篇一：动物肝脏中DNA的提取和鉴定

动物肝脏中DNA的提取和鉴定

一、实验目的

1.学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。

2.掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法。

3.学习核酸染色的方法。

二、实验原理

为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取DNA。由于DNA分子在生物体内的分布及浓度不同，要选择适当的材料提取DNA。动植物中小牛胸腺、动物肝脏、脾脏、鱼类精子、植物种子的胚中都含有丰富的DNA。微生物中，谷氨酸菌体含7%～10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠杆菌9%～10%。

从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。对于低等生物，如从病毒中提取DNA比较容易，多数病毒DNA相对分子量较小，提取时易保持其结构完整性。从细菌及高等动植物中提取DNA难度大些。细菌DNA相对分子质量较大，一般达2×109Da。因此易被机械张力剪短。细菌DNA，除核DNA外，还有质粒DNA等。

1.DNA的基本功能

生物遗传信息复制的模板和基因转入的模板，是生命遗传繁殖的物质基础，也是个体生命活动的基础；作为DNA分子中的某一区段，有复制、转录和翻译等主要功能称为基因。

2.核酸的结构与功能

核酸（nucleic acid)是以核苷酸为基本组成的生物大分子。天然存在的核酸有两类，一类为脱氧核苷酸（deoxyribonucleic acid,DNA)，另一类为核糖核酸（ribonucleic acid,RNA)。DNA存在于细胞核和线粒体中，携带遗传信息。RNA存在于细胞质和细胞核内，参与细胞内DNA遗传信息的表达。

3.DNA的存在形式

天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白（DNP）形式存在于细胞核中。要从细胞核中提取DNA时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖、RNA及无机离子等，从中分离DNA。DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。DNP在低浓度盐溶液中几乎不溶解，如在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化钠中溶解度很大，比纯水高2倍。RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小，在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此在提取时

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篇二：DNA提取实验报告

大肠杆菌和植物基因组DNA提取

生科基彭健鹏 2012141242048

1.大肠杆菌DNA提取方案设计

实验目的

学习并掌握细菌基因组的提取方法

提取大肠杆菌DH5α中的DNA并进行质量检测

实验概述

提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含十二烷基硫酸钠（SDS）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。

试验准备

实验材料：大肠杆菌DH5α菌液

实验试剂：LB液体培养基，TE溶液，10%SDS，蛋白酶K，5mol/L NaCl， CTAB/NaCl溶液，酚/氯仿/异戊醇，异丙醇，70%乙醇

实验仪器与用具：微量移液器，低温离心机，水浴锅，eppendorf管，恒温摇床

实验步骤

（1）将2mL培养至对数期的大肠杆菌DH5α菌液5000rpm冷冻离心10分钟弃上清；

目的：分离大肠杆菌与其培养液。

（2）加190μL TE悬浮沉淀，并加10μL 10%SDS，1μL 20mg/mL蛋白酶K，混匀，37℃保温1h；

目的：裂解大肠杆菌。

（3）加30μL 5mol/L NaCl，混匀；

目的：盐析。NaCl降低DNA在水中的溶解度且不破坏其结构,从而提取粗的DNA。在浓氯化钠（1-2M）溶液中， DNP 的溶解度很大， RNP 的溶解度很小；在稀氯化钠（0.14M）溶液中， DNP 的溶解度很小， RNP 的溶解度很大；0.14MNaCl-0.01MEDTA溶解RNP，而使DNP沉淀。

（4）加30μL CTAB/NaCl溶液，混匀，65℃保温20min；

目的：CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀。通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖类物质分开。最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。

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篇三：DNA提取实验报告

生物学大实验（二）

实验名称：质粒扩增、提取和鉴定实验

实验目的 通过对智力扩增、提取和鉴定试验的实验原理介绍和实际操作，加深对分子生物学基本技术的理解和掌握。

实验仪器设备：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、摇床、离心机、不同型号移液枪若干支、磁力搅拌器、恒温水浴锅、电炉、制冰机、琼脂糖凝胶电泳仪、超净工作台等。

实验原理：质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中，通过对细菌、放线菌和真菌的培养来实现对质粒的扩增。经过处理的线状DNA在外界环境恢复正常的时候不能够复性而质粒DNA可以复性，从而可以实现质粒DNA和染色体DNA的分离。限制性内切酶能特意地结合于一端被称为限制性酶识别系列的DNA系列之内或其附近的特异位点上，并切割DNA。当对提取的质粒DNA进行电泳时，同一质粒DNA其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分子的泳动速度快。

实验步骤：

一 质粒扩增

（1）普通LB固体培养基制备：

制备LB培养基，倒入灭菌瓶中高压灭菌，待完全冷却后，保存备用。

（2）将大肠杆菌接种于LB培养基中，37℃振荡培养过夜(200转/分)

二质粒DNA的提取(碱法)

1将菌液倒入1.5ml的微量离心管中， 12000rpm离心一分30秒，弃去上清液，以得到较多的细菌沉淀；
2、将微量离心管开口倒置在卫生纸上，使离心管底部的液体流尽。
3、加入100μl用冰预冷的溶液I，剧烈振荡，将沉淀彻底悬浮，然后室温放置5分钟。
4、加入200μl现配的溶液II，盖紧管口，轻轻快速颠倒离心管（不要振荡，以避免DNA断裂），使混合物混匀，冰浴5～10分钟。
5、加入150μl预冷的溶液III，盖紧管口，温和颠倒混匀，使粘稠地细菌裂解物均匀地分布于溶液III中，冰浴5分钟。
6、取上部水相，移入新的离心管，加入2倍体积预冷的无水乙醇（也可同时加入1/10倍体积的醋酸钠），震荡混匀，室温放置10分钟沉淀双链DNA，然后4℃，12000rpm离心10min。
7、弃去上清液，将离心管倒置于卫生纸上，使离心管底部的液体流尽后，加入预冷的1ml 70％乙醇。
8、弃去上清液，将离心管倒置于卫生纸上，使液体流尽，置DNA干燥5～10分钟。

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篇四：哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告

二．实验报告

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篇五：实验6 动物肝脏中DNA的提取

实验六：动物肝脏中DNA的提取及定量测定

一、实验目的

1、学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术。

2、了解常见生化组分提取技术。

3、学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法。

二、实验原理

核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形成存在，其中DNA主要存在于细胞核中，RNA主要存在于核仁及胞质中，在制备核酸时应防止过酸、过碱及其他能引起核酸降解的因素的作用。全部操作过程应在低温下(4℃)进行，必要时还要加入酶抑制剂。如柠檬酸、氰化物、砷酸盐、乙二胺四乙酸(EDTA)等可以抑制DNA酶活性，皂土可抑制RNA酶活性，同时SDS或苯酚等蛋白变性剂也可使核酸降解酶破坏。

动植物的DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液(如1mol/L NaCl)，但在0.14mol/L的盐溶液中溶解度很低，而RNA核蛋白则溶于0.14mol/L盐溶液，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。

将抽提得到的脱氧核糖核蛋白用SDS(十二烷基硫酸钠)处理，DNA即与蛋白质分开，可用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去，而DNA则溶解于溶液中。向含有DNA的水相中加入冷乙醇，DNA即呈纤维状沉淀出来。

DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成w-羟基-r-酮基戊醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物(λ_max=595nm)。

DNA(脱氧戊糖基) ^[H+] HO-CH₂-C(=O)-CH₂-CH₂-CHO ^二苯胺蓝色化合物