HC2介绍

●Digene杂交捕获二代测试是目前唯一经美国食品和药品监督管理局FDA、欧洲CE和中国食品药品监督管理局SFDA共同认证的领先检测技术它利用分子生物学技术在分子DNA水平直接检测高危型HPV病毒。这项分子ELISA技术通过将RNA探针与单束HPVDNA杂交随后通过化学发光检测到RNA/DNA杂交物。HC2的临床敏感度很高大多数发表的结果显示敏感度超过99。它弥补了细胞学检查的不足使宫颈癌在感染期尚无细胞病变即敲响警钟使检验者远离宫颈癌健康地生活。

●HC2检测的最大优越性之一是发现高危型HPV阳性而细胞学图片正常的妇女因这一人群中10会在四年内发展成CINⅢⅢ期宫颈上皮内瘤样变。

子宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一。在全球范围内每年约有20多万女性死于宫颈癌。

很多女性朋友不禁想问有没有可以预知癌症预防癌症的办法呢本期我们要介绍的HC2检测即基因杂交捕获Ⅱ代技术对于宫颈癌就有早期发现、早期预防的作用。

在三八妇女节到来之际希望有更多的女性朋友能够认识和了解这一福音并且亲身体验对自己的身体负起责任。

专家有话1.1应做宫颈癌筛查的人群有关调查资料显示我国青少年目前性成熟年龄普遍比上个世纪70年代提前了45岁在21岁的年轻人当中79有过婚前性行为在农村地区超过80婚前性行为呈现出低龄化的趋势。

有资料表明早婚早育、有流产史、性病史、拥有多名性伴侣的女性都是宫颈癌的高发人群。有多个性伴侣的妇女患宫颈癌的危险性比只有一个性伴侣者高23倍以上。

因此建议任何有3年以上性行为或21岁以上有性行为的妇女应该开始定期做宫颈癌的筛查65岁后患宫颈癌的危险性极低故一般不主张对65岁以上的妇女进行宫颈癌筛查。

1.2警惕阴道出血宫颈癌因为癌变部位位于子宫颈上在癌变破裂时会出现不规则的出血有时性交也会引发出血著名妇科专家林巧稚就曾经强调过“凡阴道出血都要看”因为对妇科疾病来说这是一个危险的信号不能放任不管。

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HPV检测及临床应用

人乳头瘤病毒概述

人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)属于乳头多瘤空泡病毒科（papovaviridae）乳头瘤病毒属，是一种可引起人类黏膜组织良性及恶性肿瘤的病毒。它于19xx年由Strauss在电镜下发现，是由DNA核心和蛋白衣壳组成的无包膜双链环状DNA病毒，其核心是由7800～7900个碱基对以共价键组成，含有遗传信息的密环状双链DNA，外为72个壳粒包绕，构成对称型的20面体。病毒无包膜，直径为55nm，分子量为54000道尔顿。其感染主要是上皮组织，具有高度的宿主特异性，对人体特异部位的上皮细胞具有亲和力。HPV在人体的温润条件中最易生长增殖，性接触为主要的传染途径，病期在3个月左右者传染性最强。少数情况下，有可能通过接触污染物品感染，如内裤、浴盆、毛巾等传播。分娩过程中，胎儿经过母亲HPV的感染产道或出生后与患母密切接触均可感染。

HPV在人群中极易传播扩散，可通过直接或间接接触交叉传染，其感染部位隐蔽，发病隐匿，不易早期发现，可致多种增生性病变，在女性生殖系统所引起的最常见的恶性肿瘤为宫颈癌。全世界每年约有50万妇女宫颈癌新发病例，其中亚洲约占38万；每年约有23万女性死于子宫颈癌。在不同地区、不同经济状况的国家宫颈癌的发病率和死亡率有着显著的差别，其中80%的病例发生在发展中国家。我国每年约有15万宫颈癌新发病例，每年约有8万人死于子宫颈癌，其死亡率居妇科肿瘤的第二位。近年来，宫颈癌病人数目在逐渐上升，并呈年轻化的趋势。

对宫颈癌的病因学研究可知，HPV感染是子宫颈癌的主要致病因素，99.7%宫颈癌患者存在HPV感染。目前，宫颈癌是人类所有癌症中唯一原因明确、早发现可治疗的癌症，其早期治疗的5年生存率接近100%，晚期治疗5年生存率为20-50%。筛查是目前预防和早期诊断宫颈癌的主要手段。世界各国的妇产科学会均推荐将HPV检测用于宫颈癌的早期筛查，以浓缩高风险人群，便于进行有效的监控、早期发现宫颈癌。

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1.目的：明确高危型人乳头瘤病毒核酸定量检测的操作规程，指导检验人员正确进行巨细胞病毒核酸定量的检测。

2.适用范围：

2.1适用于进行高危型人乳头瘤病毒核酸定量检测的检验人员。

2.2适合仪器：LightCycler480型核酸扩增荧光检测仪

2.3方法原理：采用PCR方法结合荧光探针的扩增技术

2.4样品要求：宫颈脱落细胞

3.职责：实验操作人员应严格按操作规程进行实验。

4.试剂来源：潮州凯普生物化学有限公司高危型人乳头瘤病毒核酸定量检测试剂盒。

5.质控物：阴性、阳性对照及阳性参控品系列均来源于试剂盒

6.标准操作：

6.1 试剂准备（在试剂准备区操作）

6.1.1将试剂盒及其它所需试剂置室温解冻（临用前取出，用后立即放回冰箱，反复冻融不可超过三次），取出PCR MIX,室温下避光解冻，上下颠倒混匀后，8000转/分钟10s从试剂盒中取出DVA聚合酶，8000转/分钟lOs。

6.1.2根据当次实验标本量，取出相应试剂（1管=17.5ulPCR MIX +0.5ul DVA聚合酶）总的需求量于一管中（其余随即放回原温度保存），如所需要的管数为n  (n=标本数+1空白管对照+1管阳性对照) 取PCR反应管转移至样本制备区。

6.2样本处理(在样本处理区进行)

6.2.1.取宫颈脱落细胞样本0. 5ml~1ml(如果细胞数量少可以加大体积到2m1)

6.2.2.  13000转/分钟离心1分钟

6.2.3.弃上清，加入0.5m1细胞保存液重悬细胞

6.2.4.  13000转/分钟离心1分钟，尽量弃干净上清

6.2.5.每样本加入50ul细胞裂解液，充分振荡重悬细胞，煮沸10分钟。

6.2.6.   13000转/分钟离心10分钟，保留上清备用(上清中为释放的DNA)。

6.2.7取上清2.0ul作为PCR扩增的模板，其余保存于一20℃

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HPV基因分型检测项目

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■ 山东皮肤病医院病理科 陈学超

HPV是人乳头状病毒的英文缩写，是一类在自然界广泛存在的DNA病毒。人类感染HPV十分普遍，感染率也很高。在性活跃人群中，20%～80%以上的人有HPV感染史。HPV在温暖潮湿的环境中特别容易生存增殖，并且病毒可自身接种，故男女两性的外生殖器是最易感染的部位。

HPV感染生殖道是一个长期的过程，可潜伏在细胞内若干年，一旦机体免疫力降低，潜伏的病毒可恢复活动。人类乳头状瘤病毒(HPV)与部分癌的发生有关，特别是宫颈癌。19xx年WHO已将HPV确定为宫颈癌的病因。可以这么说：没有HPV感染，就不会发生宫颈癌。但是，这并不是说感染了HPV就一定会得宫颈癌。

事实上，70%～80%的女性在其一生中都曾感染过HPV，绝大多数通过自身的免疫力，在感染后的1～2年内自行清除。借用某位教授的话说：“女性感染HPV就像得了感冒一样普遍”。所以，即使查出有HPV感染，也大可不必紧张。

HPV有高危型和低危型之分，一般认为，高危型HPV与宫颈癌发病有关，低危型HPV与生殖道良性病变有关。只有持续的感染高危型HPV才会有发生宫颈癌的风险。即使是高危型HPV，它的毒性(致癌性)也有强弱之分。

因此，对于性病患者来讲，无论男性或女患者，定期检测HPV尤其是检测HPV的型别非常重要，可以通过检测，早期治疗，达到预防或减少相关癌症尤其是宫颈癌的患病风险

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关于定性及定量技术在HPV检测应用的情况说明

1、取样问题

HPV检测所需样本为宫颈脱落细胞，而宫颈脱落细胞取样并不能像取血液样本那样可以标准化，宫颈脱落细胞取样不能完全标准化，会因为取样人的不同、甚至同一个人不同时间取样都会造成取出来的宫颈脱落细胞的数量不同，这样并不能真真反馈到病人体内的病毒含量；以治疗前后比较为例，治疗前取样1000个细胞，病毒检测为1000，而治疗后取样取到500个，这个时候病毒检测出是500，这样的检测不能说明是因为治疗有效而降低病毒浓度。

2、学术价值

目前有很多学术文章支持，HPV不同型别与宫颈癌的危险度有很高的相关性，而且不同地区HPV的感染型别、宫颈病变的不同阶段HPV感染型别的不同均有文章支持；反而对于HPV病毒载量与宫颈癌之间关系的学术文章支持很少（除了部分使用HC-II产品以外，因为他们本身就宣传这个卖点）

目前宫颈癌研究的热点是（1）研究HPV不同基因型别与宫颈病变不同进程的关系，（2）单一型HPV感染与多重型HPV感染对宫颈癌病程是否有加速作用，

（3）一些HPV基因型别是否对引起皮肤癌、尖锐湿疣等其他部位癌的相关性，

（4）不同地区不同民族HPV基因亚型感染的区域等等。20xx年美国FDA批准的世界唯一的抗HPV的疫苗（HPV16，18，6，11四价疫苗）也是要以HPV基因分型检测为前提才能够使用，而且在中国我们目前知道的是 HPV52，58型的感染率高过HPV18型，而且中国地区广大，民族众多，对于不同地区HPV基因型别的感染状态还有待于深入的研究，这也就需要HPV 基因分型检测。 国内外权威期刊自20xx年开始就很少见使用HC-II此类不能区分HPV基因型别检测产品的文章，而针对与使用凯普HPV基因分型检测的文章发表越来越多。

“Viral load of human papillomavirus and risk of cin3 or cervical cancer”

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HPV检测及临床应用

人乳头瘤病毒概述

人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)属于乳头多瘤空泡病毒科（papovaviridae）乳头瘤病毒属，是一种可引起人类黏膜组织良性及恶性肿瘤的病毒。它于19xx年由Strauss在电镜下发现，是由DNA核心和蛋白衣壳组成的无包膜双链环状DNA病毒，其核心是由7800～7900个碱基对以共价键组成，含有遗传信息的密环状双链DNA，外为72个壳粒包绕，构成对称型的20面体。病毒无包膜，直径为55nm，分子量为54000道尔顿。其感染主要是上皮组织，具有高度的宿主特异性，对人体特异部位的上皮细胞具有亲和力。HPV在人体的温润条件中最易生长增殖，性接触为主要的传染途径，病期在3个月左右者传染性最强。少数情况下，有可能通过接触污染物品感染，如内裤、浴盆、毛巾等传播。分娩过程中，胎儿经过母亲HPV的感染产道或出生后与患母密切接触均可感染。

HPV在人群中极易传播扩散，可通过直接或间接接触交叉传染，其感染部位隐蔽，发病隐匿，不易早期发现，可致多种增生性病变，在女性生殖系统所引起的最常见的恶性肿瘤为宫颈癌。全世界每年约有50万妇女宫颈癌新发病例，其中亚洲约占38万；每年约有23万女性死于子宫颈癌。在不同地区、不同经济状况的国家宫颈癌的发病率和死亡率有着显著的差别，其中80%的病例发生在发展中国家。我国每年约有15万宫颈癌新发病例，每年约有8万人死于子宫颈癌，其死亡率居妇科肿瘤的第二位。近年来，宫颈癌病人数目在逐渐上升，并呈年轻化的趋势。

对宫颈癌的病因学研究可知，HPV感染是子宫颈癌的主要致病因素，99.7%宫颈癌患者存在HPV感染。目前，宫颈癌是人类所有癌症中唯一原因明确、早发现可治疗的癌症，其早期治疗的5年生存率接近100%，晚期治疗5年生存率为20-50%。筛查是目前预防和早期诊断宫颈癌的主要手段。世界各国的妇产科学会均推荐将HPV检测用于宫颈癌的早期筛查，以浓缩高风险人群，便于进行有效的监控、早期发现宫颈癌。

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