篇一 :实验六 氨基酸的纸层析法

氨基酸的纸层析法

一.目的

了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。

二、原理

以滤纸为支持物的层析法,称为纸层析法。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时,水为静止相,他与滤纸纤维亲和力强;有机溶剂为流动相,它与滤纸纤维亲和力弱。有机溶剂在滤纸上又下向上移动的,称为上行法;有上向下移动的,称为下行法。  将样品在滤纸上确定的原点处展层,由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配,且他们的分离系数各不相同,所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同,于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来,形成距原点不等的层析点。

在一定条件下(室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变),不同的氨基酸有固定的移动速率(Rf值)Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。用混合氨基酸做样品时,如果只用一种溶剂展层,由于某些氨基酸的移动速率相同或相近,就不能将它们分开,为此,当用一种溶剂展层后,可将滤纸旋转90度,以第一次所的层析点为原点,在用另一溶剂展层,从而达到分离的目的。这种方法称为双向层析法。

本试验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。

三、实验仪器

   1、 新华滤纸

   2、 层析缸

   3、 细线

   4、 点样管

   5、 橡皮筋

   6、 电吹风

   7、 喷雾器

四、实验试剂

1、 混合氨基酸(精氨酸,酪氨酸,苯丙氨酸)

2、展层剂:正丁醇:12%氨水:95%乙醇:蒸馏水=13:3:3:1(v:v)

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篇二 :氨基酸的薄层层析实验报告

生物化学实验报告

姓    名:     XXX     

学    号:    XXXXXX      

专业年级:   临床八年制 __

组    别:    第二实验室    


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篇三 :实验四 氨基酸的纸层析法

姓名郭沈杰年级专业2012级生物科学同组者蔡萍萍

学号:12050011012

实验四 氨基酸的纸层析法

一、实验目的

了解并掌握氨基酸纸层析法的原理和方法。

二、实验原理

以滤纸为支持物的层析法,称为纸层析法。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时,水为固定相,它与滤纸纤维亲和力强;有机溶剂为流动相,它与滤纸纤维亲和力弱。有机溶剂在滤纸上又下向上移动的,称为上行法;有上向下移动的,称为下行法。

将样品在滤纸上确定的原点处展层,由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配,且他们的分离系数各不相同,所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同,于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来,形成距原点不等的层析点。

       在一定条件下(室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变),不同的氨基酸有固定的移动速率(Rf值)

Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离

       混合氨基酸做样品时,如果只用一种溶剂展层,由于某些氨基酸的移动速率相同或相近,就不能将它们分开,为此,当用一种溶剂展层后,可将滤纸旋转90度,以第一次所的层析点为原点,在用另一溶剂展层,从而达到分离的目的。这种方法称为双向层析法。

       氨基酸无色,利用茚三酮反应,可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。

本实验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有精氨酸、苯丙氨酸。

三、实验仪器

1、 新华滤纸

   2、 层析缸

   3、 细线

   4、 点样管

   5、 橡皮筋

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篇四 :生物化学实验 氨基酸的纸层析法

实验    氨基酸的纸层析法

一、目的

了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。

二、原理

以滤纸为支持物的层析法,称为纸层析法。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时,水为静止相,他与滤纸纤维亲和力强;有机溶剂为流动相,它与滤纸纤维亲和力弱。有机溶剂在滤纸上又下向上移动的,称为上行法;有上向下移动的,称为下行法。

将样品在滤纸上确定的原点处展层,由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配,且他们的分离系数各不相同,所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同,于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来,形成距原点不等的层析点。在一定条件下(室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变),不同的氨基酸有固定的移动速率(Rf值)

Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离

用混合氨基酸做样品时,如果只用一种溶剂展层,由于某些氨基酸的移动速率相同或相近,就不能将它们分开,为此,当用一种溶剂展层后,可将滤纸旋转90度,以第一次所的层析点为原点,在用另一溶剂展层,从而达到分离的目的。这种方法称为双向层析法。

本试验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。

三、实验仪器

   1、 新华滤纸

   2、 层析缸

   3、 细线

   4、 点样管

   5、 橡皮筋

   6、 电吹风

   7、 喷雾器

四、实验试剂

1、混合氨基酸溶液(甘氨酸,苯丙氨酸),甘氨酸溶液,苯丙氨酸溶液

2、展层剂:正丁醇:12%氨水:95%乙醇:蒸馏水=13:3:3:1(v:v)

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篇五 :生物化学实验二 ——纸层析法分离氨基酸

生命学院 生物化学实验

实验二 氨基酸的分离鉴定——纸层析法

一、 实验目的

1、 掌握氨基酸纸层析的方法和原理,学会分析待测样品的氨基酸成分。

2、 学习用纸层析法分离、鉴定氨基酸

二、实验原理

⑴ 纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维上的羟基具有亲水性,吸附一层水作为固定相,有机溶剂为流动相。当有机相流经固定相时,物质在两相间不断分配而得到分离。

⑵ 溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示:

⑶ Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离

⑷ 在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂

系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。

三、 实验器材

a) 大烧杯(5000mL):1只/组

b) 毛细管。

c) 喷雾器:公用。

d) 培养皿:1只/组。

e) 层析滤纸(长22cm、宽14cm的新华一号滤纸):1张/组。

f) 直尺、铅笔:自备。

g) 电吹风:1只/组。

h) 托盘、针、白线:1套/组。

i) 手套:1双/组。

j) 塑料薄膜:公用。

k) 小烧杯:50mL,1只/组。

四、 实验试剂

(1)扩展剂:将4体积正丁醇和1体积冰醋酸放入分液漏斗中,与5体积水混合,充分振荡,静置后分层,弃去下层水层。

(2)氨基酸溶液:0.5%的已知氨基酸溶液3种(亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸,脯氨酸氨酸),0.5%的待测氨基酸液1种。

(3)显色剂:0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。

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生命学院 生物化学实验

五、实验操作

检查培养皿是否干燥、洁净;若否,将其洗净并置于干燥箱内120℃烘干。

(1)平衡:剪一大块塑料薄膜铺在桌面上,将层析缸或大烧杯到置于塑料薄膜上,再把盛有约20mL展层溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或大烧杯中,用塑料薄膜密封起来,平衡20min。

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篇六 :实验技能大赛-氨基酸纸层析法

氨基酸纸层析法

一、实验目的

1.学习并了解分配层析的原理;

2.掌握纸层析法分离氨基酸的原理和步骤;

3.掌握纸层析法分离氨基酸以鉴定氨基酸的方法。

二、实验原理

(一)纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术,可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。

纸层析法是用滤纸为支持物进行层析的方法,所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成。层析溶剂(又称推动剂),是选用有机溶剂和水组成的。滤纸纤维素与水有较强的亲和力(纤维素分子的葡萄糖基上的-OH基与水通过氢键相作用)能吸附很多水分,一般达滤纸重的22%左右(其中约有6%的水与纤维素结合成复合物),由于这部分水扩散作用降低形成固定相;而推动剂中的有机溶剂与滤纸的亲和力很弱,可在滤纸的毛细管中自由流动,形成流动相。层析时,点有样品的滤纸一端浸入推动剂中,有机溶剂连续不断地通过点有样品的原点处,使其上的溶质依据本身的分配系数在两相间进行分配。

溶剂由下向上移动的,称上行法;由上向下移动的,称下行法。将样品点在滤纸上(此点称为原点),进行展层。随着有机溶剂不断向前移动,溶质被携带到新的无溶质区并继续在两相间发生可逆的重新分配,同时溶质离开原点不断向前移动,溶质中各组分的分配系数K不同,前进中出现了移动速率差异,通过一定时间的层析,不同组分便实现了分离。 溶质在滤纸上的移动速率以Rf值表示:

Rf?原点到层析斑点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离

在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。只要条件(如温度、展层溶剂的组成)不变,Rf值是常数,故可根据Rf值作定性判断。

(二)样品中如有多种氨基酸,其中某些氨基酸的Rf值相同或相近,此时如只用一种溶剂展层,就不能将它们分开。为此,当用一种溶剂展层后,将滤纸转动90度,再用另一溶剂展层,从而达到分离目的,这种方法称为双向纸层析法。

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篇七 :实验一 纸层析法分离氨基酸

实验一  纸层析法分离氨基酸

一、实验目的

1.掌握纸层析的基本技术

2.学习用纸层析法分离、鉴定氨基酸

二、实验原理

    纸层析是以滤纸作为支持物的分配层析法:利用不同物质在同一推动剂中具有不同的分配系数、经层析而达到分离的目的。在一定条件下,一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数,若以K表示分配系数:

slide0012_image018层析溶剂(亦称展层剂或推动剂)是选用特定的有机溶剂和水组成的。滤纸纤维素与水有较强的亲和力(葡萄糖基的-OH基能与H2O通过氢键相互作用),能吸附很多水分(可达22%滤纸重,其中约有6%的水与纤维素结合成复合物),这部分被吸附的水因扩散作用降低而形成固定相。反之,展层剂中的有机溶剂与滤纸的亲和力很弱,可在滤纸的毛细管中自由流动而形成流动相。层析时,点有样品的滤纸一端浸入展层剂中,有机溶剂连续不断地通过点有样品的原点处,使其的溶质依据自身的分配系数在这两相间不断进行分配,即随着有机溶剂不断向前移动,溶质被携带到新的无溶质区并继续在两相间发生可逆的重新分配,结果使溶质离开原点不断向前移动。由于溶质中各组分的分配系数不同,导致前行中出现移动速率差异,因而通过一定时间的层析,样品中的不同组分即可实现分离。

层析中某物质的移动速率以Rf值表示:

                         

各种化合物在恒定条件下,层析时都有其一定的Rf值,借此可达到定性、鉴别的目的。

应当注意的是,溶质的结构与极性、溶剂系统的物质组成与比例、pH值、滤纸质地以及层析温度和时间等因素都会影响Rf值。

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篇八 :氨基酸分析实验报告

南方医科大学

生物化学实验报告

姓    名:              

学    号:                  

专业年级:                  

组    别:                  

生物化学与分子生物学实验教学中心

一、实验目的

  1. 掌握薄层层析法的一般原理。
  2. 掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。
  3. 掌握如何根据移动速率(Rf值)来鉴定被分离的物质(即氨基酸混合液)。

二、实验原理

(一)           薄层层析

1.层析技术是利用化合物中各组分的物理性质(如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)的不同,使各组分不同程度地分布在两相中,随着流动相从固定相上流过,不同组分以不同速度而最终被分离。

1)   特点:分离效率高,能分离各种性质相类似的物质。不仅可用于少量物质的分离纯化,也可用于大量物质的分离纯化和制备。

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