蛋白质生化实验报告
生殖免疫研究所
薛樱子
学号:1133111003
实验一 溶液中蛋白质浓度的测定
一 光吸收法(测量范围:0.1—2mg)
1实验原理:由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,它们具有吸收紫外光的性质,其吸收高峰在280nm波长处,且在此波长内吸收峰的光密度值OD280nm与其浓度成正比关系,故可作为蛋白质定量测定的依据。
纯蛋白的A280/A260为1.8,纯核酸的A280/A260为
2步骤:
2.1)打开仪器的电源开关(接220V交流电),打开比色槽暗箱盖,选择光源,选档,选波长,用调零旋钮调暗电流至0 。
2.2)将空白对照样品和待测溶液装入石英比色杯
2.3)将仪器的比色槽暗箱合上,比色槽处于蒸馏水(或校正缓冲液)校正位置,旋转光量调节器使电表指针正确处于0 。
2.4)拉出比色槽手柄拉杆使比色槽处于样品位置读数。
2. 5)在260nm和280nm分别读数(分别用缓冲液调0),根据上表查处相应蛋白浓度,根据喜事倍数计算原溶液蛋白浓度,根据体积计算总蛋白量。
3结果与分析:
A280=0.571 A260=0.340
根据公式:蛋白浓度=1.5 × A280 —0.75 × A260=1.5×0.571—0.75×0.340=0.6015
也可以根据蛋白质和核算含量折算图表画出一条直线估算蛋白质的浓度。
结果说明我的蛋白样品浓度是0.6015mg/ml。
二 Folin—酚法(测量范围:10-300ug/ml)
1实验原理:在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。 Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深蓝色(钼兰和钨兰的混合物)。在一定的条件下,蓝色深度与蛋白的量成正比。
…… …… 余下全文