实验报告

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白细胞计数和分类

目的：掌握血涂片制备的操作要领、瑞氏染色方法、正常外周血五种白细胞形态

特点、

原理：各种白细胞必须经过染色，才易于区分其类别。常用者为瑞氏（Wright’s）

染色法和姬姆萨(Giemsa)染色法。测定外周血液中各种白细胞的相对比值，以观察其数量、形态和质量变化，通过显微镜观察染色血涂片，计算血液中各类白细胞的百分率，称为白细胞分类计数。利用白细胞总数和各类白细胞的百分率，即可计算每mm3血液中各类白细胞的绝对值。

实验器材： 香柏油、盖玻片、推片、采血针或注射器、小滴管、消毒棉球、瑞

氏染液、pH6.4~6.8磷酸盐缓冲液、蒸馏水、计数板及专用盖片、针 1ml刻度移液管、1ml EP管、光学显微镜。20ul刻度移液管、推片

实验步骤

白细胞分类

1．血片制作：

取一滴血，滴于洁净无油脂的玻片一端。左手持玻片，右手再取边缘光滑的另一玻片作为推片。将推片边缘置于血滴前方，然后向后拉，当与血滴接触后，血即均匀附在二玻片之间。此后以二玻片约呈30—45度的角度平稳地向前推至玻片另一端。推时角度要一致，用力应均匀，即推出均匀的血膜（血膜不可过厚、过薄）。将制好的血涂片晾干，不可加热。

注：（1）良好涂片标准：

１) 呈头、体、尾舌形

２) 血膜厚薄适宜

３) 两边留有空隙 （2）涂片好坏与下列因素有关： 1）血滴大小 2）推片与玻片之间角度 3）推片速度

2、血涂片的染色步骤：

（1）用蜡笔在血膜两端各划一道线，以免染料外溢，置涂片于染色架上。

（2）滴加瑞氏染液，共计七八滴数，以盖满血膜为度，静置1分钟。

（3）再滴加等量的磷酸缓冲盐溶液，轻轻摇动，并轻吹液体使染色液与缓冲液混合均匀，静置15分钟。

（4）用清水冲洗。切勿先倾去染液再冲洗，否则沉淀物附于血膜上不宜出去。冲洗后斜置血涂片于空气中干燥。或先用滤纸吸取水分迅速干燥，即可镜检。

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《实验诊断学》实验报告

实验一 红细胞、白细胞计数

一. 实验原理

一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后，充入血细胞计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数。用稀醋酸液将血液稀释并破坏红细胞，混匀后充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数。根据稀释倍数和计数的容积，换算求得每升血液中的红细胞数量以及白细胞数量。

二. 实验内容与步骤

实验材料：

显微镜、微量吸管、毛细吸管、改良Neubauer计数板、盖玻片、小试管、RBC稀释液、WBC稀释液、正常人的全血、纱布

实验步骤：

1、红细胞计数准备：

① 加稀释液，用微量吸管吸取RBC稀释液蒸馏水2.0 ml加到小试管内。 ② 取血，毛细吸管取血10 μl。

③ 用纱布擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2-3次，立即混匀。

2、白细胞计数准备：

WBC稀释液:

冰醋酸3.0 mL（破坏红细胞）

蒸馏水97.0 mL

亚甲蓝（染色）

① 小试管加WBC稀释液0.38 mL。

② 采血，微量吸管取血20 μL。

③ 擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2-3次，立即混匀。

3、充池、观察：

① 将计数板及盖玻片檫净，将盖玻片覆盖在计数板上。

② 用滴管吸取混均的红细胞悬液充入上方计数室，静置3-5 min，高倍镜

下计数；白细胞悬液充入下方计数室，静置2-3 min，低倍镜下计数。

③ 观察计数，红细胞，高倍镜下计数中央大方格内四角的4个中方格和正中的1个中方格的红细胞，压线细胞的计数按照数上不数下，数左不数右的原则。计数时按照弓形的计数方式，以免漏数或多数。

④ 用低倍镜计数出计数池内四角大方格中的白细胞总数。

三. 实验结果

1、红细胞计数实验结果：

5个中方格内RBC的计数／个=24+27+32+22+25

根据计算公式：

RBC/L＝5个中方格内RBC数×5×10×200×106

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白细胞计数和分类计数

第一临床医学院 08中七（2）班 董盼攀 20081150226

一、实验目的

1.1掌握显微镜法白细胞计数的原理及方法数的方法

1.2掌握显微镜外周血白细胞分类的方法及各种白细胞的正常形态

二、实验方法

2.1白细胞计数

2.1.1加稀释液 用吸管吸取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。

2.1.2吸取血液 用微量吸管吸取新鲜全血或末梢血20ul，擦去管尖外部余血。将吸管插入小试管中白细胞稀释液的底部，轻轻放出血液，并吸取上层白细胞稀释液清洗吸管2-3次

2.1.3混匀 将试管中血液与稀释液混匀，待细胞悬液完全变为棕褐色

2.1.4冲池 再次将小试管中的细胞悬液混匀。用滴棒蘸取细胞悬液1滴，充入改良Neubauer计数板的计数池中，室温静置2-3min，待白细胞完全下沉。

2.1.5计数 在低倍镜下计数四角4个大方格内的白细胞总数

2.1

计算 4个大方格内白细胞数（N）*10*20白细胞??N*50（109/L）4

2.2白细胞分类

2.2.1染色 将血涂片用瑞氏染液染色，冲洗干净，自然干燥后待用

2.2.2低倍镜观察 低倍镜下观察白细胞的分布和染色情况

2.2.3油镜观察 选择血涂片体尾交界处细胞分布均匀，着色良好的区域，按一定的方向顺序对所见到的每一个白细胞进行分类，并用白细胞分类计数器做好记录，共记录100个白细胞。

2.2.4计算 求出各类细胞所占的百分率。

三、实验结果

3.1 白细胞总数 白细胞=122*10*20/4=6.1×109/L

3.2各类细胞所占的百分率

表1、 5种白细胞的百分数

细胞类型

中性粒细胞（N） 嗜酸性粒细胞（E）

嗜碱性粒细胞（B）

淋巴细胞（L）

单核细胞（M） 百分数（%） 61 0 0 35 4

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一. 实验原理

用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数量，经换算求出每升血液中的红细胞数量。用白细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液注入血红细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量。

二. 实验内容与步骤

   1、红细胞计数

  （1）器材：显微镜、微量吸管、改良Neubauer计数板

  （2）试剂：RBC稀释液 ①Hayem 稀释液：NaCl, Na2SO4，HgCl2 ②枸橼酸钠甲醛盐水溶液:枸橼酸钠，甲醛，NaCl ③生理盐水或含1%甲醛的生理盐水：仅在急诊或无上述两种稀释液时临时使用

  （3）标本：外周血或抗凝血（EDTA抗凝)

  （4）操作步骤：①小试管加RBC稀释液2.0 ml。

                 ②采血，取血10 μl。

                 ③擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2~3次，立

                   即混匀。

                 ④混匀后充入计数室，静置3~5 min，高倍镜下计数（用高

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基础生物学技术实验 吴雪薇 121140059 C1组 2013-2-25

实验一：酵母菌的计数和血球计数板的使用

吴雪薇 121140059

一、实验目的

1、复习显微镜的使用。

2、学习血球计数板的使用。

3、计数并计算酵母菌的含量。

二、实验原理

1、血球计数板被用以对人体内红、白血球进行显微计数之用，也常用于计算一

些细菌、真菌、酵母等微生物的数量，是一种常见的生物学工具 。

2、血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中

间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大方格，中央的一大方格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个中方格（大方格用三线隔开），而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成16个小方格。（本实验使用的是第二种。）但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。

3、因此，数出小方格中酵母菌细胞的数量后，计算小方格内酵母菌细胞数的平

均值，再乘以25可得每0.1mm3内酵母菌细胞的数量，继而计算出每ml酵母菌细胞数。

4、血细胞计数的误差分别来源于技术误差和固有误差。其中由于操作人员采血

不顺利，器材处理、使用不当，稀释不准确，细胞识别错误等因素所造成的误差属技术误差；而由于仪器（计数板、盖片、吸管等）不够准确与精密带来的误差称仪器误差，由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差或计数域误差。仪器误差和分布误差统称为固有误差或系统误差。技术误差和仪器误差可通过规范操作、提高熟练程度和校正仪器而避免或纠正，但细胞分布误差却难于彻底消除。

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实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作：

1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算：

细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104

说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：

1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3 而 1ml=1000mm3

（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液）

细胞计数与存活测试

1. 原理：

1.1. 计算细胞数目可用血球计数盘或是Coulter counter 粒子计数器自动计数。

1.2. 血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber 中细刻9 个1 mm2 大正方形， 其中4 个角落之正方形再细刻16 个小格，深度均为0.1 mm。当chamber 上方 盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1 mm2 x 0.1 mm=1.0 x 10-4 ml。使用时，计 数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以104，即为每ml 中之细胞 数目。

细胞计数要点：

①进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于1×107 L-1，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中。

②要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。

③取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其时多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀，以求计数准确。

④数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照1个细胞计算。如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计右线，不计左线。

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