打开未用完，最长保存期为24小时。（ √ ）

4．半铺半盖法铺无菌盘时，治疗巾的上层向远端呈扇形折叠，开口边向外。（

5．一个无菌容器内可以放两把无菌持物钳。（ × ）

改错：一个无菌容器内只可放一把无菌持物钳。

三．选 择 题

1．取无菌溶液时，最先检查（ B ）

A、有无裂缝 C、有效期 D、瓶盖有无松动 E、溶液的浓度 取无菌溶液时，要先核对瓶签（药名、浓度、剂量、有效期），检查瓶盖有无松动，瓶口有无裂缝，无菌溶液内有无沉淀、浑浊、变色等。

2．无菌持物钳的正确使用方法是（ B ）

A、取放无菌持物钳时，将钳端闭合

C、钳端向上，用后立即返回

D、门诊应每周更换一次 √ ）

E、一个容器内最多能放两把

无菌持物钳的正确使用方法：

①手固定在持物钳上端的两个圆环或镊子上1/3部分。②保持头端向下，闭合钳端，垂直取出，钳端不可倒转向上。③用后闭合钳端，立即垂直放回容器，浸泡时轴节松开。④到远距离取物时，应将持物钳和容器一起移至操作处。④无菌持物钳及其浸泡容器每周清洁、消毒一次，更换消毒液，使用频率较高的应每天清洁、灭菌。⑤不可用无菌持物钳夹取油纱布，防止油粘于钳端而影响效果。

…… …… 余下全文

无菌实验室操作规程

一 日常管理

1 准备工作

实验前，准备齐当天所用物品（包括废液缸），并置2%新洁尔灭溶液（3000ml）及空盆于无菌间，开操作台和无菌室紫外灯30min。放臭氧15分钟后，再进无菌间操作。

2 无菌间操作

进无菌间后换拖鞋、穿工作服、戴口罩、帽子、手套，然后用新洁尔灭洗手；

将所用的试剂用新洁尔灭或75％酒精擦拭后放入操作台，撕封口膜，用酒精棉球擦拭瓶口，再在酒精灯火焰上烤，之后用止血钳夹住瓶塞取下；

在操作台内，瓶口尽量不应直立向上，在盖塞前烤塞子与瓶口（除酒精棉球瓶外），再盖严加封口膜取出；

做完实验，清理操作台，用新洁尔灭擦拭台面及操作台上的物品。

3 无菌间清扫

无菌室每周要彻底打扫一次，用新洁尔灭擦墙、门、仪器及桌面等；75%酒精擦窗、玻璃等；过氧乙酸擦操作台、出问题或准备要用的培养箱。

4 无菌服

冬天时一周一洗；夏天时一天一洗。按实验室值日生顺序轮流洗涤，并由上一人及时通知下一人。洗涤晾干，高压灭菌后放入无菌间紫外杀菌。

5 臭氧发生器

每晚最后离开实验室的，关电器、门窗等，并打开臭氧发生器定时一小时。

二 实验室物品处理

1新塞子的处理

新胶塞对细胞有一定的毒害作用，其处理方法为：

新胶塞 →洗衣粉洗→洗涤灵洗→晾干→20g/1000ml的NaOH煮30min→水冲洗→去离子水浸泡过夜→双蒸水冲洗→晾干→备用

有水沸腾时算起，煮30min。

2 接触细胞的用品的处理

用品→过氧乙酸浸泡过夜[20ml/10000ml过氧乙酸]→取出→洗涤灵擦洗→水冲→晾干→泡酸[洗液]→自来水浸泡过夜→去离子水冲洗→双蒸水冲洗→晾干→备用

3 未接触细胞的用品的处理

用品→自来水冲洗[可适当用洗衣粉或洗涤灵洗]→去离子水冲洗2~3次→双蒸水冲洗2~3次→晾干→包口→备用

滤器、瓶→自来水冲洗30min→去离子水冲洗→双蒸水冲洗→晾干→备用

…… …… 余下全文

无菌技术操作流程

一、评估

1、查看无菌物品名称，灭菌日期

2、看指示胶带是否变色

二、计划

1、自身准备：着装符合要求、修剪指甲、洗手戴口罩

2、用物准备：大小方盒各一，持物钳浸于消毒容器内，敷料缸，无菌布包大小各一，无菌溶液、消毒剂、棉签、启瓶器、弯盘、无菌手套、笔

3、环境准备：选择清洁宽敞的环境

三、实施

一、铺无菌盘：先用抹布或无菌敷料抹盘

1、无菌包使

查看名称、日期、消毒指示胶带，解开无菌包，包带打一活结放包布边下逐层打开。打开外角与左右两角→打开内角.

2、无菌持物钳的使用：

打开浸泡容器盖，钳端闭合向下取出不可触及浸泡液面以上部分使用保持钳端向下，夹取无菌巾，用后即放回容器中，盖盖。

3、无菌包余物按原样折好遮盖系好“一”字行带，注明开包日期时间。

4、双手捏无菌巾外面两角，轻轻抖开，双折铺于治疗盘上，上面一层扇行折叠，开口边向外。

5、将小包内物品全部取出时，包括在手上打开，另一手将包布四角抓住，稳妥地将包内物品放入无菌区域。

6、无菌容器使用

打开无菌容器盖，内面向上，平放于桌上，夹出无菌物品后在盖严。

7、取用无菌溶液

仔细查对溶液，揭盖，手掌紧贴瓶签先倒少许液冲瓶口，再由原处倒出适量溶液于容器内，套上瓶塞，消毒瓶塞，注明开瓶时间。

8、铺盘

盖严无菌巾，将开口处向上翻折二次，两边向下翻折一次。

二、戴无菌手套

1、打开无菌盘上层无菌巾一小部分，露出无菌面。

2、拿手套对号码、查消毒指示胶带、对日期，取出滑石粉抹在手上持手套翻折部分，两手套按指想对。

3、一手伸入戴好再以戴好之手伸入另一手套之返折部分，依法戴好，将返折部分翻转，调整手套使其贴合，揭开无菌盘操作。

4、脱手套：洗净血迹或污物，从手套口翻转脱下。

四、评价

1、无菌观念强

2、操作熟练

3、完成时间8分钟

…… …… 余下全文