1.实验目的:
(1)通过本次实验学习和掌握碱裂解法提取质粒;
(2)通过本次实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术;
2.实验材料及用品
(1)实验仪器(apparatus):
恒温培养箱(Constant temperature incubator)、恒温摇床(Constant temperature shaking table)、高速离心机(High speed centrifuge)、漩涡振荡器(Vortex mixer)、超净工作台(Bechtop)、高压灭菌锅(Autoclave)、微量加样器(Pipettes)、烧杯( beaker)、量筒 (graduated cylinder)、 玻璃棒(stir bar)、 微波炉(microwave)、 天平(Pan balance)、电泳梳子( comb)、电泳槽 (electrophoresis tank)、 电泳器 (Electro-phoresis System)、 紫外灯(Ultraviolet transilluminator )
3)、材料与试剂(Reagents):
①溶液I(Solution Ⅰ):
50mmol/L 葡萄糖;25mmol/L 三羟基甲基氨基甲烷(Tris)Tris-HCl(pH8.0);10mmol/L 乙二胺四乙酸(EDTA) pH8.0
溶液I可成批配制,每瓶约100ml,10磅高压蒸气灭菌15分钟,贮存于4℃。
②溶液Ⅱ(Solution Ⅱ):新鲜配制,等体积混合
0.2mol/L NaOH(临用前用10mol/L贮存液现用现稀释);1% SDS (可用10%贮存液稀释配制)注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。
③溶液III (Solution Ⅲ,100mL):加上后混匀会形成絮状沉淀
…… …… 余下全文