开展人乳头瘤病毒检测的可行性报告

一、 基本情况

在全球范围内，每年约有20多万女性死于宫颈癌。在发展中国家，宫颈癌则属于常见多发的妇科肿瘤，排行榜首。我国每年新发现的病例为13.15万，发病率占世界的1/3，患者的年龄越趋年轻，发病史缩短。而宮頸癌是唯一可以通过篩查而预防的癌症。而人乳头病毒是导致宫颈癌的高危（必要）因素。

20xx年在巴黎召开的“EUROGIN”子宫颈癌全球防御大会一致认为：人乳头瘤病毒（HPV DNA）检测是宫颈病变及宫颈癌筛查的最佳方法。20xx年被中国宫颈癌筛查及早诊早治指引采纳。结合高危人乳头瘤病毒（HPV DNA）检测与细胞学检查比单独细胞学检查更具经济效益。

二、 方案

引进人乳头瘤病毒检测，该检测则是对宫颈癌预防及早期发现最有效的检测，不仅可以监测病人病毒的分型，而且对早期宫颈癌的发现和治疗非常有价值。高危人乳头瘤病毒（HPV DNA）阳性比细胞学检测能更准确预测宫颈癌病变。

三、 临床意义

.操作简便快捷, 检测的通量大

.检测灵敏度高，<0.1pg/ml，5000拷贝/ml

.特异性高（双重特异性：引物特异性及探针特异性）

.采用UNG技术及闭管操作，有效消除产物污染风险；

.适合于临床检测高危HPV和宫颈癌的早期筛查

.成本低，经济效益高。

四、 预期效果

人乳头瘤病毒检测适用于：门诊妇科病人的常规检查和体检的筛查；早期宫颈癌的检查；临床上对病人治疗效果的观察。从而可以大大的提高门诊及体检的收入和妇产科的诊断手段，进而提高我院对宫颈癌的治疗和早期的检出率！为我院取得经济效益和社会效应双重效果！

五、 结论

该检测具有极高的临床应用价值，无论从临床意义及其经济效益来看，均具有可行性。人乳头瘤病毒检测产品是针对国内患者人群的现状开发出的具有高临床敏感度和临床特异性的产品。比传统的检测更经济、更精确、更科学、更安全，为我院诊疗宫颈癌开辟一条崭新的道路！

…… …… 余下全文

如何检查人乳头瘤病毒

人乳头瘤病毒的患病人群现在越来越广，很多人发现一些类似人乳头瘤病毒的症状就担心自己是否也患上了此病，那么如何检查人乳头瘤病毒?对此一起来跟专家详细了解一下。

如何检查人乳头瘤病毒?

1、电镜检查 HPV是最早在电镜下观察到的病毒之一，将活检标本负染，若能在电镜下见到特征性的病毒颗粒，即可作出诊断;而用免疫电镜可提高检出率。电镜检查法虽然准确率很高，但费时，需特殊仪器设备，且检出阳性率很低。

2、PCR技术 应用此法可检测HPV-DNA，还可进行基因分型。灵敏度可达1fg，该法操作简便省时，而且标本来源不受限制，如病变组织或脱落细胞，分泌物或黏液，新鲜标本或保存已久的石蜡切片等标本均可。

3、血清学检查 目前尚不能用血清学方法对HPV进行确诊及分型。为发展型特异性血清学试验现正在研究试用基因工程表达产生的晚期蛋白来检测患者血清中相应的抗体。初步认为，L1和L12蛋白可用于检测HPV型特异性免疫应答。

4、核酸杂交技术 核酸分子杂交技术不仅能对HPV进行确诊，而且还能对HPV进行分型。利用放射性核素或生物标记的HPV-DNA探针来检测患者标本中是否存在互补的核酸链。最常用的方法为斑点杂交法，其次为DNA印迹法及原位杂交。

5、内镜检查 要发现阴道、肛门及直肠、尿道等部位的生殖器疣则分别需借助阴道镜、肠镜以及尿道镜等内镜检查，凭外观特征进行诊断。

人乳头瘤病毒的具体症状：

(a)典型表现：肉眼可见的典型皮损：形态上为乳头瘤状、菜花状、颗粒状、鸡冠状等;

(b)亚临床表现为肉眼不易辨认，借助放大镜、醋白试验才能观察到，组织学和细胞学检测有典型HPV的病理改变;

(c)潜伏感染是HPV进入皮肤黏膜的细胞内，不引起任何临床表现和组织细胞学的异常，而通过分子生物学方法、核酸杂交等可在皮肤黏膜的细胞中检测出。

根治人乳头瘤病毒，双向免疫生物抗体激活疗法一网打尽

…… …… 余下全文

如何检查人乳头瘤病毒？据相关调查发现：很多患了尖锐湿疣的人们，对于HPV（人乳头瘤病毒）的诊治大多数没有一个特别好的认识，其实，hpv不是一种不能够够诊治的疾病，得了尖锐湿疣的人们面对这种疾病要有一个主动的心理状态。

如何检查人乳头瘤病毒？

对于HPV检测的情况，医生们大多数有自己的方式，期望对于得了尖锐湿疣的人们的诊治有所辅助。平时感染HPV病毒的人有不少，这些人当中感染的HPV病毒亚型各有不一样的，每种亚型所导致的疾病也有所不一样的。据了解，在性活跃的年轻妇女中HPV感染率最高，HPV病毒又称人乳头瘤病毒。因为此病毒引起的伤害类似于乳头状或菜花状等外观，因而得名。

HPV是一种嗜上皮性病毒，属双链闭环的小DNA病毒，包含约8000个碱基对。可引起人类良性的肿瘤和疣，如生长在生殖器官附近皮肤和粘膜上的人类寻常疣、尖锐湿疣以及生长在粘膜上的乳头状瘤。低危型HPV主要引起肛门皮肤及男人外生殖器、女人大小阴唇的尖锐湿疣疾病，病毒亚型有HPV6、11、30、39、42、43型及HPV44型。

高危型HPV除可引起外生殖器疣之外，还会引起外生殖器癌，宫颈癌及高度子宫颈上皮内瘤，病毒亚型主要有HPVl6、18、31、33、35、45、51、52、56、58型和HPV61。HPV病毒，尤其是高危型HPV的生殖道感染是宫颈上皮内瘤变和宫颈癌发生的必要条件。HPV病毒能够一直存在是宫颈疾病进展和宫颈癌发生的关键因素。妇女一直HPV感染比重复感染以及感染已清除者更容易得了宫颈癌。 一些幼儿一出生就被传染上HPV。这个传染源主要是来自自己的母亲。而且还有一定的潜伏期，所以，有的被传染上了到了小孩时期才会表现出来。其实特别多时候大多数是因为在分娩过程中胎儿经过胎盘感染HPV,还有的就是幼儿对于母体进行亲密的接触了。还有的一些因素就是吸烟饮酒。据不完全统计，吸烟者中HPV的得病人数比不吸烟者高4倍多，而且HPV的得病人数随得了尖锐湿疣的人烟龄和每日吸烟支数的增加而升高，同时吸烟能促进已稳定的HPV患病情况反复发作。

…… …… 余下全文

《人乳头瘤病毒核酸分型检测标准操作规程》

1. Intended Use目的

通过病毒核酸扩增定性检测人体宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒分型。

2. Sphere of Application适用范围

人乳头瘤病毒分型定性检测。

3. Principle of Test检验方法及原理

采用多重PCR技术对检测样品的核酸DNA进行扩增，并用包被有核酸探针的多种编码微球和扩增产物进行杂交，结果用流式阵点仪检测分析。流式荧光杂交法是将PCR扩增产物盒微球液进行混和，并经过杂交、荧光素标记、Luminex流式分析仪阅读得到相应的检测结果。微球杂交液中包含多种荧光编码微球，每种荧光荧光编码微球的表面都共价交联有与亚型对应的寡核苷酸探针，在杂交过程中探针特异性识别并结合PCR产物中的靶序列，经过和荧光素反应后形成微球-探针-扩增产物-荧光素的复合物，经Luminex流式分析仪阅读时，可获得每种复合物的微球编码及其对应的荧光强弱信号，最后经过透景HPV专用的分析软件判读相应的检测结果。

4. Specimen Collection使用的样本

4.1. 样本种类：阴道或尿道分泌物。

4.2. 收集方法：医护人员先以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈，用棉拭子将宫颈口过多的分泌

物擦去。取出宫颈刷置于宫颈口，单方向旋转4-5周以获得足量的上皮细胞样本，然后将宫颈刷头部放入洗脱管中，沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，旋紧洗脱管盖，做好样本标识，保持洗脱管直立放置。

第1 页 共7 页

《人乳头瘤病毒核酸分型检测标准操作规程》

4.3. 病人准备要求：月经正常妇女，在月经来潮后10-18天为最佳检查时间；检查前三天内不

要作阴道冲洗，不要用避孕药膏等阴道内用药物；检查前24小时不应有性行为；检查前不进行醋酸或碘液涂抹。

4.4. 样本容器的要求：专用样本保存液的容器。

4.5. 样本用量：50-200μl，应保证有足够的量用于检测。

…… …… 余下全文

人类乳头瘤病毒（HPV）的检测方法

全网发布：2011-06-23 21:23 发表者：陈继明 (访问人次：10778)

摘要：人类乳头瘤病毒（HPV）与宫颈癌的发生和发展关系密切，HPV的检测已是宫颈癌早期筛查的一个重要方面。HPV的检测和分型对于了解宫颈癌病情变化、指导治疗、判断预后以及疫苗改进均具有十分重要的价值。本文将就HPV的检测方法的进展作一小结。 关键词：人乳头瘤病毒（HPV），宫颈癌，检测，疫苗

Abstract: Human papilloma virus (HPV) is strongly correlated with the pathogenesis and development of cervical cancer, the testing of HPV has been an important aspect of early screening of cervical cancer. The testing and classification of HPV is invaluable for acknowledging the advance of the disease, treatment, prognosis and the improvement of HPV vaccine. A summarization will be made in this article concerning with the advance of the testing methods of HPV.

Key words: human papilloma virus (HPV), cervical cancer, testing methods, vaccine

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，占女性生殖器官恶性肿瘤的半数以上，严重威胁着妇女的健康。全世界每年大约有4万人患病，中国新发病例约计13万，占目前已发现的所有女性肿瘤的6%，是仅次于乳腺癌而引起妇女癌症相关死亡的重要原因。宫颈癌的发病机理目前尚不清楚，但已有很多研究证明，99%的宫颈癌组织中可检出人乳头瘤病毒(human papilloma virus, HPV)[1-2]。目前，已经明确HPV感染为宫颈癌前病变和浸润性宫颈癌发生的必要条件[3-4]。大量研究资料表明，HPV与宫颈癌及癌前病变密切相关，高危型HPV(HRHPV)感染与宫颈癌关系最为密切[5]。随着病变程度的加重，HPV的检出率也逐渐增高[6]。所以，许多专家提出将HPV的检测作为宫颈癌的一种筛查手段。目前，针对HPVDNA检测作为宫颈癌原始筛查方法以及与细胞学联合在筛查中的意义的研究报道较多[7-10]。本文将就HPV检测方法的相关内容进行小结，重点介绍目前应用最为广泛的PCR法和杂交捕获试验。 由于HPV至今尚不能在体外培养，又无合适的实验动物，因而对其检测主要依赖于形态学方法和分子生物学技术。目前HPV检测方法主要有细胞学法，斑点印迹法，荧光原位杂交法，Southern杂交法，多聚合酶链反应(PCR)法和杂交捕获法等。细胞学法敏感度和特异度较低；斑点印迹法具有放射性。目前较为公认的敏感度和特异度高的方法是捕获二代法；其它敏感度较高的方法有原位杂交，PCR法。但PCR法特异度很低，假阳性率较高；而核酶印迹原位杂交法复杂，不宜大规模临床使用。

…… …… 余下全文

人乳头瘤病毒分型检测应用于宫颈癌筛查研究进展

摘要：

关键词：人乳头瘤病毒；宫颈癌；基因型；HR-HPV；持续性感染

宫颈癌位于全球妇女恶性肿瘤发病率的第二位，其发病率仅次于乳腺癌，是女性常见恶性肿瘤之一。我国每年约有10万人罹患宫颈癌，且有80%的患者死亡于该病，近年来有年轻化趋势。随着宫颈癌筛查体系的建立及人乳头瘤分型检测工作的广泛开展，宫颈癌的发病率大幅度下降。本文就人乳头瘤病毒（HPV）感染与宫颈病变的关系及HPV分子检测方法作一综述。

1.HPV感染导致宫颈癌的致病机制：

早在20世纪70年代末期，有学者提出HPV与宫颈癌有关。此后，就HPV与宫颈癌的关系进行了大量的研究，直到19xx年国际癌症协会才确定HPV感染是宫颈癌发生的必要条件[1,2]。宫颈癌的发生和发展是一个先渐变后突变的过程。Sawaya等【4】认为由宫颈上皮细胞的低度不典型增生发展到高度不典型增生，平均只需要9年时间；但由高度不典型增生发展到浸润性癌仅需3个月到2年；由于宫颈癌的癌前病变阶段较长，其发生主要与持续反复的HPV感染有关，后者可提高宫颈癌风险250倍。因此，HPV检测对宫颈癌的筛查和早期诊断，有效阻断病变过程，从而降低发病率和死亡率具有非常重要的临床价值。

生殖道HPV感染属于性传播疾病，许多女性在性生活开始后的短时间内就可感染HPV，但多为一过性感染，仅少数发展为持续性感染，约2%的持续感染者最终发展为宫颈癌【5】。HPV基因分型和分子流行病学研究表明，99.7%以上宫颈癌标本中可检测出高危型HPV（HR-HPV），故HR-HPV感染与宫颈癌及癌前病变关系密切，是宫颈癌的主要危险因素。

尽管HR-HPV持续感染被认为是宫颈上皮细胞高度不典型增生的诱发因素，但对于“持续感染“的定义仍存在分歧。较早的观点认为，持续感染是指在同一宫颈标本中连续两次或以上检测到HPV。这种观点的缺陷在于，因为所定义的持续感染事实上可能是不连续的，很大程度取决于两次检测时间间隔，不同研究者设定的检测时间间隔为2个月到7个月不等

…… …… 余下全文

人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测及基因分型试剂技术审查指导原则（征求意见稿）

一、前言

本指导原则旨在指导注册申请人对人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测及基因分型试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。

本指导原则是针对人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测及基因分型试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要详细阐明理由，并对其科学合理性进行验证，提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。

二、适用范围

人乳头瘤病毒（human papillomavirus, HPV）属于乳多空病毒科的乳头瘤病毒属，是一种小分子的、无被膜包被的、环状双链DNA病毒，基因组长约8000碱基对（bp），分为3个功能区，即早期转录区（E区）、晚期转录区（L区）和非转录区（长

1

控制区，LCR）。HPV通过直接或间接接触污染物品或性传播感染人类。该病毒只能感染人的皮肤和粘膜上皮细胞，能引起人类皮肤的多种乳头状瘤或疣及粘膜生殖道上皮增生性损伤。

HPV广泛存在于自然界，据统计70%～80%的女性在其一生中会有至少一次的HPV感染。但大多数感染为自限性，超过90％的感染的女性会出现一种有效的免疫应答，在没有任何长期的健康干预时在6到24个月之间可以清除感染。而持续性的高危型HPV感染则是导致宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的主要原因。根据HPV各型别致病力大小或致癌危险性大小不同可将感染生殖道和肛门的HPV分为低危型和高危型两大类。高危型HPV感染被视为几乎所有宫颈癌发生的必要条件，全球范围的研究结果显示，在99.7%的宫颈癌患者体内检测到高危型HPV DNA的存在，其中HPV16型、18型、45型和31型感染占80%。低危型HPV一般与尖锐湿疣或低度鳞状上皮内病变相关，极少引起浸润癌。关于高危型与低危型的划分，国际上许多机构都给出了参考建议，依据WHO国际癌症研究机构（IARC）的研究成果，本指导原则建议将HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、73等15种基因型列为高危型，本指导原则中所述的检测试剂及其要求均只针对用于宫颈癌相关预期用途的（上述15种）高危型HPV核酸检测，如申报产品涉及上述15种型别以外的其他HPV基因型，则申请人需提出明确的理由和依据，且应得到国际有关权威机构的文献支持。

…… …… 余下全文